本文關(guān)鍵詞：Omega-3魚油脂肪乳對(duì)缺氧缺血腦損傷新生大鼠海馬組織TLR4和NF-κB表達(dá)的影響

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【摘要】：背景 新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)常可引起不可逆的腦組織損傷,疾病進(jìn)程中大量釋放的炎癥因子是促進(jìn)二次腦損傷發(fā)生的重要因素,然而迄今為止除亞低溫治療外尚無(wú)滿意的治療措施,因此找到一個(gè)安全有效的治療措施顯得十分重要。研究證實(shí)給予富含Omega-3魚油脂肪乳補(bǔ)充能顯著改善顱腦缺血的疾病進(jìn)展及預(yù)后,且重點(diǎn)添加DHA的Omega-3魚油脂肪乳是腦內(nèi)合成神經(jīng)保護(hù)素D1(NeuroprotectinD1,NPD1)的重要來(lái)源。HIE治療時(shí)需要腸外營(yíng)養(yǎng)來(lái)滿足患兒能量需求,因此能否在供能的同時(shí)又能遏制疾病的發(fā)展,及初步探討Omega-3魚油脂肪乳的抗炎作用機(jī)制成了本實(shí)驗(yàn)的出發(fā)點(diǎn)。目的 探討Omega-3魚油脂肪乳對(duì)新生7日齡大鼠缺氧缺血腦損傷是否具有保護(hù)作用。方法 出生7日齡SD大鼠168只,隨機(jī)分為4組,每組42只,假手術(shù)組;Omega-3魚油脂肪乳組;20%普通脂肪乳組;模型組。Omega-3魚油脂肪乳組、20%普通脂肪乳組和模型組按照RICE法制備新生大鼠缺氧缺血腦損傷模型,7日齡新生大鼠,乙醚麻醉,游離分出左側(cè)頸總動(dòng)脈,結(jié)扎,置于含8%氧氣的氮氧混合氣體37℃的密閉容器中2h。假手術(shù)組僅暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈,不行特殊處理。于模型制備后1d、3d、7d時(shí)取腦組織,Real-time PCR和Western-Blot檢測(cè)大鼠海馬組織中Toll樣受體4(Toll-like receptor4,TLR4)和核心因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)mRNA及蛋白的表達(dá)量,TUNEL染色分別對(duì)比觀察不同組間大鼠腦組織中細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果1.模型評(píng)價(jià):Omega-3魚油脂肪乳組、20%普通脂肪乳組和模型組在模型制備后大鼠均可出現(xiàn)站立不穩(wěn)、固定左旋等現(xiàn)象,而假手術(shù)組大鼠未見站立不穩(wěn)、固定左旋等現(xiàn)象,TTC染色可見Omega-3魚油脂肪乳組、20%普通脂肪乳組和模型組的大鼠腦片均可見大片狀白色缺血梗死灶,而假手術(shù)組大鼠腦片為均一紅色,未見白色梗死灶,提示模型建立成功。2.蘇木素-伊紅(he)染色,結(jié)果顯示模型組細(xì)胞水腫較各組嚴(yán)重:he染色用來(lái)觀察缺氧缺血后腦組織的病理學(xué)改變,3d時(shí)海馬ca1區(qū)病理學(xué)表現(xiàn)最為顯著,omega-3魚油脂肪乳組和20%普通脂肪乳組均可見不同程度細(xì)胞水腫、錐體細(xì)胞排列紊亂、核固縮等病理表現(xiàn),20%普通脂肪乳組和模型組病理表現(xiàn)更為顯著,假手術(shù)組錐體細(xì)胞排列整齊,未見細(xì)胞水腫、核固縮等病理表現(xiàn)。3.real-timepcr結(jié)果顯示omega-3魚油脂肪乳能下調(diào)tlr4和nf-Κbmrna的表達(dá)量:1d時(shí)模型組tlr4和nf-κb的mrna表達(dá)量均高于假手術(shù)組(p均=0.00,p0.05);3d時(shí)omega-3魚油脂肪乳組tlr4和nf-κb的mrna的表達(dá)量[(4.89±0.51),(1.15±0.10)]低于20%普通脂肪乳組[(17.58±2.50),(2.56±0.10)]和d組[(15.94±2.52),(2.34±0.11)](p均=0.00,p0.05),與假手術(shù)組[(6.30±1.52),(1.32±0.10)]相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.376,0.21,p0.05);7d時(shí)omega-3魚油脂肪乳組tlr4和nf-κb的mrna表達(dá)量低于20%普通脂肪乳組(p=0.03,0.04,p0.05)和模型組(p均=0.00,p0.05),與假手術(shù)組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.23,0.08,p0.05)。4.omega-3魚油脂肪乳能顯著降低tlr4和nf-Κb的蛋白表達(dá):采用免疫印跡檢測(cè)四組tlr4和nf-κb表達(dá)變化,gapdh作為內(nèi)參,結(jié)果表明1d時(shí)模型組tlr4和nf-κb的蛋白的表達(dá)量均高于假手術(shù)組(p均=0.00,p0.05);3d時(shí)omega-3魚油脂肪乳組tlr4和nf-κb蛋白的表達(dá)量[(9.30±1.53),(1.44±0.14)]低于20%普通脂肪乳組[(20.13±1.00),(2.82±0.09)]和模型組[(26.21±3.00),(4.51±0.36)](p均=0.00,p0.05),與a組[(5.32±1.06),(2.42±0.14)]相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.2,0.17,p0.05);7d時(shí)omega-3魚油脂肪乳組tlr4和nf-κb蛋白的表達(dá)量低于20%普通脂肪乳組(p=0.00,0.02,p0.05)和模型組(p均=0.00,p0.05),與a組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.21,0.33,p0.05)。5.腦組織凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)3d時(shí)腦組織凋亡細(xì)胞數(shù):omega-3魚油脂肪乳組細(xì)胞凋亡數(shù)目(13.67±2.52)少于20%普通脂肪乳組(27.67±2.52)和模型組(41.00±3.61)差異有統(tǒng)計(jì)意義(p均=0.00,p0.05),與假手術(shù)組(6.00±2.00)相比(p=0.09,p0.05)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論Omega-3魚油脂肪乳能夠減輕缺氧缺血腦損傷而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,其作用機(jī)制與下調(diào)TLR4、NF-κB表達(dá)和減少細(xì)胞凋亡有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：大鼠 新生 Omega-3魚油脂肪乳 缺氧缺血腦損傷 TLR4 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R742
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-12
• 1 材料與方法12-19
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-22
• 3 討論22-28
• 4 小結(jié)28-29
• 附表及附圖29-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 綜述 Omega-3魚油脂肪乳和新生兒缺氧缺血性腦病研究進(jìn)展39-58
• 參考文獻(xiàn)49-58
• 附錄中英文縮寫詞表58-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況59-60
• 致謝60-61
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷61

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本文編號(hào)：873614