目的:國外報道在多種實體腫瘤細胞中如腸道、卵巢、前列腺等已發(fā)現(xiàn)有CD59分子的過表達,并證實其與腫瘤的失控性生長、惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。本研究利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立高效真核表達系統(tǒng),觀測人卵巢癌A2780細胞表面野生型CD59與突變型CD59分子的表達情況及其抗補體活性變化,推斷W40位點的生物學(xué)活性;并探討突變型CD59基因轉(zhuǎn)染與LPS聯(lián)合、以及LPS與CD59單克隆抗體聯(lián)合激活補體的抗腫瘤效應(yīng)。 方法:利用大腸桿菌JM109擴增突變型CD59質(zhì)粒和野生型CD59質(zhì)粒,并用陽離子脂質(zhì)體(Lipfectine)將兩種重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染入人卵巢癌A2780細胞,G418篩選穩(wěn)定表達細胞克隆。并用RT-PCR、酶免疫染色、熒光免疫染色、Western-blot、流式細胞術(shù)在mRNA水平和蛋白水平鑒定CD59突變基因和野生型基因的轉(zhuǎn)染成功。通過MTT法計算細胞增殖抑制率及LDH乳酸脫氫酶釋放法觀察突變型CD59和野生型CD59抗補體能力的改變,以及CD59mAb與LPS聯(lián)合作用激活補體抗腫瘤效應(yīng)。 結(jié)果:通過RT-PCR、酶免疫染色、熒光免疫染色、Western-blot、流式細胞術(shù)鑒定說明建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染野生型和突變型CD59的A2780細胞。MTT結(jié)果顯示與野生型CD59相比,突變型CD59失去對補體的抑制功能,與對照組未轉(zhuǎn)染的A2780細胞無顯著差別;在5 mg/L LPS單獨作用30 min后,MTT檢測對轉(zhuǎn)染野生型CD59,突變型CD59及未轉(zhuǎn)染A2780細胞的細胞增殖抑制率分別為(26.9±2.95)%、(36.3±4.87)%、(29.6±3.16)%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。LDH釋放試驗結(jié)果顯示對突變型CD59轉(zhuǎn)染的A2780細胞,其補體殺傷率為65.13±9.77明顯高于野生型CD59轉(zhuǎn)染的A2780細胞,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05);與CD59mAb、LPS的單獨作用組相比,兩者聯(lián)合作用在5mg/L和10mg/L時,補體的細胞殺傷率均明顯高于單獨作用組,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。 結(jié)論:CD59的W40位點對其抗補體活性具有重要作用,封閉該位點能夠提高補體溶細胞作用,并有助于LPS發(fā)揮抑制瘤細胞增殖活性;CD59mAb與LPS較低劑量聯(lián)合即可明顯激活補體對人卵巢癌A2780細胞的殺傷活性,為高表達CD59的腫瘤治療提供了新思路。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R730.5;R392

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

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本文編號：1932558