本文關(guān)鍵詞：HMGB-1抑制劑甘草酸對大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后血腦屏障和神經(jīng)元的影響及機制研究

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【摘要】：第一部分HMGB-1抑制劑甘草酸對大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后血腦屏障和神經(jīng)元的影響目的：研究HMGB-1抑制劑甘草酸對大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epile pticus, SE)后血腦屏障及神經(jīng)元的影響方法：1、將體重220～250g 12周齡的雄性SD大鼠隨機分為四組：空白對照組、癲癇模型組、低劑量甘草酸干預(yù)組、高劑量甘草酸干預(yù)組(n=8)。癲癇模型組和甘草酸干預(yù)組大鼠經(jīng)腹腔注射氯化鋰-匹羅卡品(lithium pilocarpine, LHC)后,誘導(dǎo)癲癇持續(xù)狀態(tài)模型,低、高劑量甘草酸干預(yù)組分別在造模成功后2小時再分別給予甘草酸(lOmg/kg, i.p.)及(30mg/kg, i.p.),同時癲癇模型組給予等比例的生理鹽水注射。空白對照組在以上各注射時間點給予相應(yīng)劑量的生理鹽水。2、造模成功72h后,給予各組大鼠一側(cè)股靜脈2%伊文思藍(lán)4ml/kg注射,1小時后行心臟灌注,測定腦組織中伊文思藍(lán)含量,通過伊文思藍(lán)滲出量來作為血腦屏障通透性的評價指標(biāo)。3、造模成功72h后死大鼠,取出各組大鼠大腦組織并置于密封試管內(nèi)備用,通過干濕重法測定大腦含水量。4、SE后72h用4%多聚甲醛經(jīng)心臟灌注各組大鼠,斷頭取腦,并用石蠟固定腦組織備用,采用FJB染色法檢測大鼠海馬神經(jīng)元變性情況。5、統(tǒng)計SE后1周各組大鼠的死亡率。結(jié)果：1、伊文思藍(lán)與空白對照組相比,癲癇模型組伊文思藍(lán)滲出明顯增加(p0.05)；低劑量甘草酸干預(yù)組與癲癇模型組相比,滲出量減少但無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)；高劑量甘草酸干預(yù)組與癲癇模型組相比,滲出量有了顯著降(p0.05)。2、大腦組織含水量癲癇模型組較空白對照組大腦含水量有明顯增加p0.05)；低劑量甘草酸干預(yù)組與癲癇模型組相比,滲出量無明顯差異（p0.05)；高劑量甘草酸干預(yù)組與癲癇模型組相比,大腦含水量降低(p0.05)。3、海馬組織神經(jīng)元變性FJB染色法對海馬區(qū)變性神經(jīng)元細(xì)胞進行標(biāo)記顯示,正常對照組：大鼠海馬CA1、CA3、DH區(qū)均無FJB陽性細(xì)胞；癲癇模型組：海馬CA1、CA3、DH區(qū)可見大量連續(xù)分布的FJB陽性神經(jīng)元；低劑量甘草酸干預(yù)組：CA1、CA3、DH區(qū)FJB陽性神經(jīng)元也成呈大量分布,但較癲癇組減少,尤其是DH區(qū)；高劑量甘草酸干預(yù)組CA1、CA3、DH區(qū)FJB陽性神經(jīng)元均較癲癇組明顯減少。4、死亡率對各組大鼠SE后一周內(nèi)死亡率進行統(tǒng)計,四組分別為：空白對照組0.0%(0/8),癲癇組42.1%(8/19),低劑量甘草酸干預(yù)組38.9%(7/18),高劑量甘草酸干預(yù)組18.8%(3/16)。癲癇模型組較空白對照組死亡率顯著增加(p0.05)；低劑量甘草酸干預(yù)組和癲癇模型組相比死亡率降低,但無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)；高劑量甘草酸干預(yù)組較癲癇模型組死亡率明顯下降(p0.05)。結(jié)論：在大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型中,大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后可引起急性期血腦屏障破壞、腦組織水腫、神經(jīng)元退行變性以及死亡率增加,給予有效劑量HMGB-1(high-mobility group box 1 protein,高遷移率族蛋白-1)抑制劑甘草酸干預(yù)后可減輕SE后血腦屏障完整性的破壞、改善急性腦水腫以及海馬區(qū)神經(jīng)元變性、降低死亡率。本實驗通過抑制HMGB-1活性,改善了大鼠癇性持續(xù)狀態(tài)后的病理生理表現(xiàn),提示HMGB-1在癲癇導(dǎo)致腦損傷過程中扮演的重要作用,同時甘草酸作為HMGB-1抑制劑發(fā)揮了抗癲癇持續(xù)狀態(tài)后腦損傷的作用,甘草酸作為抗癲癇治療潛在的新藥值得進一步深入研究。第二部分HMGB-1抑制劑甘草酸減輕大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后血腦屏障損壞的分子學(xué)機制研究目的：HMGB-1抑制劑甘草酸對大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)后血腦屏障保護作用的分子學(xué)機制研究方法：1、將體重220-250g 12周齡的雄性SD大鼠隨機分為空白對照組與癲癇模型組(亞組：3h.24h、72h、1w,n=8),構(gòu)建大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型,于SE后3h.24h、72h、1w各個時間點處死大鼠后取海馬組織備用,采用免疫印跡法(western blot)測定海馬組織HMGB-1表達(dá)情況。2、SD大鼠被隨機分為三組(空白對照組、癲癇模型組、高劑量甘草酸干預(yù)組)。癲癇模型組和甘草酸干預(yù)組大鼠通過腹腔注射LHC誘導(dǎo)大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型,高劑量甘草酸干預(yù)組在SE后2小時給予高劑量甘草酸(30mg/kg, i.p.)注射,癲癇模型組給予等比例的生理鹽水注射,空白對照組在以上注射點分別給予相應(yīng)劑量的生理鹽水,通過Western Blot法測定SE后72h各組大鼠大腦皮質(zhì)及海馬中的TNF-a表達(dá)情況。結(jié)果：1、海馬組織HMGB-1表達(dá)大鼠海馬組織HMGB-1蛋白在空白對照組有少量表達(dá),與空白對照組相比,SE后3hHMGB-1蛋白出現(xiàn)表達(dá)增高但無統(tǒng)計學(xué)差異p0.05),SE后24 h可達(dá)峰值(西0.05),SE后72h組比SE后24h組出現(xiàn)下降⑦0.05),SE后1周]HMGB-1表達(dá)量低于SE后72h組p0.05),接近空白照組00.05)。2、TNF-a在大腦皮質(zhì)及海馬的表達(dá)SE后72h,TNF-a在癲癇模型組皮層和海馬的表達(dá)均較空白對照組明顯上調(diào)(p0.05),高劑量甘草酸干預(yù)組的TNF-a表達(dá)較癲癇模型組明顯降低(p0.05),TNA-a在皮質(zhì)及海馬的表達(dá)總體趨勢一致。結(jié)論：本研究表明,大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后可出現(xiàn)海馬組織促炎癥因子HMGB-1表達(dá)量增高,炎癥因子TNF-a的蛋白在大腦皮質(zhì)及海馬的表達(dá)上調(diào),在給予HMGB-1抑制劑甘草酸干預(yù)后,TNF-a表達(dá)顯著下降。大量文獻(xiàn)證實TNF-a可通過誘導(dǎo)內(nèi)皮素(endothelin-1, ET-1)表達(dá)異常導(dǎo)致血腦屏障通透性增高,TNF-a可能是改變SE后血腦屏障通透性的關(guān)鍵因子之一。結(jié)合前期實驗甘草酸作為HMGB-1抑制劑可以使血腦屏障緊密連接破壞減少,維持其完整性的結(jié)論,推測甘草酸對血腦屏障的保護作用可能是通過抑制HMGB-1活性繼而減少了TNF-a的釋放實現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型 血腦屏障 神經(jīng)元變性 甘草酸 大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài) HMGB-1 甘草酸 TNF-a
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R742.1
【目錄】：

• 中文摘要3-7
• 英文摘要7-11
• 第一部分 HMGB-1抑制劑甘草酸對大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后血腦屏障和神經(jīng)元的影響11-31
• 前言11-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-23
• 討論23-27
• 結(jié)論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-31
• 第二部分 HMGB-1抑制劑甘草酸減輕大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后血腦屏障損壞的分子學(xué)機制研究31-46
• 前言31-32
• 材料與方法32-38
• 結(jié)果38-41
• 討論41-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 英文縮略詞對照表46-47
• 致謝47-48
• 綜述48-62
• 參考文獻(xiàn)55-62

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本文編號：905008