本文關(guān)鍵詞：Plexin-B1對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲遷移和血管生成的影響及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： Plexin-B1 膠質(zhì)瘤 αvβ3 RhoA SRPK1

【摘要】：神經(jīng)膠質(zhì)瘤是成人中最常見的原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤,其呈浸潤性生長且侵襲性極強(qiáng),是預(yù)后差、易復(fù)發(fā)的富血管性實(shí)體腫瘤。目前膠質(zhì)瘤治療方法包括手術(shù)切除、放化療、基因治療等新生物治療,盡管取得了一些成果但對膠質(zhì)瘤預(yù)后的改善仍有限。造成這些困難的原因有多種,其中最主要的有兩方面：1,膠質(zhì)瘤細(xì)胞呈浸潤性生長,使腫瘤組織與正常腦組織分界不清,手術(shù)不能完全切除腫瘤組織,殘留的腫瘤細(xì)胞成為復(fù)發(fā)灶的種子；2,膠質(zhì)瘤為富血管性實(shí)體腫瘤,豐富的血供為腫瘤細(xì)胞提供充足的養(yǎng)分,為其迅速增殖提供物質(zhì)基礎(chǔ)。因此,探尋有效分子標(biāo)記為診斷、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、血管生成提供靶點(diǎn),從而提高膠質(zhì)瘤的治療效果、改善預(yù)后。作為Sema4D跨膜蛋白受體的Plexin-B1起初作為神經(jīng)導(dǎo)向分子而被廣泛研究。近年來隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)Plexin-B1可參與到多種細(xì)胞過程中,尤其在腫瘤的發(fā)展進(jìn)程和血管生成中起到了重要的作用,已作為腫瘤診斷、分子治療的新靶點(diǎn)�，F(xiàn)有的研究表明,Plexin-B1在正常腦組織中微量表達(dá),隨著膠質(zhì)瘤病理級別的增加其表達(dá)量也隨之增多,可作為診斷膠質(zhì)瘤的潛在分子標(biāo)志物及免疫治療的新靶點(diǎn)。然而,Plexin-B1在膠質(zhì)瘤的進(jìn)展進(jìn)程中所起到的作用及相關(guān)調(diào)控機(jī)制尚未可知。為研究Plexin-B1對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲遷移和血管生成的影響及相關(guān)機(jī)制,我們展開了相關(guān)的研究。首先,我們通過對膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,確定Sema4D及Plexin-B1在正常星形膠質(zhì)細(xì)胞中幾乎不表達(dá),而在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中其達(dá)量顯著上調(diào)。隨后,我們使用shRNA抑制Plexin-B1的表達(dá),應(yīng)用RT-PCR及western blot鑒定轉(zhuǎn)導(dǎo)是否成功,應(yīng)用嘌呤霉素篩選出穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。其次,為研究Plexin-B1對膠質(zhì)瘤生長凋亡的影響,我們應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)及線粒體膜電位檢測技術(shù)研究Plexin-B1對膠質(zhì)瘤凋亡的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,沉默Plexin-B1組與對照組相比,早期凋亡的瘤細(xì)胞數(shù)量明顯增加,線粒體膜電位顯著下降。通過構(gòu)建荷瘤鼠在體成瘤,結(jié)果表明Plexin-B1沉默組瘤體大小顯著小于對照組,沉默Plexin-B1可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長。再次,為研究Plexin-B1對膠質(zhì)瘤侵襲及遷移能力的作用,我們應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn),Transwell小室進(jìn)行侵襲和遷移實(shí)驗(yàn),細(xì)胞骨架染色進(jìn)行研究,并通過RT-PCR、Western blot檢測α v β 3、RhoA、RhoB、RhoC、SRPK1的表達(dá)情況,免疫共沉淀檢測Plexin-B1是否調(diào)控細(xì)胞骨架影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞運(yùn)動,結(jié)果表明,Plexin-B1可通過影響細(xì)胞骨架而促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲及遷移,這種作用是通過激活α v β3、RhoA、SRPK1完成的。為研究Plexin-B1與SRPKl的關(guān)系,我們應(yīng)用SRPK1 shRNA沉默SRPKl并證實(shí)SRPK1對α v β 、RhoA及Plexin-B1無影響。隨后,我們研究了Plexin-B1、 SRPK1對膠質(zhì)瘤血管生成的作用,在體環(huán)境下測量瘤組織微血管密度(MVD)并利用免疫熒光染色檢測CD31表達(dá)情況,結(jié)果表明沉默Plexin-B1及SRPK1均能抑制血管生成。最后,我們探究Plexin-B1影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長凋亡、侵襲遷移以及血管生成的可能機(jī)制,通過RT-PCR和Western blot對PI3K、p-PI3K、Akt、 p-Akt的表達(dá)情況進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)Plexin-B1可通過PI3K/Akt途徑發(fā)揮作用。本研究揭示了Plexin-B1促進(jìn)膠質(zhì)瘤侵襲及血管生成,抑制凋亡的作用機(jī)制可能為通過調(diào)節(jié)RhoA/α V β 3/PI3K/Akt通路及SRPKl參與膠質(zhì)瘤的侵襲和血管生成。本課題為膠質(zhì)瘤的治療及藥物研發(fā)提供了新的思路及理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：Plexin-B1 膠質(zhì)瘤 αvβ3 RhoA SRPK1
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 引言11-15
• 第一部分：Plexin-B1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況及其生物學(xué)作用15-35
• 1.實(shí)驗(yàn)材料15-21
• 2.實(shí)驗(yàn)方法21-27
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-33
• 4.討論33-35
• 第二部分：在體環(huán)境下,Plexin-B1、SRPK1對膠質(zhì)瘤生長及血管生成的影響35-45
• 1.實(shí)驗(yàn)材料35-38
• 2.實(shí)驗(yàn)方法38-40
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-43
• 4.討論43-45
• 第三部分：Plexin-B1對膠質(zhì)瘤所起生物學(xué)作用的相關(guān)機(jī)制45-57
• 1.實(shí)驗(yàn)材料45-48
• 2.實(shí)驗(yàn)方法48-49
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-54
• 4.討論54-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 綜述 Semaphorins及其在膠質(zhì)瘤中功能的研究進(jìn)展64-74
• 參考文獻(xiàn)69-74
• 攻讀學(xué)位期間取得的成果74-75
• 致謝75

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本文編號：900714