本文關鍵詞：NUSAP1在腦膠質(zhì)瘤中的表達以及對腦膠質(zhì)瘤細胞功能的影響

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【摘要】：背景腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見的惡性腫瘤,約占中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的40%,具有高度的侵襲性,術后易復發(fā),惡性程度逐漸加重等特點。膠質(zhì)瘤的臨床治療仍以手術切除病灶為主,結(jié)合放療和化療聯(lián)合治療,對腦膠質(zhì)瘤的治療起到了一定的療效。但是由于膠質(zhì)瘤高度的侵襲性,血供豐富,手術治療腦膠質(zhì)瘤并不能完全切除病灶,術后易復發(fā),并且復發(fā)間隔時間逐漸縮短,對于高級別膠質(zhì)瘤(WHO分級Ⅲ級,Ⅳ級)患者,5年存活率不足10%。目前腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病機制尚未不清楚。因此,有必要進一步深入探究腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病機制,以及其發(fā)展、侵襲的分子生物學基礎,從而能夠找到新的生物標志物或者治療靶點,及早預測腦膠質(zhì)瘤及其復發(fā)的危險性,改善患者的預后。核仁主軸相關蛋白1(nucleolar spindle—associated proteinl, NuSAP1)是一種調(diào)控細胞周期蛋白,能夠促進微管聚集,對紡錘體的組裝和形成起到重要作用,NUSAP1蛋白表達量在G2期達到高峰,細胞進入分裂期后,其表達量下降,在細胞周期中呈周期性變化,對細胞增殖起關鍵作用,NUSAP1首次于2003年被發(fā)現(xiàn),隨著對其進一步的研究,在乳腺癌、前列腺癌、肺癌等許多腫瘤組織和腫瘤細胞株中都發(fā)現(xiàn)存在過表達情況,他的表達情況往往影響腫瘤的侵襲、增殖以及病人的預后情況,目前關于NUSAP1在腦膠質(zhì)瘤中的表達尚無研究,NUSAP1對于腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲性的影響,患者的預后也沒有相關報道。目的NUSAP1在細胞周期中起到重要的調(diào)控作用,并且在許多腫瘤中都呈現(xiàn)出過表達狀態(tài),因此,NUSAP1功能紊亂可能和腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在著密切的關聯(lián),本實驗從組織水平,細胞水平以及動物水平研究NUSAP1在腦膠質(zhì)瘤中的表達,分析NUSAP1對腦膠質(zhì)瘤細胞株功能的影響及其分子機制。方法(1).收集手術切除的新鮮腦膠質(zhì)瘤樣本30例,正常腦組織(癲癇病灶)樣本10例,采用實時定量PCR, Western-blot,免疫組化檢測膠質(zhì)瘤組織和正常組織中NUSAP1的表達量。(2).通過Western-blot檢測正常膠質(zhì)細胞株(HEB)和膠質(zhì)瘤細胞株(LN229、 T98G, U87、U251)中NUSAP1的表達,利用SiRNA和慢病毒敲除膠質(zhì)瘤細胞株中NUSAP1基因,構(gòu)建沉默NUSAP1基因的穩(wěn)定膠質(zhì)瘤細胞株。(3).采用CCK-8法檢測細胞增殖變化,transwell法檢測細胞侵襲能力；流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡變化,并研究導致其凋亡的分子機制。結(jié)果(1). NUSAP1在腦膠質(zhì)瘤組織樣本中呈過表達,并且其表達程度有隨著膠質(zhì)瘤級別的升高而增強的趨勢,在正常腦組織中則表達不明顯。(2). NUSAP1在膠質(zhì)瘤細胞株中也呈過表達狀態(tài),抑制細胞中的NUSAP1的表達會導致細胞增殖、侵襲能力下降,并且導致細胞凋亡增加,細胞周期紊亂,停滯于G1期的細胞增多。(3).通過Western-blot檢測凋亡指標發(fā)現(xiàn)p21、p53基因在抑制NUSAP1表達的LN229細胞中的表達量增加,同時caspase3、caspase8也在抑制NUSAP1表達的LN229細胞中表達量增加。結(jié)論我們通過研究首次發(fā)現(xiàn)NUSAP1在腦膠質(zhì)瘤中過表達,抑制膠質(zhì)瘤細胞株中NUSAP1的表達可導致細胞停滯于G1期,其增殖、侵襲能力下降,細胞凋亡增加,在NUSAP1表達受到抑制的LN229細胞中,我們發(fā)現(xiàn)其p21、p53、caspase3、 caspase8表達量升高,p21基因能夠和p53基因共同構(gòu)成G1期檢查站,由于抑制NUSAP1表達,細胞停滯于G1期,這可能激活了p21基因介導的凋亡通路,并通過caspase8啟動凋亡程序,NUSAP1很可能作為癌基因或者能夠激活癌基因?qū)е铝四X膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展,NUSAP1也有可能為今后腦膠質(zhì)瘤的治療提供了新的藥物治療靶點促進腫瘤細胞的凋亡。
【關鍵詞】：膠質(zhì)瘤 核仁主軸相關蛋白1 細胞周期 細胞凋亡
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-25
• 結(jié)果25-40
• 討論40-42
• 小結(jié)42-43
• 參考文獻43-47
• 綜述47-57
• 參考文獻51-57
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況57-58
• 主要縮略詞中英文對照58-59
• 致謝59-60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張猛;楊定華;劉蕭;劉延;梁鑒坤;;Nusap1蛋白在肝癌中的表達及其臨床意義[J];中南大學學報(醫(yī)學版);2013年09期

2 謝萍;李璐;張令強;賀福初;;微管結(jié)合蛋白NuSAP的組織表達譜分析[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2010年06期

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本文編號：948233