發(fā)布時(shí)間：2017-09-29 03:36

  本文關(guān)鍵詞：D-阿洛糖預(yù)治療對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： D-阿洛糖 腦缺血再灌注 抗炎作用 血腦屏障 保護(hù)作用

【摘要】：腦卒中是一種發(fā)生機(jī)理復(fù)雜的疾病,由于腦血流量急劇改變引起多級(jí)聯(lián)病理生理變化,造成機(jī)體一系列的代謝紊亂和功能障礙,具有破壞性。腦缺血再灌注損傷指缺血后腦組織細(xì)胞損傷,恢復(fù)血流后,不僅沒有緩解腦組織損傷,反而加重腦缺血引起的功能障礙,造成腦組織結(jié)構(gòu)進(jìn)一步破壞,對(duì)腦組織危害極大,因此,抑制腦缺血后再灌注損傷將成為治療腦卒中的重要措施。炎性反應(yīng)是缺血再灌注損傷的重要機(jī)制之一,大腦缺血再灌注過程中,大量神經(jīng)元凋亡,腦組織內(nèi)產(chǎn)生大量的活性氧簇(ROS),同時(shí)刺激缺血區(qū)炎癥細(xì)胞產(chǎn)生更多炎性因子、趨化因子及粘附分子等,誘導(dǎo)白細(xì)胞集聚,引起微血管低灌注,造成微循環(huán)障礙、血腦屏障破壞及腦組織炎性損傷[1-3]。因此,尋找能夠保護(hù)腦組織、減輕缺血再灌注損傷的藥物迫在眉睫。從非洲的灌木樹葉中可以提取出一種罕見單糖——D-阿洛糖。D-阿洛糖的生物學(xué)作用包括降低血液中的血脂血糖濃度,清除體內(nèi)自由基,減輕缺血再灌注損傷以及抗腫瘤效應(yīng)等[4,5]。目前研究發(fā)現(xiàn),D-阿洛糖可以減輕移植排斥反應(yīng)及肝、腎等器官的缺血再灌注反應(yīng)[6]和腹部島狀皮瓣缺血再灌注損傷[7]。D-阿洛糖的神經(jīng)保護(hù)作用已經(jīng)成為缺血再灌注損傷研究領(lǐng)域熱點(diǎn)課題之一。為了進(jìn)一步明確D-阿洛糖對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用,本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了更加深入的研究,并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了初步探討。本實(shí)驗(yàn)研究包括兩部分:第一部分建立小鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(mcao)模型,研究d-阿洛糖對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用,第二部分探討d-阿洛糖發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制。實(shí)驗(yàn)一d-阿洛糖預(yù)治療對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用目的:建立小鼠大腦中動(dòng)脈栓塞模型,探討d-阿洛糖對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法:20~25g的雄性balb/c小鼠60只,按照隨機(jī)分配原則分為假手術(shù)組15只(shamgroup)、治療組15只(mcao+d-allosegroup,術(shù)前1h,從小鼠尾靜脈注射,劑量為400mg/kg)、生理鹽水對(duì)照組15只(mcao+nsgroup)、模型組15只(mcaogroup)。小鼠的大腦中動(dòng)脈栓塞模型使用栓線法制備,手術(shù)時(shí)間為15~20min,大腦缺血時(shí)間為120min,再灌注時(shí)間為24h。小鼠腦缺血再灌注神經(jīng)功能損傷評(píng)分是在手術(shù)后24h,采用改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分(mnss);采用2%氯化三苯基四氮唑(ttc)染色方法測(cè)定小鼠的腦梗死體積;采用干-濕重法測(cè)定腦含水率;采用伊文思藍(lán)(eb)染色方法評(píng)估小鼠血腦屏障的通透性;采用he染色方法檢測(cè)小鼠腦皮質(zhì)缺血區(qū)的病理損傷程度;采用nissl染色檢測(cè)小鼠腦組織海馬神經(jīng)元的損傷程度;采用免疫組化方法檢測(cè)小鼠腦皮質(zhì)基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp-9)的表達(dá)量。結(jié)果:與模型組小鼠比較,治療組mnss評(píng)分明顯降低(p0.05);ttc染色結(jié)果顯示,治療組腦梗死體積百分比(13.21±8.19)%明顯小于模型組小鼠腦梗死體積百分比(26.31±3.18)%(p0.05),生理鹽水對(duì)照組腦梗死體積百分比(25.93±8.23)%與模型組小鼠腦梗死體積百分比比較沒有明顯差異(p0.05);腦含水率測(cè)定,與模型組小鼠腦含水率(82.79±0.48)%比較,治療組小鼠腦含水率(79.85±0.42)%明顯降低(p0.05),生理鹽水對(duì)照組小鼠腦組織含水率(82.97±0.22)%與模型組小鼠腦組織含水率之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);eb染色顯示,與模型組通過血腦屏障的eb(12.94±1.13)μg/g相比,治療組小鼠通過血腦屏障的eb(4.40±0.52)μg/g明顯降低(p0.05);he染色結(jié)果顯示,與模型組比較,治療組小鼠腦皮質(zhì)梗死區(qū)病理損傷減輕,形態(tài)正常的細(xì)胞數(shù)量較多,細(xì)胞核碎裂減輕;Nissl染色顯示,與模型組比較,治療組海馬區(qū)形態(tài)正常的神經(jīng)元數(shù)量較多,神經(jīng)元間隙縮小;免疫組化顯示,與模型組相比,治療組小鼠腦皮質(zhì)梗死區(qū)的MMP-9表達(dá)量明顯減少。結(jié)論:D-阿洛糖對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用,可能與其抑制MMP-9,進(jìn)而保護(hù)血腦屏障有關(guān)。實(shí)驗(yàn)二D-阿洛糖預(yù)治療對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究目的:在前期研究的基礎(chǔ)上,研究D-阿洛糖保護(hù)小鼠腦缺血再灌注損傷的可能機(jī)制。方法:體重為20~25g的雄性Balb/C小鼠35只,按照隨機(jī)分配原則分為假手術(shù)組10只(sham group)、模型組10只(MCAO group)、治療組10只(MCAO+D-allose group)、拮抗組5只(MCAO+GW9662 group)。模型制備及D-阿洛糖治療方法同前,GW9662(1mg/kg)采用腹腔注射方式。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)小鼠血清TNF-α及IL-1β的表達(dá)量;采用免疫組化(IHC)檢測(cè)小鼠皮質(zhì)TNF-α、NF-k B、ICAM-1和VCAM-1蛋白分子的表達(dá)量;采用免疫印跡法(WB)檢測(cè)PPARγ、NF-k B、TNF-α蛋白表達(dá)量。結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示,與模型組比較,治療組腦皮質(zhì)梗死區(qū)TNF-α、NF-k B、ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)量明顯減少(P0.05);ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,與模型組相比,治療組小鼠血清TNF-α及IL-1β的表達(dá)量明顯降低(P0.05);WB結(jié)果顯示,與模型組比較,治療組腦組織PPARγ增多,NF-k B及TNF-α蛋白表達(dá)量明顯減少(P0.05)。與治療組比較,拮抗組腦組織PPARγ降低,NF-k B及TNF-α蛋白表達(dá)量明顯增多(P0.05)。結(jié)論:D-阿洛糖可能通過抑制炎性介質(zhì)產(chǎn)生,發(fā)揮抗炎效應(yīng),減輕血腦屏障損傷,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：D-阿洛糖 腦缺血再灌注 抗炎作用 血腦屏障 保護(hù)作用
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-14
• 文獻(xiàn)回顧14-24
• 實(shí)驗(yàn)一 D-阿洛糖預(yù)治療對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用24-42
• 1 材料24-26
• 2 方法26-32
• 3 結(jié)果32-39
• 4 討論39-42
• 實(shí)驗(yàn)二 D-阿洛糖預(yù)治療對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究42-54
• 1 材料42-43
• 2 方法43-47
• 3 結(jié)果47-51
• 4 討論51-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-65
• 附錄65-66
• 個(gè)人簡歷和研究成果66-67
• 致謝67

，

本文編號(hào)：939802