本文關(guān)鍵詞：NUSAP1在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)以及對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞功能的影響

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【摘要】：背景腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見(jiàn)的惡性腫瘤,約占中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的40%,具有高度的侵襲性,術(shù)后易復(fù)發(fā),惡性程度逐漸加重等特點(diǎn)。膠質(zhì)瘤的臨床治療仍以手術(shù)切除病灶為主,結(jié)合放療和化療聯(lián)合治療,對(duì)腦膠質(zhì)瘤的治療起到了一定的療效。但是由于膠質(zhì)瘤高度的侵襲性,血供豐富,手術(shù)治療腦膠質(zhì)瘤并不能完全切除病灶,術(shù)后易復(fù)發(fā),并且復(fù)發(fā)間隔時(shí)間逐漸縮短,對(duì)于高級(jí)別膠質(zhì)瘤(WHO分級(jí)Ⅲ級(jí),Ⅳ級(jí))患者,5年存活率不足10%。目前腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制尚未不清楚。因此,有必要進(jìn)一步深入探究腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制,以及其發(fā)展、侵襲的分子生物學(xué)基礎(chǔ),從而能夠找到新的生物標(biāo)志物或者治療靶點(diǎn),及早預(yù)測(cè)腦膠質(zhì)瘤及其復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性,改善患者的預(yù)后。核仁主軸相關(guān)蛋白1(nucleolar spindle—associated proteinl, NuSAP1)是一種調(diào)控細(xì)胞周期蛋白,能夠促進(jìn)微管聚集,對(duì)紡錘體的組裝和形成起到重要作用,NUSAP1蛋白表達(dá)量在G2期達(dá)到高峰,細(xì)胞進(jìn)入分裂期后,其表達(dá)量下降,在細(xì)胞周期中呈周期性變化,對(duì)細(xì)胞增殖起關(guān)鍵作用,NUSAP1首次于2003年被發(fā)現(xiàn),隨著對(duì)其進(jìn)一步的研究,在乳腺癌、前列腺癌、肺癌等許多腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞株中都發(fā)現(xiàn)存在過(guò)表達(dá)情況,他的表達(dá)情況往往影響腫瘤的侵襲、增殖以及病人的預(yù)后情況,目前關(guān)于NUSAP1在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)尚無(wú)研究,NUSAP1對(duì)于腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲性的影響,患者的預(yù)后也沒(méi)有相關(guān)報(bào)道。目的NUSAP1在細(xì)胞周期中起到重要的調(diào)控作用,并且在許多腫瘤中都呈現(xiàn)出過(guò)表達(dá)狀態(tài),因此,NUSAP1功能紊亂可能和腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在著密切的關(guān)聯(lián),本實(shí)驗(yàn)從組織水平,細(xì)胞水平以及動(dòng)物水平研究NUSAP1在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá),分析NUSAP1對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株功能的影響及其分子機(jī)制。方法(1).收集手術(shù)切除的新鮮腦膠質(zhì)瘤樣本30例,正常腦組織(癲癇病灶)樣本10例,采用實(shí)時(shí)定量PCR, Western-blot,免疫組化檢測(cè)膠質(zhì)瘤組織和正常組織中NUSAP1的表達(dá)量。(2).通過(guò)Western-blot檢測(cè)正常膠質(zhì)細(xì)胞株(HEB)和膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(LN229、 T98G, U87、U251)中NUSAP1的表達(dá),利用SiRNA和慢病毒敲除膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中NUSAP1基因,構(gòu)建沉默NUSAP1基因的穩(wěn)定膠質(zhì)瘤細(xì)胞株。(3).采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖變化,transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡變化,并研究導(dǎo)致其凋亡的分子機(jī)制。結(jié)果(1). NUSAP1在腦膠質(zhì)瘤組織樣本中呈過(guò)表達(dá),并且其表達(dá)程度有隨著膠質(zhì)瘤級(jí)別的升高而增強(qiáng)的趨勢(shì),在正常腦組織中則表達(dá)不明顯。(2). NUSAP1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中也呈過(guò)表達(dá)狀態(tài),抑制細(xì)胞中的NUSAP1的表達(dá)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖、侵襲能力下降,并且導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增加,細(xì)胞周期紊亂,停滯于G1期的細(xì)胞增多。(3).通過(guò)Western-blot檢測(cè)凋亡指標(biāo)發(fā)現(xiàn)p21、p53基因在抑制NUSAP1表達(dá)的LN229細(xì)胞中的表達(dá)量增加,同時(shí)caspase3、caspase8也在抑制NUSAP1表達(dá)的LN229細(xì)胞中表達(dá)量增加。結(jié)論我們通過(guò)研究首次發(fā)現(xiàn)NUSAP1在腦膠質(zhì)瘤中過(guò)表達(dá),抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中NUSAP1的表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞停滯于G1期,其增殖、侵襲能力下降,細(xì)胞凋亡增加,在NUSAP1表達(dá)受到抑制的LN229細(xì)胞中,我們發(fā)現(xiàn)其p21、p53、caspase3、 caspase8表達(dá)量升高,p21基因能夠和p53基因共同構(gòu)成G1期檢查站,由于抑制NUSAP1表達(dá),細(xì)胞停滯于G1期,這可能激活了p21基因介導(dǎo)的凋亡通路,并通過(guò)caspase8啟動(dòng)凋亡程序,NUSAP1很可能作為癌基因或者能夠激活癌基因?qū)е铝四X膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展,NUSAP1也有可能為今后腦膠質(zhì)瘤的治療提供了新的藥物治療靶點(diǎn)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 核仁主軸相關(guān)蛋白1 細(xì)胞周期 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-25
• 結(jié)果25-40
• 討論40-42
• 小結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 綜述47-57
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況57-58
• 主要縮略詞中英文對(duì)照58-59
• 致謝59-60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張猛;楊定華;劉蕭;劉延;梁鑒坤;;Nusap1蛋白在肝癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年09期

2 謝萍;李璐;張令強(qiáng);賀福初;;微管結(jié)合蛋白NuSAP的組織表達(dá)譜分析[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2010年06期

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本文編號(hào)：948233