本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)化生長因子β激活激酶1轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及相關(guān)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：建立人活化型TAK1和失活型TAK1的轉(zhuǎn)基因小鼠,利用轉(zhuǎn)基因動物模型初步觀察TAK1過表達對牙齒釉質(zhì)形態(tài)的影響。檢測TAK1轉(zhuǎn)基因小鼠下頜骨中釉質(zhì)基質(zhì)蛋白(EMP)的相對表達水平,進一步尋找TAK1在牙齒發(fā)育作用中的靶蛋白。從組織學(xué)水平及mRNA表達水平來研究TAK1對釉質(zhì)形態(tài)及釉質(zhì)基質(zhì)蛋白表達水平的影響,從而為研究TAK1在牙釉質(zhì)形成中的作用機制奠定基礎(chǔ)。方法：克隆小鼠釉原蛋白(Amelogenin, Amelx)啟動子及人TAK1的全長基因,并分別利用缺失突變和點突變原理擴增caTAK1基因和dnTAK1基因。運用Gateway技術(shù)分別將活化型TAK1和失活型TAK1基因插入Amelx啟動子下游構(gòu)建轉(zhuǎn)基因表達載體,通過顯微注射法建立TAK1轉(zhuǎn)基因FVB小鼠。PCR鑒定轉(zhuǎn)基因小鼠的基因型,RT-PCR檢測外源性TAK1基因表達。分別運用體視顯微鏡、X光片、微型CT觀察轉(zhuǎn)基因小鼠磨牙釉質(zhì)的礦化程度和病理性磨損程度。最后,運用實時定量PCR的方法檢測FVB野生型小鼠與TAK1轉(zhuǎn)基因小鼠下頜骨中Amelx, Ambn, Mmp-20,Klk4及Alp基因mRNA相對表達量的變化。結(jié)果：克隆了小鼠Amelx啟動子基因及人TAK1基因,并構(gòu)建了不同活性TAK1重組表達質(zhì)粒。成功構(gòu)建caTAK1和dnTAK1轉(zhuǎn)基因表達載體,制備了不同活性TAK1轉(zhuǎn)基因小鼠,并證明轉(zhuǎn)入的人不同活性TAK1基因在小鼠頜骨組織中特異性表達。組織學(xué)分析：體視顯微鏡觀察結(jié)果顯示活化型小鼠的磨牙釉質(zhì)色澤略顯暗淡,出生6個月磨牙合面即發(fā)生嚴重磨損；而失活型小鼠磨牙釉質(zhì)與野生型小鼠無明顯區(qū)別。Micro X-ray及Micro CT結(jié)果顯示：活化型TAKl轉(zhuǎn)基因小鼠出生6個月即發(fā)生明顯的磨牙合面釉質(zhì)磨損。實時定量PCR結(jié)果顯示：與野生型FVB小鼠相比,活化型TAK1轉(zhuǎn)基因小鼠下頜骨中釉質(zhì)基質(zhì)蛋白Amelx, Ambn, Mmp-20, Klk4及Alp基因mRNA的相對表達量均增加。其中以Amelx和Ambn表達量的增加最為顯著。結(jié)論：TAK1顯著上調(diào)Amelx和Ambn的表達量,使釉質(zhì)蛋白在釉質(zhì)中含量明顯增加,影響了牙釉質(zhì)礦化程度而導(dǎo)致牙釉質(zhì)發(fā)育不良,容易產(chǎn)生病理性磨損。
【關(guān)鍵詞】：TGF-β激活激酶-1(TAK1) 基因突變 轉(zhuǎn)基因動物 釉質(zhì)發(fā)育 釉質(zhì)基質(zhì)蛋白
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R781;R-332

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本文編號：298843