本文關(guān)鍵詞：甘草酸二銨對(duì)腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)血管單元的保護(hù)作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的近年來缺血性腦血管病的發(fā)病率持續(xù)升高,腦組織在經(jīng)受一定時(shí)間的缺血期后,通過各種手段和方法恢復(fù)血流供應(yīng),腦缺血得到改善后,此時(shí)的血流再通又易引起腦缺血再灌注損傷,對(duì)這一領(lǐng)域的研究成為近年來的熱點(diǎn),腦缺血再灌注損傷機(jī)制復(fù)雜,治療方面也幾乎沒有針對(duì)性的治療手段和藥物。本研究的目的在于探究腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)血管單元的破壞機(jī)制,以及甘草酸二銨對(duì)神經(jīng)血管單元的保護(hù)作用。方法將160只體重250-300g雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組(A組)、假手術(shù)組(B組)、缺血再灌注生理鹽水對(duì)照組(C組)、缺血再灌注甘草酸二銨治療組(D組);采用可逆性大腦中動(dòng)脈線栓法,模擬缺血再灌注過程,建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型,假手術(shù)組僅給予相同手術(shù)操作,不插入栓線,模型組于術(shù)后2h拔出栓線。治療組于術(shù)后2h腹腔注射甘草酸二銨治療,模型對(duì)照組、假手術(shù)組、正常組分別腹腔注射等量生理鹽水,每日給藥1次,共3d。于術(shù)后3h大鼠麻醉蘇醒后及3d后行大鼠神經(jīng)功能評(píng)分;3d后大鼠取材;行腦組織TTC染色測定梗死體積;干濕重法測定腦含水量;HE染色檢測大鼠腦皮層神經(jīng)元數(shù)目;尼氏體染色檢測大鼠腦皮層神經(jīng)元內(nèi)尼氏小體數(shù)量;TUNEL法檢測大鼠腦皮層細(xì)胞凋亡水平;免疫組化法檢測大鼠腦皮層細(xì)胞絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase,Akt)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表達(dá),Western blot檢測大鼠腦皮層細(xì)胞磷酸化Akt(p-Akt)的表達(dá);免疫熒光法檢測大鼠腦皮層水通道蛋白4(aquaporins-4,AQP-4)、緊密連接相關(guān)occludin蛋白的表達(dá)。結(jié)果缺血再灌注損傷大鼠模型建立成功;術(shù)前所有大鼠行Zea-Longa評(píng)分均為0分,術(shù)后3h,A、B、C、D組大鼠Zea-Longa評(píng)分分別為0分、0.30±0.48分、2.80±0.92分、2.90±1.20分,A、B組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組與A、B組比較評(píng)分升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);3天后D組(1.90±0.74)較C組(2.70±0.48)評(píng)分低,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);3d后,TTC染色估算梗死體積分別為0、0、(42.48±5.81)%、(31.70±6.57)%,A、B組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組較A、B組顯著升高,C組較D組高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);腦組織含水量分別為(63.11±6.83)%、(65.34±7.49)%、(87.51±5.75)%、(72.23±7.21)%,A、B組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組較A、B組顯著升高,C組較D組高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HE染色神經(jīng)元數(shù)目分別為233.10±32.47、230.30±41.61、60.20±16.25、116.30±21.45,A、B組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組較A、B組低,C組較D組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);尼氏小體數(shù)量分別為137.20±27.55、138.90±33.89、50.80±11.10、78.80±16.35,A、B組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組較A、B組低,C組較D組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);TUNEL染色陽性細(xì)胞數(shù)分別為8.90±3.81、7.50±3.66、65.40±8.40、44.80±7.69,A、B組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組較A、B組高,C組較D組高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)分別為10.20±6.01、11.60±5.99、99.00±14.85、56.00±14.90,A、B組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組較A、B組高,C組較D組高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Akt陽性細(xì)胞數(shù)分別為86.20±11.41、83.30±10.32、16.60±5.36、47.00±7.06,A、B組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組較A、B組低,C組較D組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);p-Akt相對(duì)表達(dá)量分別為0.83±0.08、0.81±0.11、0.30±0.07、0.62±0.07,A、B組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組較A、B組低,C組較D組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);AQP-4平均光密度值分別為0.020±0.003、0.019±0.002、0.044±0.004、0.029±0.005,A、B組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組較A、B組高,C組較D組高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);occludin平均光密度值分別為0.228±0.021、0.216±0.024、0.060±0.013、0.129±0.017,A、B組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C、D組較A、B組低,C組較D組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論本研究成功建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型,并發(fā)現(xiàn)神經(jīng)血管單元損傷在缺血再灌注損傷中起了重要作用,即在缺血再灌注損傷后凋亡抑制蛋白Akt表達(dá)下降,凋亡相關(guān)Caspase-3蛋白表達(dá)明顯升高,從而導(dǎo)致缺血再灌注腦組織凋亡明顯增加;血腦屏障水調(diào)節(jié)代謝相關(guān)蛋白AQP-4表達(dá)升高,緊密連接主要組成蛋白o(hù)ccludin表達(dá)降低,從而導(dǎo)致血腦屏障破壞。本研究也表明甘草酸二銨可通過增加Akt表達(dá),降低Caspase-3表達(dá)水平來減輕缺血再灌注損傷后細(xì)胞凋亡水平;通過降低AQP-4表達(dá)、增加occludin表達(dá)來減輕缺血再灌注損傷后血腦屏障的破壞;從而發(fā)揮對(duì)大鼠缺血再灌注損傷后神經(jīng)血管單元的整體保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血再灌注損傷 神經(jīng)血管單元 甘草酸二銨
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 英文縮略表13-14
• 引言14-16
• 第1章 甘草酸二銨對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠保護(hù)作用及機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究16-48
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器16-17
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑17-18
• 1.1.4 主要溶液的配制18-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟19-30
• 1.2.1 動(dòng)物分組與模型制作19-20
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥20
• 1.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取材20
• 1.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦組織固定、脫水、浸蠟、包埋、切片20-21
• 1.2.5 神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分方法及標(biāo)準(zhǔn)21
• 1.2.6 大鼠腦組織TTC染色21-22
• 1.2.7 大鼠腦組織含水量測定22
• 1.2.8 大鼠腦組織HE染色22-23
• 1.2.9 大鼠腦組織尼氏染色23
• 1.2.10 大鼠腦組織TUNEL染色23-25
• 1.2.11 大鼠皮層神經(jīng)元Caspase-3、Akt免疫組化染色25-26
• 1.2.12 大鼠皮層神經(jīng)元p-Akt Western-blot檢測26-28
• 1.2.13 大鼠皮層神經(jīng)元AQP-4、occludin免疫熒光染色28-29
• 1.2.14 圖像采集、結(jié)果判定29-30
• 1.2.15 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析30
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-39
• 1.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立30
• 1.3.2 神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分結(jié)果比較30-31
• 1.3.3 梗死體積所占百分比結(jié)果31-32
• 1.3.4 大鼠腦組織含水量變化32-33
• 1.3.5 大鼠皮層神經(jīng)元HE染色結(jié)果33-34
• 1.3.6 大鼠皮層神經(jīng)元尼氏染色結(jié)果34
• 1.3.7 大鼠皮層神經(jīng)元TUNEL染色結(jié)果34-35
• 1.3.8 大鼠皮層神經(jīng)元Caspase-3、Akt免疫組化染色結(jié)果35-37
• 1.3.9 大鼠皮層神經(jīng)元p-Akt Western blot結(jié)果37-38
• 1.3.10 大鼠皮層神經(jīng)元AQP-4、occludin免疫熒光染色結(jié)果38-39
• 1.4 討論39-44
• 1.4.1 缺血再灌注損傷后神經(jīng)血管單元的破壞39-40
• 1.4.2 甘草酸二銨對(duì)缺血再灌注損傷后神經(jīng)功能影響40
• 1.4.3 甘草酸二銨對(duì)缺血再灌注損傷后腦組織水腫的影響40
• 1.4.4 甘草酸二銨對(duì)缺血再灌注損傷后神經(jīng)元存活的影響40-41
• 1.4.5 甘草酸二銨對(duì)缺血再灌注損傷后神經(jīng)凋亡的影響41-42
• 1.4.6 甘草酸二銨對(duì)缺血再灌注損傷后Akt、Caspase-3 表達(dá)的影響42-43
• 1.4.7 甘草酸二銨對(duì)缺血再灌注損傷后occludin、AQP-4 表達(dá)的影響43-44
• 1.5 小結(jié)44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 第2章 綜述 神經(jīng)血管單元與腦缺血再灌注損傷的研究進(jìn)展48-63
• 2.1 神經(jīng)血管單元組成概述48-52
• 2.1.1 神經(jīng)元48-49
• 2.1.2 血腦屏障49
• 2.1.3 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞49-51
• 2.1.4 周細(xì)胞51
• 2.1.5 細(xì)胞外基質(zhì)51-52
• 2.2 腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)血管單元損害的機(jī)制52-55
• 2.2.1 腦實(shí)質(zhì)損傷53-54
• 2.2.2 血腦屏障損傷54-55
• 2.2.3 其他損傷55
• 2.3 腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)血管單元保護(hù)策略55-57
• 2.3.1 抑制活性氧生成56
• 2.3.2 缺血性調(diào)節(jié)56-57
• 2.3.3 降血脂藥物57
• 2.3.4 其他藥物57
• 2.4 展望57-58
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 結(jié)論63-64
• 附錄 實(shí)驗(yàn)圖像64-71
• 致謝71-72
• 導(dǎo)師簡介72-73
• 作者簡介73-74
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集74

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本文編號(hào)：857298