本文選題：結(jié)核分枝桿菌 + 重組蛋白ClpP��； 參考：《中國(guó)免疫學(xué)雜志》2015年06期

【摘要】：目的:對(duì)結(jié)核分枝桿菌Rv2460c基因(編碼Clp P2蛋白)進(jìn)行克隆,表達(dá),并評(píng)價(jià)其編碼產(chǎn)物的免疫原性。方法:擴(kuò)增結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Rv的Rv2460c基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET32a(+)-Clp P2,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),利用親和層析法進(jìn)行純化。用SDS-PAGE和Western blot分析重組蛋白Clp P2的表達(dá)和鑒定。用生物信息學(xué)對(duì)Mtb Clp P2的免疫原性分析和表位預(yù)測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定兔和TB病人血清anti-Clp P2滴度。結(jié)果:重組Clp P2蛋白酶在大腸桿菌中以包涵體形式表達(dá),經(jīng)bandscan軟件分析純化蛋白的純度為93%。生物信息學(xué)分析Mtb Clp P2蛋白具有多個(gè)優(yōu)勢(shì)B細(xì)胞表位和T細(xì)胞表位。ELISA法測(cè)定兔抗血清效價(jià)為1∶64 000;檢測(cè)肺結(jié)核病人血清中anti-Clp P2抗體水平高于健康對(duì)照人群。結(jié)論:成功純化了重組蛋白Clp P2和制備了特異性兔抗Clp P2多克隆抗體,實(shí)驗(yàn)和信息學(xué)均表明Mtb Clp P2蛋白酶有較強(qiáng)的免疫原性。
[Abstract]:Aim: to clone and express the Rv2460c gene of Mycobacterium tuberculosis (encoding ClpP2 protein) and evaluate its immunogenicity. Methods: the Rv2460c gene of Mycobacterium tuberculosism Mtb H37Rv was amplified and the recombinant plasmid pET32a () -ClpP2was constructed. The recombinant plasmid pET32a () -ClpP2was induced by IPTG and purified by affinity chromatography. The expression and identification of the recombinant protein ClpP2 were analyzed by SDS-PAGE and Western blot. The immunogenicity and epitope prediction of MtbClpP2 were analyzed by bioinformatics. Serum anti-Clp P2 titers were determined by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) in rabbits and TB patients. Results: the recombinant ClpP2 protease was expressed as inclusion body in E. coli. The purity of purified protein was 933 by bandscan software. Bioinformatics analysis showed that MtbClpP2 protein had several dominant B cell epitopes and T cell epitopes. Elisa was used to determine the titer of rabbit antiserum at 1:64 000, and the level of anti-ClpP2 antibody in pulmonary tuberculosis patients was higher than that in healthy controls. Conclusion: the recombinant protein ClpP2 was successfully purified and the specific rabbit anti-ClpP2 polyclonal antibody was prepared. The results of experiments and informatics show that Mtb ClpP2 protease has strong immunogenicity.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)教研室與腫瘤研究中心;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸科;
【基金】：國(guó)家青年科學(xué)基金(No.81101216) 國(guó)家臨床重點(diǎn)專科專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)資助(衛(wèi)辦醫(yī)政函[2012]649號(hào))資助
【分類號(hào)】：R378.911

【共引文獻(xiàn)】

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3 張s，

本文編號(hào)：2117474