本文關(guān)鍵詞：HCMV體外感染SD乳鼠海馬神經(jīng)細胞致鈣代謝障礙機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）體外感染SD乳鼠海馬神經(jīng)細胞模型，探討HCMV感染對體外培養(yǎng)的SD乳鼠海馬神經(jīng)細胞內(nèi)鈣離子影響及其機制。方法取24小時內(nèi)出生的SPF級SD乳鼠雌雄各10只，通過神經(jīng)細胞原代培養(yǎng)，建立原代乳鼠海馬神經(jīng)元單層細胞；在體外培養(yǎng)的第8天（In vitro8th）將生長良好的單層神經(jīng)元細胞，建立HCMV體外感染SD乳鼠海馬神經(jīng)細胞模型，在接種后12h、48h分別將單層細胞經(jīng)mRNA提取經(jīng)行RT-PCR和多聚甲醛固定神經(jīng)細胞培養(yǎng)物然后經(jīng)行免疫組織化學；檢測神經(jīng)細胞培養(yǎng)物上的HCMV的即早期蛋白基因（IE gene）的轉(zhuǎn)錄和早期蛋白(E)表達情況，證明HCMV接種到SD乳鼠海馬神經(jīng)細胞上的復(fù)制性和增殖性；對體外感染模型驗證。建模成功后進行分組，把培養(yǎng)的神經(jīng)細胞隨機分為HCMV感染組（神經(jīng)細胞培養(yǎng)液加入病毒混懸液50ul）、HCMV+MK-801組（神經(jīng)細胞培養(yǎng)物上加病毒混懸液50ul和MK-801）、MK-801組(在神經(jīng)細胞培養(yǎng)物上加入MK-801)和對照組(在神經(jīng)細胞培養(yǎng)物上加入人胚肺成纖維細胞上清液)；每組設(shè)10個復(fù)孔。在接種HCMV24h、48h、96h后分別在倒置顯微鏡觀察感染組和對照組神經(jīng)細胞的變化；在分組處理后24小時用Fluo-3AM鈣離子探針進行熒光染色，分別在激光共聚焦顯微鏡下檢測各組神經(jīng)元游離鈣離子的熒光強度值。結(jié)果接種HCMV24h后神經(jīng)元后出現(xiàn)逐漸出現(xiàn)變圓、腫脹，96h后大部分細胞裂解消失；通過RT-PCR和免疫組織化學；結(jié)果顯示在HCMV感染的海馬神經(jīng)細胞中可見HCMV即早期蛋白基因的轉(zhuǎn)錄及早期蛋白的表達,RT-PCR電泳顯示與陽性HCMV IE1完全一致，測序后與IE1序列一致；免疫組化顯示HCMV感染組呈棕黃色顆粒,蘇木素復(fù)染后呈棕褐色，HCMV能在海馬神經(jīng)細胞內(nèi)復(fù)制、增殖，體外感染模型成功建立。HCMV組神經(jīng)元細胞內(nèi)游離鈣離子熒光強度值為（215.47±14.86）高于對照組（116.43±5.9）（t=15.2, P0.01）；MK-801+HCMV組神經(jīng)元的熒光強度值(135.52±8.58)較HCMV組（215.47±14.86）明顯下降，下降率為37±3.4%（t=11.3,P0.01）,MK-801組的熒光強度值為（88.05±4.50）較對照組（116.43±5.9)熒光強度值明顯下降，，下降率為24±6.7%（t=-9.3, P0.01）。結(jié)論HCMV AD16株感染體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元可致細胞內(nèi)的鈣超載，NMDA受體通道介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流可能是HCMV感染后神經(jīng)元內(nèi)鈣超載的主要機制之一。
【關(guān)鍵詞】：激光共聚焦顯微鏡 人巨細胞病毒 大鼠神經(jīng)元 細胞學 鈣超載
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R373.11
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 1 引言9-12
• 2 材料方法12-18
• 3 結(jié)果18-25
• 4 討論25-32
• 5 結(jié)論32-33
• 參考文獻33-38
• 附錄38-39
• 致謝39-40
• 綜述40-48
• 參考文獻45-48

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Effects of Rat Cytomegalovirus on the Nervous System of the Early Rat Embryo[J];Virologica Sinica;2012年04期

  本文關(guān)鍵詞：HCMV體外感染SD乳鼠海馬神經(jīng)細胞致鈣代謝障礙機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：306928