背景:禽流感是由A型流感病毒引起的一種烈性禽類傳染病。禽類感染病毒后,可表現(xiàn)為從無癥狀帶毒到輕度呼吸系統(tǒng)疾病甚至急性致死性疾病等多種形式。我國主要以H5、H9亞型感染居多。H5亞型為高致病性禽流感,傳播迅速,病程短,具有很高的毒力和致死性,感染家禽的病死率常常達(dá)到100%。H9亞型致病性也較強(qiáng),可引起禽類輕微的呼吸道癥狀、產(chǎn)蛋下降和細(xì)菌感染。近年來禽流感發(fā)生的態(tài)勢明顯表現(xiàn)出發(fā)生頻率加快,次數(shù)增多,范圍擴(kuò)大,反復(fù)發(fā)生,給世界各地造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失和社會(huì)影響;不僅如此,越來越多的證據(jù)表明,禽流感病毒還可以突破種間障礙,嚴(yán)重威脅到人類健康。因此,該病的快速診斷與防治被提到了前所未有的高度。 壓電免疫傳感器是把抗原與抗體結(jié)合的特異性和石英諧振換能器對(duì)表面質(zhì)量負(fù)載變化的高度敏感性相結(jié)合而發(fā)展起來的一種新型免疫傳感器,是當(dāng)前生物傳感技術(shù)研究的熱點(diǎn)之一。與傳統(tǒng)血清學(xué)免疫方法相比,它具有儀器裝備簡單、靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測快速、無需標(biāo)記、操作簡便、成本低廉、可野外檢測等特點(diǎn),目前已用于臨床診斷、有害物檢測等諸多領(lǐng)域的研究中�，F(xiàn)有的禽流感檢測技術(shù)耗時(shí)長、操作煩瑣;國內(nèi)外關(guān)于研制禽流感壓電免疫傳感器的報(bào)道并不多見,國內(nèi)曾就禽流感抗原固定方法進(jìn)行過研究。我們以禽流感各亞型相對(duì)應(yīng)單克隆抗體作為壓電免疫傳感器的生物敏感材料,構(gòu)建檢測禽流感的壓電免疫傳感器,將提高檢測的特異性,具有理論與實(shí)際的意義。 目的:通過比較三種抗體固定方法構(gòu)建的壓電免疫傳感器的條件和特性,篩選最佳方法,探索壓電免疫傳感器用于禽流感快速檢測的可行性。 方法:1.采用AT切型、直徑5.0mm、雙面鍍金電極、基頻為10MHz的壓電石英晶體作為基體傳感器,以禽流感H5、H9亞型單克隆抗體作為壓電免疫傳感器的生物敏感材料,用三種固定方法(戊二醛法、蛋白A法、巰基自組裝法)固定抗體,構(gòu)建禽流感壓電免疫傳感器。2.比較三種固定方法的優(yōu)缺點(diǎn),選擇最佳方法和條件。3.用壓電免疫傳感器檢測H5、H9亞型抗原,比較傳感器的響應(yīng)特性。4.對(duì)用戊二醛法構(gòu)建的傳感器進(jìn)行重復(fù)性、線性范圍及靈敏度、交叉反應(yīng)、與雞胚分離法對(duì)比的性能評(píng)價(jià)。 結(jié)果: 1.戊二醛法:H5、H9亞型單克隆抗體的稀釋度均為1:10時(shí),可使壓電免疫傳感器達(dá)到最佳的抗體固定量,對(duì)H5和H9抗原溶液均有較好的響應(yīng)特性。2.蛋白A法:H5、H9亞型單克隆抗體的稀釋度均為1:5時(shí)可使壓電免疫傳感器達(dá)到最佳的抗體固定量,但此法若先固定抗體,則無法檢測到抗原;如先進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)再與蛋白A結(jié)合,可以達(dá)到定性檢測的效果。3.巰基自組裝法:H5、H9亞型單克隆抗體的稀釋度均為1:10時(shí)可使壓電免疫傳感器達(dá)到最佳的抗體固定量,但構(gòu)建的壓電免疫傳感器對(duì)抗原的響應(yīng)特性很低。4.抗體固定量比較:巰基自組裝法的抗體固定量最大,戊二醛法與蛋白A法的抗體固定量相當(dāng)。5.戊二醛法構(gòu)建的H5抗體傳感器檢測H5抗原的CV為14%、線性范圍為1:2～1:40,相關(guān)系數(shù)為0.9894,與H9抗原無交叉反應(yīng);H9抗體傳感器檢測H9抗原的CV為21%、線性范圍為1:10～1:160,相關(guān)系數(shù)為0.9832,與H5抗原無交叉反應(yīng);與雞胚分離法比較,總符合率為91.7%。 結(jié)論:以禽流感H5、H9亞型單克隆抗體作為壓電免疫傳感器的生物敏感材料,采用戊二醛法構(gòu)建的壓電免疫傳感器性能最佳,可對(duì)禽流感抗原進(jìn)行快速檢測。構(gòu)建的禽流感H5、H9壓電免疫傳感器的檢測靈敏度、特異性、重復(fù)性和線性均滿足檢測要求,具有快速檢測禽流感的應(yīng)用前景。



本文編號(hào)：1374959