本文關(guān)鍵詞：腦梗死患者外周血miR-146a的表達及其對抗凋亡基因FBXL10的靶向調(diào)控

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【摘要】：盡管目前在腦梗死發(fā)生后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡機制及藥物保護作用的研究取得了很大的突破和進展,為揭示腦梗死的本質(zhì)和未來的臨床治療帶來了希望,但是必須認(rèn)識到,動物實驗和臨床應(yīng)用還有很大的差距。最近越來越多的研究集中在腦梗死后患者外周血miRNAs的表達變化及其內(nèi)源性神經(jīng)保護作用,這使得miRNAs的基礎(chǔ)研究更接近腦梗死的臨床應(yīng)用和實踐了。MiRNAs在腦梗死的作用及其機制已成為一個研究熱點。本研究的目的是檢測miRNA在腦梗死患者外周血的差異表達,并探討miRNA在腦梗死發(fā)生發(fā)展過程扮演的角色及其調(diào)控機制。第一部分腦梗死患者外周血miRNAs差異表達的分析目的：探討腦梗死患者外周血miRNAs的異常表達及其作為診斷腦梗死的一種潛在的生物學(xué)標(biāo)志物的可能性。方法：采用miRNAs微陣列芯片技術(shù)研究腦梗死患者和健康對照者外周血miRNAs表達譜的差異,再通過逆轉(zhuǎn)錄實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)方法驗證候選miRNAs的表達量。結(jié)果：與健康對照組相比,miR-145在腦梗死患者外周血的表達差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05), miR-146a和miR-185在急性腦梗死患者的表達明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；此外,我們還發(fā)現(xiàn)miR-146a在亞急性腦梗死患者的表達卻明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：MiR-146a在腦梗死患者急性期與亞急性期外周血出現(xiàn)明顯的表達不同,因此可作為急性腦梗死診斷的潛在生物標(biāo)志物。第二部分MiR-146a靶向調(diào)控FBXL10及其抗凋亡分子機制的研究目的：目前有研究表明miR-146a在某些病理生理過程中是很強的促凋亡因子。同時我們通過生物信息學(xué)預(yù)測到miR-146a的兩個可能潛在靶點-FBXL10和BCL2L2均為抗凋亡因子,因此我們推測在在缺血性腦損傷異常表達的miR-146a可能通過靶向調(diào)控FBXL10和/或BCL2L2參與腦梗死的發(fā)生發(fā)展。方法：利用生物信息學(xué)預(yù)測miR-146a的潛在靶基因,并通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)、qRT-PCR和Western blot等方法進行驗證。我們采用體外氧糖剝奪再灌注損傷(OGD/R)的細(xì)胞模型來模擬腦缺血／再灌注損傷(I瓜)。把miR-146a mimic或inhibitor轉(zhuǎn)染入人SK-N-SH細(xì)胞,以使miR-146a過表達或低表達。同時通過qRT-PCR檢測FBXL10 mRNA和BCL2L2 mRNA的表達情況,采用Western blot檢測FBXL10和BCL2L2蛋白的表達水平。并采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞活力、損傷和凋亡情況。最后分析miR-146a及其靶點的相互作用并評價miR-146a模擬物和抑制劑對SK-N-SH神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果：熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測證實了]miR-146a的靶基因是FBXL10而非BCL2L2。與OGD/R組和miR-146a mimic組相比,轉(zhuǎn)染miR-146a inhibitor使miR-146a低表達可以減輕OGD/R誘導(dǎo)的SK-N-SH細(xì)胞損傷,降低細(xì)胞凋亡率,而轉(zhuǎn)染miR-146a mimic使miR-146a過表達后,明顯加重OGD/R誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。同時我們用Western blot法檢測了FBXL10的蛋白水平,發(fā)現(xiàn)與OGD/R組和miR-146a mimic組相比,轉(zhuǎn)染miR-146a inhibitor明顯增加了FBXL10的蛋白水平(P0.05),而轉(zhuǎn)染miR-146a mimic后FBXL10的表達水平明顯下調(diào)(P0.05)。然而,轉(zhuǎn)染miR-146a mimic或miR-146a inhibitor對BCL2L2 mRNA及蛋白的表達均無明顯影響(P0.05)。結(jié)論：以上結(jié)果提示：在SK-N-SH神經(jīng)元細(xì)胞氧糖剝奪再灌注損傷中,抑制miR-146a的表達可能通過上調(diào)FBXL10的表達水平從而發(fā)揮抗神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的作用。
【關(guān)鍵詞】：腦梗死 急性腦梗死 亞急性腦梗死 miR-146a miR-145 miR-185 標(biāo)志物 腦梗死 miR-146a FBXL10 BCL2L2 氧糖剝奪/再灌注損傷 凋亡
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 英文縮略詞5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-16
• 第一部分 腦梗死患者外周血miRNAs差異表達的分析16-37
• 1.1 材料和方法16-26
• 1.2 結(jié)果26-34
• 1.3 討論34-37
• 第二部分 MiR-146a靶向調(diào)控FBXL10及其抗凋亡分子機制的研究37-63
• 2.1 材料與方法37-51
• 2.2 結(jié)果51-61
• 2.3 討論61-63
• 結(jié)論63-64
• 參考文獻64-72
• 綜述72-88
• 參考文獻82-88
• 附錄88-94
• 致謝94-95
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文95

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