本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)帕金森鼠黑質(zhì)內(nèi)鐵和銅藍(lán)蛋白表達(dá)水平的影響

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【摘要】：帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是中老年人常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。近年來(lái),PD發(fā)病率呈明顯上升的趨勢(shì),嚴(yán)重影響中老年患者的晚期生活質(zhì)量。目前大量的研究提示黑質(zhì)內(nèi)鐵的沉積和銅藍(lán)蛋白含量的下降可能是PD腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元退行性變的關(guān)鍵因素,而神經(jīng)干細(xì)胞(Neural stem cells,NSCs)旺盛的增殖能力和多向分化細(xì)胞特性能夠彌補(bǔ)丟失的多巴胺能神經(jīng)元,進(jìn)而改善PD運(yùn)動(dòng)障礙,成為PD細(xì)胞替代治療的可行性方案之一。但是較少研究涉及NSCs移植后對(duì)黑質(zhì)內(nèi)鐵的沉積和銅藍(lán)蛋白的表達(dá)等病理微環(huán)境的影響。NSCs的增殖和神經(jīng)細(xì)胞的可塑性似乎與PD疾病進(jìn)程以及內(nèi)環(huán)境損傷的嚴(yán)重性密切相關(guān)。因此,我們的研究將探討NSCs移植到黑質(zhì)靶點(diǎn)對(duì)PD腦內(nèi)微環(huán)境尤其是鐵和銅藍(lán)蛋白代謝的改變以及對(duì)PD運(yùn)動(dòng)癥狀的影響。我們利用腦立體定位技術(shù)將活性良好的子代NSCs準(zhǔn)確地移植到PD鼠黑質(zhì)內(nèi),通過(guò)免疫組化染色計(jì)數(shù)正常對(duì)照組、PD模型組、NSCs移植組黑質(zhì)內(nèi)鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞、銅藍(lán)蛋白陽(yáng)性細(xì)胞、酪氨酸羥化酶陽(yáng)性細(xì)胞;Western blot和RT-PCR技術(shù)分別反映銅藍(lán)蛋白和酪氨酸羥化酶蛋白翻譯和基因表達(dá)水平;阿撲嗎啡誘發(fā)旋轉(zhuǎn)行為評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)障礙的改變。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),NSCs移植4周后,與對(duì)照組相比,模型組黑質(zhì)內(nèi)鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多,酪氨酸羥化酶和銅藍(lán)蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、蛋白翻譯和mRNA表達(dá)水平均降低。而與模型組相比,移植組鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少,酪氨酸羥化酶和銅藍(lán)蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、蛋白翻譯和mRNA表達(dá)均增高,但未達(dá)到正常水平。移植組在NSCs移植2周后,PD鼠旋轉(zhuǎn)行為較移植前明顯改善,而且持續(xù)到第8周,而模型組旋轉(zhuǎn)變化差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些研究結(jié)果提示PD鼠黑質(zhì)內(nèi)NSCs移植是可行的,移植的NSCs能夠分化產(chǎn)生多巴胺能神經(jīng)元,并且通過(guò)增加銅藍(lán)蛋白表達(dá)、減少鐵的沉積發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,進(jìn)而改善行為學(xué)障礙。
【關(guān)鍵詞】：帕金森病 神經(jīng)干細(xì)胞 鐵 銅藍(lán)蛋白 酪氨酸羥化酶
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 緒論12-23
• 1.1 帕金森病概述12-13
• 1.2 鐵離子13-17
• 1.3 氧化應(yīng)激反應(yīng)17-18
• 1.4 銅藍(lán)蛋白18-19
• 1.5 神經(jīng)干細(xì)胞19-21
• 1.6 酪氨酸羥化酶21-23
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法23-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-28
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞23
• 2.1.2 主要藥品和試劑23-27
• 2.1.3 主要儀器和耗材27-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-33
• 2.2.1 帕金森病模型建立28
• 2.2.2 旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)誘發(fā)28
• 2.2.3 神經(jīng)干細(xì)胞取材、培養(yǎng)28-29
• 2.2.4 神經(jīng)干細(xì)胞換液、傳代29
• 2.2.5 神經(jīng)干細(xì)胞移植29-30
• 2.2.6 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)30
• 2.2.7 腦組織取材和切片30
• 2.2.8 鐵染色30
• 2.2.9 銅藍(lán)蛋白染色30-31
• 2.2.10 酪氨酸羥化酶染色31
• 2.2.11 鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)31
• 2.2.12 Western blot31
• 2.2.13 Real Time  PCR31-33
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理33-34
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-41
• 3.1 神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)34-35
• 3.2 行為學(xué)測(cè)試35-36
• 3.3 鐵含量36-37
• 3.4 銅藍(lán)蛋白表達(dá)37-39
• 3.5 酪氨酸羥化酶表達(dá)39-41
• 第四章 討論41-44
• 第五章 結(jié)論44-45
• 第六章 結(jié)束語(yǔ)45-46
• 6.1 主要工作與創(chuàng)新點(diǎn)45
• 6.2 后續(xù)研究工作45-46
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 附錄54-60
• 致謝60-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表或錄用的論文61
• 攻讀碩士學(xué)位期間正在審稿的論文61

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本文編號(hào)：951018