本文關(guān)鍵詞：缺血缺氧對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的凋亡蛋白表達(dá)的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）是具有多向多種組織進(jìn)行分化潛能的前體干細(xì)胞，可逃避宿主免疫系統(tǒng)監(jiān)測、免疫調(diào)節(jié)、獲取傷害小和易體外擴增培養(yǎng)等特點，使骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在細(xì)胞組織工程醫(yī)學(xué)方面有其廣闊的應(yīng)用前途。然而移植細(xì)胞的凋亡、失活等不良事件發(fā)生仍然是組織重建工程中亟需解決問題之一。而其中移植入器官的干細(xì)胞失活亡主要機制之一是由于缺血缺氧引起的細(xì)胞凋亡。 CASPASE是一組存在于細(xì)胞質(zhì)中具有類似結(jié)構(gòu)的蛋白酶,負(fù)責(zé)選擇性的切割某些蛋白質(zhì)，從而造成細(xì)胞凋亡。局部缺氧、缺血作為細(xì)胞凋亡的一個重要的調(diào)節(jié)因素早已經(jīng)得到了大家的認(rèn)識，其可以誘發(fā)細(xì)胞Caspase-3、8、9等凋亡蛋白的活性變化從而引發(fā)一系列級聯(lián)的程序來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡。國內(nèi)外對無血清及缺氧凋亡作用已經(jīng)開展過一定的研究，本課題在其他體外實驗的研究基礎(chǔ)上，利用細(xì)胞和現(xiàn)代分子生物學(xué)等技術(shù)，，通過體外無血清及缺氧培養(yǎng)構(gòu)建的缺血缺氧模型，檢測在體外環(huán)境中對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)影響；通過Western-blot等方法分別測定凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)，初步探討了缺氧模型下對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響機制；引入柚皮苷作為抗凋亡藥物，進(jìn)行對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞預(yù)保護(hù)，檢測凋亡蛋白表達(dá)的變化。 實驗分為兩部分進(jìn)行： 第一部分兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及生物學(xué)性狀分析 目的：建立兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、純化方法，并進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、表面標(biāo)志物鑒定及多向分化能力檢測。 方法：通過全骨髓貼壁法體外分離、培養(yǎng)、純化兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，繪制生長曲線，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物，向成骨誘導(dǎo)分化等檢測。 結(jié)果：兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長以梭形細(xì)胞為主，呈放射狀排列的細(xì)胞集落，可連續(xù)穩(wěn)定傳代。生長曲線顯示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞符合正常細(xì)胞生長特征且生長活躍。第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞CD29陽性細(xì)胞（98.42士1.01%）；CD44陽性細(xì)胞（97.6士1.81%），而CD45呈陰性表達(dá)。成骨誘導(dǎo)后,堿性磷酸酶染色、茜素紅染色均呈陽性。全骨髓貼壁培養(yǎng)法操作方便，可大量分離、純化、擴增，所獲細(xì)胞具有間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)后具有多向分化潛能。 結(jié)論：實驗所用的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞全骨髓貼壁培養(yǎng)法為組織工程提供充足的種子細(xì)胞來源具有重要的現(xiàn)實意義。 第二部分缺血缺氧模型下誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡 目的：建立體外缺血缺氧模型及誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡 方法：建立細(xì)胞缺氧模型（血清饑餓法+缺氧培養(yǎng)法）。通過MTT、流式細(xì)胞儀凋亡檢測、Western-blot方法分別測定了細(xì)胞凋亡情況及其Casapse3凋亡相蛋白表達(dá)情況；適當(dāng)濃度柚皮苷可減少細(xì)胞凋亡；柚皮苷對缺血缺氧下培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行預(yù)保護(hù)后，運用Western-blot進(jìn)行細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)。 結(jié)果：體外缺血缺氧模型可引起Casapse3凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)上調(diào)。與時間具有關(guān)聯(lián)性；進(jìn)行柚皮苷預(yù)保護(hù)后，與缺血缺氧對照組相比，各時段（6、12、24、48h）凋亡蛋白表達(dá)均有所下降（P0.01）。結(jié)論：體外缺血缺氧模型可促使骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡率上升并與時間具有關(guān)聯(lián)性；柚皮苷預(yù)保護(hù)可減少體外缺血缺氧下培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 培養(yǎng) 形態(tài)學(xué) 分化 鑒定 無血清和缺氧 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 目錄3-4
• 英文縮略詞4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 第一部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離，純化和鑒定11-29
• 前言11-13
• 材料與方法13-18
• 結(jié)果18-23
• 討論23-25
• 參考文獻(xiàn)25-29
• 第二部分 缺血缺氧模型下誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡檢測29-46
• 前言29-30
• 材料與方法30-37
• 結(jié)果37-41
• 討論41-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 綜述46-72
• 參考文獻(xiàn)57-72
• 致謝72-73
• 大學(xué)期間發(fā)表e笪惱
  
  本文編號：277126
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