發(fā)布時間：2017-09-23 19:20

  本文關鍵詞：GSK3β調節(jié)神經(jīng)細胞自噬在帕金森病發(fā)病中的作用及機制研究

  更多相關文章： 帕金森病 GSK3β α-synuclein 自噬

【摘要】：目的:篩選穩(wěn)定表達A30Pα-synuclein的PC12細胞株為研究對象,通過細胞和分子水平的實驗,初步探討表達不同活性的GSK3β對自噬通路的調節(jié)是否會引起α-synuclein自噬水平的變化及其對細胞生長的影響。方法:1.將A30Pα-synuclein質粒轉染至生長狀態(tài)良好的PC12細胞,并通過G418篩選穩(wěn)定表達細胞。2.脂質體法將GSK-3β過表達質粒、GSK-3β沉默質粒及空白質粒轉染至A30Pα-synuclein的PC12細胞株,篩選不同穩(wěn)定表達GSK3β活性的細胞株,Werstern blot檢測GSK-3β轉染后的表達情況,驗證轉染效率。3.Western blot檢測各組細胞中LC-3Ⅱ、Beclin1、α-synuclein的表達。4.MTT法檢測細胞增殖能力的變化。5.TUNEL法檢測細胞凋亡變化。結果:1.GSK3β過表達組與GSK3β沉默組、空白質粒組、空白對照組相比:LC-3Ⅱ及Beclin1的表達增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);α-synuclein的表達減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);MTT及TUNEL法結果表明細胞的凋亡減少,存活增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.GSK3β沉默組與GSK3β沉默組、空白質粒組、空白對照組相比:LC-3Ⅱ及Beclin1的表達減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);α-synuclein的表達增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);MTT及TUNEL法結果表明細胞的凋亡增多,存活減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:GSK-3β可增加穩(wěn)定表達A30Pα-synuclein的PC12細胞的自噬水平,從而有助于細胞的存活。
【關鍵詞】：帕金森病 GSK3β α-synuclein 自噬
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要縮略詞9-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 材料與方法14-26
• 一、材料14-19
• 二、 實驗方法19-26
• 第三章 實驗結果26-32
• 一、G418 篩選獲得穩(wěn)定表達 A30P a-synuclein 細胞（圖 3.1）26
• 二、Western blot 檢測 GSK-3β的蛋白的表達，，驗證轉染效率26-27
• 三、熒光顯微鏡觀察細胞轉染效率27
• 四、Western blot 檢測轉染后 LC3II，Beclin1，A-synuclein的表達情況27-30
• 五、MTT 檢測轉染后細胞的增殖活性30-31
• 六、TUNEL 法檢測細胞凋亡31-32
• 第四章 討論32-36
• 第五章 結論36-38
• 參考文獻38-42
• 附圖42-46
• 綜述46-55
• 參考文獻51-55
• 成果目錄55-56
• 致謝56

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本文編號：907049