本文關(guān)鍵詞：MiR-124通過靶向Sp1基因抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移及侵襲的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： MiR-124 膠質(zhì)瘤 Sp1 遷移 侵襲

【摘要】：背景及目的膠質(zhì)瘤是成人中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)惡性腫瘤,具有很強(qiáng)的侵襲性及高復(fù)發(fā)率、高死亡率等特點(diǎn),盡管近年來多種臨床治療方法的改進(jìn),膠質(zhì)瘤病人預(yù)后和生存情況仍舊很差,對(duì)此有效的新型治療方案的研究對(duì)臨床改進(jìn)非常有必要,例如膠質(zhì)瘤發(fā)病的分子機(jī)制的研究。微小RNA(miRNAs),一類保守的非編碼RNA,負(fù)向調(diào)控人類至少30%的基因通過轉(zhuǎn)錄后水平完全或者部分結(jié)合靶向mRNA的3’-UTR區(qū)域,進(jìn)而降低翻譯效能和影響mRNA的穩(wěn)定性。最近研究表明,mi RNA作為促癌基因或者抑癌基因,參與腫瘤細(xì)胞多種生物學(xué)過程,比如細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移、凋亡等。miRNA-124已經(jīng)被證明能夠抑制多種與轉(zhuǎn)移相關(guān)的腫瘤,包括膠質(zhì)瘤,而且文獻(xiàn)已經(jīng)證實(shí)miR-124的表達(dá)量在膠質(zhì)瘤中是明顯降低的。Sp1作為一個(gè)研究較透徹的轉(zhuǎn)錄激活因子,通過結(jié)合靶基因中富含GC的序列,該序列對(duì)下游基因的調(diào)控較為廣泛,比如,和EMT相關(guān)的一個(gè)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物vimentin的表達(dá),間接發(fā)揮調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)作用。先前研究已經(jīng)指出,Sp1可以聯(lián)合其他復(fù)合物共同激活vimentin的啟動(dòng)子以促進(jìn)其表達(dá),而且越來越多的研究表明Sp1通過調(diào)控涉及腫瘤轉(zhuǎn)移的基因進(jìn)而影響多種類型腫瘤的轉(zhuǎn)移。對(duì)膠質(zhì)瘤而言,先前的研究已經(jīng)表明Sp1在膠質(zhì)瘤中高表達(dá),并且可以作為一項(xiàng)判斷膠質(zhì)瘤病人預(yù)后的指標(biāo)。考慮到miR-124和Sp1均與轉(zhuǎn)移性腫瘤相關(guān)加上膠質(zhì)瘤浸潤特性,結(jié)合生物預(yù)測軟件,我們猜測miRNA-124可能通過靶向Sp1來調(diào)控膠質(zhì)瘤的遷移和侵襲。研究方法1、首先選取U87、U251、A172、OLN93四株細(xì)胞利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)及western blot方法檢測四株細(xì)胞中的mirR-124和Sp1本底表達(dá)量;2、選用人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、A172作為研究對(duì)象,(1)兩珠細(xì)胞過表達(dá)miR-124,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)來檢測miR-124表達(dá)量以及相對(duì)應(yīng)的Sp1 mRNA表達(dá)量,western blot實(shí)驗(yàn)檢測過表達(dá)miR-124后Sp1和vimentin表達(dá)量,熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明miR-124靶向結(jié)合Sp1,transwell實(shí)驗(yàn)用來證明miR-124的生物學(xué)作用;(2)基因敲除方法靶向敲除Sp1基因,分別利用western blot檢測Sp1和vimentin的表達(dá),transwell實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步來確定Sp1的生物學(xué)作用。結(jié)果qRT-PCR結(jié)果顯示:和正常膠質(zhì)細(xì)胞OLN93相比,miR-124的表達(dá)量在膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87,U251,A172細(xì)胞中明顯下調(diào);膠質(zhì)瘤細(xì)胞中Sp1在mRNA和蛋白質(zhì)層面上的表達(dá)量均高于正常膠質(zhì)細(xì)胞;U87和A172過表達(dá)miR-124后,Sp1和vimentin的表達(dá)均下降,同時(shí)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力,雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)也驗(yàn)證了miR-124靶向結(jié)合Sp1的3‘-UTR區(qū)。敲除Sp1基因后,western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示Sp1和vimentin的表達(dá)量下降,同時(shí)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力也是下降的。結(jié)論(1)mi R-124在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中低表達(dá),Sp1呈高表達(dá);(2)miR-124能夠抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲;(3)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中,miR-124靶向作用于Sp1基因;(4)靶向敲除Sp1基因抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移,侵襲和vimentin的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：MiR-124 膠質(zhì)瘤 Sp1 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-15
• 參考文獻(xiàn)12-15
• 材料與方法15-23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-27
• 討論27-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 綜述32-41
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 中英文對(duì)照41-42
• 攻讀碩士學(xué)位期間參與的論文42-43
• 致謝43-44

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