本文關(guān)鍵詞：miR-584對人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲和遷移能力的影響

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【摘要】：研究背景和目的microRNAs是一類廣泛存在于動植物細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)源性非編碼基因,大小約21-25個堿基,它可以調(diào)控轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá),對腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有重要作用。當(dāng)前研究顯示microRNAs對腫瘤的發(fā)生發(fā)展及凋亡、侵襲等生物學(xué)行為具有調(diào)控作用,隨著對microRNAs研究的進(jìn)一步深入,microRNAs有望成為腫瘤診斷、治療及判斷預(yù)后的靶點及分子標(biāo)志。現(xiàn)研究證實,microRNAs與膠質(zhì)瘤的關(guān)系密切。本實驗的目的為探討miR-584對人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。方法(1)細(xì)胞培養(yǎng)用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,置于37℃、5%C02培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)細(xì)胞匯合率達(dá)60%-70%時進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染,步驟參照美國Invitrogen公司的Lipofectamine2000說明書進(jìn)行,轉(zhuǎn)染濃度為5ug/孔。(2)實驗轉(zhuǎn)染及分組將化學(xué)合成的miR-584-3p在脂質(zhì)體Lipofectamine 2000的介導(dǎo)下,瞬時轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251細(xì)胞,實驗分為空白對照組(無轉(zhuǎn)染,其他條件相同)、mimics NC組(轉(zhuǎn)染miR-584-3p mimics陰性對照序列)、miR-584-3pmimics組(轉(zhuǎn)染miR-584-3p mimics)、inhibitor NC組(轉(zhuǎn)染miR-584-3p inhibitor陰性對照序列)和miR-584-3p inhibitor組(轉(zhuǎn)染miR-584-3p inhibitor).(3)microRNA提取和反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)染后48h,按照Trizol試劑說明書提取各組細(xì)胞的microRNA。反應(yīng)條件：37℃反應(yīng)15min,98℃反應(yīng)5min,4℃維持。可將反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物置于—20℃保存?zhèn)溆谩?4) Real-time PCR法檢測細(xì)胞中miR-584-3p的表達(dá)水平；按照SYBR(R) Green Ⅰ嵌合熒光法Real-time PCR試劑盒說明書操作,以U6為內(nèi)參,1niR-584-3p的相對表達(dá)量以2-△△ct表示,計算各個樣品的表達(dá)量。(5)CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力。(6)劃痕實驗和Transwell小室實驗分別檢測細(xì)胞的遷移和侵襲能力。結(jié)果與空白對照組和]mimics NC組相比,miR-584-3p mimics組的miR-584-3p表達(dá)上調(diào)約100倍(P0.05),細(xì)胞增殖能力無明顯差異(P0.05),細(xì)胞侵襲和遷移能力明顯下降(P0.05);與空白對照組和inhibitor NC組相比,miR-584-3p inhibitor組的miR-584-3p表達(dá)下調(diào)至空白對照組的5%(P0.05),細(xì)胞增殖能力無明顯差異(P0.05),細(xì)胞侵襲和遷移能力顯著增強(P0.05)。結(jié)論miR-584-3p mimics轉(zhuǎn)染后抑制了U251細(xì)胞的侵襲和遷移能力；miR-584-3p inhibitor轉(zhuǎn)染后能增強了U251細(xì)胞的侵襲和遷移能力。因此,miR-584-3p可能成為膠質(zhì)瘤基因治療的新靶點。
【關(guān)鍵詞】：miR-584 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 侵襲 遷移
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符號說明11-13
• 前言13-15
• 材料與方法15-24
• 結(jié)果24-26
• 討論26-29
• 結(jié)論29-30
• 附圖30-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述37-54
• 參考文獻(xiàn)44-54
• 致謝54-55
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文55-56
• 附件56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;MicroRNAs in neural cell development and brain diseases[J];Science China(Life Sciences);2011年12期

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本文編號：914687