發(fā)布時(shí)間：2017-10-07 17:25

  本文關(guān)鍵詞：靶向多肽修飾的金納米簇（粒）對(duì)神經(jīng)細(xì)胞成像及神經(jīng)突起的影響

  更多相關(guān)文章： 血腦屏障 穿膜肽RDP 金納米簇(粒) 神經(jīng)細(xì)胞成像 神經(jīng)突起

【摘要】：神經(jīng)退行性疾病是危害人類生命和健康的一類重大疾病,據(jù)報(bào)道,這類疾病的共同特征是病變的神經(jīng)元細(xì)胞體沒有發(fā)生變化,但是細(xì)胞突起部分明顯變短。軸突的退行性病變是很多神經(jīng)退行性疾病的病理學(xué)特征,軸突不能有效再生是中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后功能缺損的主要原因。因此設(shè)計(jì)能夠?qū)ι窠?jīng)細(xì)胞進(jìn)行診斷和治療的藥物將對(duì)治療神經(jīng)退行性疾病有非常重要的意義。非侵入性中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的神經(jīng)細(xì)胞成像及治療是一種很有潛力的治療診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法,但仍然存在一些缺點(diǎn),如深層組織熒光信號(hào)散射所造成的低信噪比,低單細(xì)胞分辨率。檢測(cè)體內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞的主要障礙是基于熒光成像的組織特異性和血腦屏障(BBB)引起的低細(xì)胞滲透性。為解決這些問題,將BBB滲透載體、穩(wěn)定的熒光物質(zhì)和藥物連接,為神經(jīng)細(xì)胞長期成像和治療提供了新方法,這將有助于闡明中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和相關(guān)疾病基本信息。我們課題組已經(jīng)開發(fā)出一種腦靶向肽RDP,該多肽由39個(gè)氨基酸組成,來自狂犬病毒糖蛋白的330-357氨基酸序列,這是該病毒能夠進(jìn)入宿主細(xì)胞的關(guān)鍵序列。RDP具有轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)和基因到小鼠大腦的能力,包括腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF),神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF),含有Lac Z或BDNF基因的質(zhì)粒。同時(shí),重復(fù)使用RDP及其復(fù)合物沒有產(chǎn)生明顯的毒性或免疫原性。因此,我們認(rèn)為RDP可以作為一種安全的體內(nèi)靶向配體。尺寸小于10 nm的金納米復(fù)合物,為生物分子的相互作用提供了多種平臺(tái),因而被廣泛應(yīng)用于各種診斷治療領(lǐng)域,如生物成像,細(xì)胞近紅外熒光成像,生物標(biāo)記,DNA電化學(xué)傳感器,具有近紅外熒光的多功能納米醫(yī)藥可用于癌癥治療。金納米復(fù)合物的小尺寸和低毒性引起了許多研究人員的興趣,它具有通過BBB的潛力。尤其是金納米簇(AuNCs),作為一種具有高量子產(chǎn)率、小尺寸的納米復(fù)合物,可用于體外和體內(nèi)研究中分子標(biāo)記定位。然而,由于體內(nèi)的細(xì)胞特異性和廣泛分布的特點(diǎn),AuNCs的應(yīng)用受到了限制。所以對(duì)AuNCs的表面改性以提高細(xì)胞的選擇性和在生物成像中的應(yīng)用將對(duì)疾病的治療和診斷具有重要意義。在這項(xiàng)研究中,RDP修飾的AuNCs可用于長期、無毒的體外神經(jīng)細(xì)胞成像和小鼠體內(nèi)的靶向成像。采用熒光顯微鏡系統(tǒng)和透射電子顯微鏡TEM雙重方法對(duì)RDP-AuNCs在神經(jīng)細(xì)胞中的位置進(jìn)行定位,細(xì)胞附著和進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞的機(jī)制研究表明該RDP-AuNCs進(jìn)入方式為網(wǎng)格蛋白受體介導(dǎo)通過網(wǎng)格蛋白小體的內(nèi)吞作用。非侵入性成像分析和體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)表明,RDP-AuNCs可作為一種有效的、特異的神經(jīng)細(xì)胞生物成像劑。另外一部分關(guān)于RDP和6-巰基嘌呤修飾的AuNPs (6MP-AuNPs-RDP)研究表明該復(fù)合物能夠刺激神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y細(xì)胞神經(jīng)突起的生長,根據(jù)流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù),RDP-AuNPs能夠減少SH-SY5Y細(xì)胞、人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87在G2/M期細(xì)胞周期阻滯；顯微鏡觀察結(jié)果顯示6MP-AuNPs-RDP能夠改變SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài),刺激突起生長,組織切片HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)短時(shí)間給藥6MP-AuNPs-RDP不會(huì)產(chǎn)生毒性,但連續(xù)給藥7天會(huì)產(chǎn)生肝損傷。
【關(guān)鍵詞】：血腦屏障 穿膜肽RDP 金納米簇(粒) 神經(jīng)細(xì)胞成像 神經(jīng)突起
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R741
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-29
• 1.1 細(xì)胞穿透肽研究進(jìn)展11-13
• 1.1.1 多肽的蛋白質(zhì)功能模仿11
• 1.1.2 細(xì)胞穿透肽的檢驗(yàn)方法11-13
• 1.2 金納米簇標(biāo)記和示蹤細(xì)胞和病毒13-15
• 1.2.1 標(biāo)記和示蹤活細(xì)胞13-14
• 1.2.2 標(biāo)記和示蹤病毒14-15
• 1.3 金納米簇鑒定菌株15-16
• 1.4 金納米簇用于生物成像16-19
• 1.4.1 腫瘤靶向成像16-18
• 1.4.2 線粒體成像18
• 1.4.3 人血清蛋白成像18-19
• 1.5 金納米簇檢驗(yàn)生物大分子19-23
• 1.5.1 檢驗(yàn)羥基自由基19-20
• 1.5.2 檢驗(yàn)蛋白質(zhì)20-21
• 1.5.3 檢驗(yàn)DNA和RNA21-22
• 1.5.4 檢驗(yàn)生物小分子22-23
• 1.6 金納米簇作為基因遞送載體23
• 1.7 用于抗腫瘤藥物的多功能納米復(fù)合物23-27
• 1.7.1 多功能納米凝膠診斷藥物24
• 1.7.2 多功能納米膠束診斷藥物24-25
• 1.7.3 AuNCs脂質(zhì)體診斷藥物25-26
• 1.7.4 AuNCs/DNA診斷藥物26
• 1.7.5 納米復(fù)合物的光動(dòng)力療法和光熱療法26-27
• 1.8 金納米簇標(biāo)記CPP27-29
• 第二章 緒論29-31
• 第三章 穿膜肽修飾的納米金簇的制備及神經(jīng)細(xì)胞成像研究31-49
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料31-33
• 3.1.1 細(xì)胞與小鼠31
• 3.1.2 主要儀器和設(shè)備31-32
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑32
• 3.1.4 常用溶液的配制32-33
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法33-38
• 3.2.1 RDP修飾的熒光納米簇的制備33
• 3.2.2 修飾后的表征33-34
• 3.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)34
• 3.2.4 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)34-35
• 3.2.5 透射電鏡觀察定位細(xì)胞中RDP-AuNCs35
• 3.2.6 RDP-AuNCs進(jìn)入細(xì)胞機(jī)制研究35
• 3.2.7 濃度依賴性抑制實(shí)驗(yàn)35-36
• 3.2.8 時(shí)間依賴性抑制實(shí)驗(yàn)36
• 3.2.9 體內(nèi)非侵入性成像研究36
• 3.2.10 熒光共定位研究36
• 3.2.11 RDP-AuNCs急性毒性研究36-37
• 3.2.12 腫瘤模型的建立37-38
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-47
• 3.3.1 AuNCs和RDP-AuNCs的合成表征38-40
• 3.3.2 RDP-AuNCs特異性進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞40-42
• 3.3.3 RDP-AuNCs細(xì)胞毒性研究42-43
• 3.3.4 RDP-AuNCs內(nèi)化機(jī)制研究43-44
• 3.3.5 RDP-AuNCs的體內(nèi)生物成像44-46
• 3.3.6 體內(nèi)毒性研究46-47
• 3.3.7 小鼠荷瘤成像初步探討47
• 3.4 本章小結(jié)47-49
• 第四章 穿膜肽修飾的納米金粒子制備及對(duì)神經(jīng)細(xì)胞突起的影響49-65
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料49-51
• 4.1.1 細(xì)胞與小鼠49
• 4.1.2 主要儀器和設(shè)備49-50
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑50
• 4.1.4 常用溶液的配制50-51
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法51-55
• 4.2.1 金納米粒的制備51
• 4.2.2 6-琉基嘌呤修飾的金納米粒的制備51
• 4.2.3 金納米粒修飾的RDP的制備51
• 4.2.4 A685修飾納米金粒子51-52
• 4.2.5 金納米粒的最佳修飾條件優(yōu)化及量化52
• 4.2.6 修飾后納米金粒子的表征52-53
• 4.2.7 細(xì)胞培養(yǎng)53
• 4.2.8 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)53
• 4.2.9 濃度依賴性抑制實(shí)驗(yàn)53-54
• 4.2.10 體內(nèi)非侵入性成像研究54
• 4.2.11 細(xì)胞周期檢測(cè)54
• 4.2.12 RDP-AuNPs急性毒性研究54-55
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-63
• 4.3.1 最佳6MP用量55-56
• 4.3.2 最佳RDP用量56
• 4.3.3 修飾后AuNPs表征56-59
• 4.3.4 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)59-60
• 4.3.5 體外毒性檢測(cè)60-61
• 4.3.6 細(xì)胞周期檢測(cè)分析61
• 4.3.7 活體成像檢測(cè)6MP-AuNPs-RDP在體內(nèi)的分布情況61-62
• 4.3.8 體內(nèi)急性毒性研究62-63
• 4.4 本章小結(jié)63-65
• 參考文獻(xiàn)65-79
• 致謝79-81
• 在校期間科研成果81

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉蕾;鄭琦;安辰;趙暉;張秋霞;樊永平;王蕾;;補(bǔ)腎配伍化痰活血藥對(duì)低血清培養(yǎng)SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞軸突生長的影響[J];中醫(yī)藥信息;2014年05期

，

本文編號(hào)：989123