發(fā)布時間：2017-03-28 15:04

  本文關(guān)鍵詞：磷酸鈣晶體誘導(dǎo)人巨噬細(xì)胞HMGB1表達(dá)的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討磷酸鈣晶體刺激U937人巨噬細(xì)胞后高遷移率族蛋白B1（High mobility group protein B1，HMGB1）的釋放和表達(dá)水平。 方法：光鏡觀察磷酸鈣晶體刺激后U937人巨噬細(xì)胞的形態(tài)變化；用100ug/ml的磷酸鈣晶體刺激人巨噬細(xì)胞，分別于刺激后0、6、12、18、24、30、36h和48h，用蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測細(xì)胞培養(yǎng)液上清、細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)HMGB1蛋白的含量；用實時熒光定量PC（RReal-time PCR，RT-PCR）檢測細(xì)胞中HMGB1的mRNA的表達(dá)情況；分別于磷酸鈣晶體刺激后0、1、2h和4h，用酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzymelinked immunoassay，ELISA）測定細(xì)胞培養(yǎng)液上清中TNF-α、IL-6和MCP-1的含量。 結(jié)果：磷酸鈣晶體刺激后0-6h細(xì)胞培養(yǎng)液上清無法清晰檢測到HMGB1蛋白，12h后細(xì)胞培養(yǎng)液上清HMGB1蛋白含量開始增加，18h達(dá)到高峰，以后穩(wěn)定在較高水平，48h又出現(xiàn)明顯高峰。磷酸鈣晶體刺激前，HMGB1蛋白主要分布于細(xì)胞核內(nèi)，細(xì)胞漿含量相對較少；在刺激12-48h細(xì)胞漿中HMGB1蛋白含量逐漸增加；而細(xì)胞核內(nèi)HMGB1在刺激后18-24h含量減少，30-48h后細(xì)胞核內(nèi)HMGB1蛋白含量又逐漸增多。RT-PCR結(jié)果顯示，磷酸鈣晶體刺激0-12h，培養(yǎng)細(xì)胞中HMGB1蛋白的mRNA表達(dá)量無明顯變化，18-24h培養(yǎng)細(xì)胞中HMGB1的mRNA表達(dá)量明顯增加。ELISA結(jié)果顯示，磷酸鈣晶體刺激1h，細(xì)胞培養(yǎng)液上清中TNF-α、IL-6及MCP-1表達(dá)和釋放增加，4h達(dá)到明顯高峰。磷酸鈣晶體刺激0-12h細(xì)胞形態(tài)、分布無明顯變化，18h后細(xì)胞開始聚集、成團(tuán)。 結(jié)論：磷酸鈣晶體可以誘導(dǎo)U937人巨噬細(xì)胞分泌、產(chǎn)生HMGB1蛋白。磷酸鈣晶體可以誘導(dǎo)人巨噬細(xì)胞內(nèi)HMGB1、TNF-α、IL-6及MCP-1的表達(dá)和釋放增加，且HMGB1的釋放時間明顯晚于TNF-a、IL-6和MCP-1的釋放時間；磷酸鈣晶體誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞內(nèi)的HMGB1從細(xì)胞核向細(xì)胞漿轉(zhuǎn)位，，并釋放到細(xì)胞外；磷酸鈣晶體可以誘導(dǎo)U937人巨噬細(xì)胞HMGB1蛋白mRNA基因表達(dá)上調(diào)；磷酸鈣晶體可以刺激巨噬細(xì)胞聚集、成團(tuán)。
【關(guān)鍵詞】：高遷移率族B1 磷酸鈣 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 目錄3-4
• 中英文對照表4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-10
• 材料和方法10-25
• 結(jié)果25-31
• 討論31-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 綜述37-46
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 致謝46

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本文編號：272477