本文關(guān)鍵詞：GSK3β調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞自噬在帕金森病發(fā)病中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 帕金森病 GSK3β α-synuclein 自噬

【摘要】：目的:篩選穩(wěn)定表達(dá)A30Pα-synuclein的PC12細(xì)胞株為研究對(duì)象,通過(guò)細(xì)胞和分子水平的實(shí)驗(yàn),初步探討表達(dá)不同活性的GSK3β對(duì)自噬通路的調(diào)節(jié)是否會(huì)引起α-synuclein自噬水平的變化及其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。方法:1.將A30Pα-synuclein質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至生長(zhǎng)狀態(tài)良好的PC12細(xì)胞,并通過(guò)G418篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞。2.脂質(zhì)體法將GSK-3β過(guò)表達(dá)質(zhì)粒、GSK-3β沉默質(zhì)粒及空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至A30Pα-synuclein的PC12細(xì)胞株,篩選不同穩(wěn)定表達(dá)GSK3β活性的細(xì)胞株,Werstern blot檢測(cè)GSK-3β轉(zhuǎn)染后的表達(dá)情況,驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。3.Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中LC-3Ⅱ、Beclin1、α-synuclein的表達(dá)。4.MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化。5.TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化。結(jié)果:1.GSK3β過(guò)表達(dá)組與GSK3β沉默組、空白質(zhì)粒組、空白對(duì)照組相比:LC-3Ⅱ及Beclin1的表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);α-synuclein的表達(dá)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);MTT及TUNEL法結(jié)果表明細(xì)胞的凋亡減少,存活增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.GSK3β沉默組與GSK3β沉默組、空白質(zhì)粒組、空白對(duì)照組相比:LC-3Ⅱ及Beclin1的表達(dá)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);α-synuclein的表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);MTT及TUNEL法結(jié)果表明細(xì)胞的凋亡增多,存活減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:GSK-3β可增加穩(wěn)定表達(dá)A30Pα-synuclein的PC12細(xì)胞的自噬水平,從而有助于細(xì)胞的存活。
【關(guān)鍵詞】：帕金森病 GSK3β α-synuclein 自噬
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R742.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要縮略詞9-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 材料與方法14-26
• 一、材料14-19
• 二、 實(shí)驗(yàn)方法19-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-32
• 一、G418 篩選獲得穩(wěn)定表達(dá) A30P a-synuclein 細(xì)胞（圖 3.1）26
• 二、Western blot 檢測(cè) GSK-3β的蛋白的表達(dá)，，驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率26-27
• 三、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率27
• 四、Western blot 檢測(cè)轉(zhuǎn)染后 LC3II，Beclin1，A-synuclein的表達(dá)情況27-30
• 五、MTT 檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的增殖活性30-31
• 六、TUNEL 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡31-32
• 第四章 討論32-36
• 第五章 結(jié)論36-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 附圖42-46
• 綜述46-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 成果目錄55-56
• 致謝56

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本文編號(hào)：907049