發(fā)布時間：2017-09-14 16:46

  本文關鍵詞：白藜蘆醇對大腦皮層錐體神經(jīng)元急性缺氧性反應的影響

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【摘要】：缺氧性腦損傷發(fā)生于新生兒缺氧缺血性腦病、腦血管疾病、外傷、高原反應等多種疾病過程,可導致暫時或永久性腦功能障礙,嚴重者危及生命。因此,研究缺氧性腦損傷的機制及保護性治療藥物對改善患者生存質(zhì)量和挽救生命具有重要臨床意義。大腦皮層組織是哺乳動物腦組織最易受到缺氧性損傷的腦區(qū)之一,是研究缺氧性腦損傷的重要部位。中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元缺氧后Na~+內(nèi)流增多不僅引起細胞膜異常去極化,直接導致神經(jīng)元水腫,而且可使細胞內(nèi)Ca2+濃度升高和突觸前谷氨酸大量釋放。因此,發(fā)生于神經(jīng)元的一系列損傷性變化均繼發(fā)于細胞內(nèi)Na~+水平增高。腦神經(jīng)元膜電位和興奮性的缺氧性變化是哺乳動物腦缺氧時神經(jīng)元發(fā)生損傷的一個重要觸發(fā)機制。缺氧早期伴隨興奮性增高的缺氧性去極化被認為是神經(jīng)元損傷的重要觸發(fā)信號,如果不能在數(shù)分鐘內(nèi)恢復,將可能造成神經(jīng)元損傷甚至死亡。白藜蘆醇,別名虎杖苷元,是中草藥虎杖的主要活性成分。有研究證實,白藜蘆醇具有神經(jīng)保護作用,并且白藜蘆醇能夠迅速透過血腦屏障,有可能被研發(fā)成一種理想的神經(jīng)保護劑用于臨床,但其對神經(jīng)元急性缺氧性功能反應的影響尚無定論,因此,本研究采用全細胞膜片鉗技術觀察了白藜蘆醇對人腦皮層錐體神經(jīng)元Na~+電流急性缺氧性反應的影響以及對大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元膜電位和興奮性缺氧性變化的影響,為進一步證實其神經(jīng)保護作用提供實驗依據(jù)。實驗一白藜蘆醇對人腦皮層錐體神經(jīng)元Na~+電流急性缺氧性變化的影響目的:研究人腦皮層錐體神經(jīng)元Na~+電流的急性缺氧性反應特征以及白藜蘆醇對Na~+電流急性缺氧性反應的影響。方法:采用全細胞膜片鉗記錄法,在人腦皮層腦片上記錄錐體神經(jīng)元對TTX敏感的電壓依賴性Na~+電流,觀察急性缺氧和白藜蘆醇對Na~+電流幅值和激活性質(zhì)的影響。結果:急性缺氧使人腦皮層腦片上的錐體神經(jīng)元Na~+電流呈現(xiàn)短暫的小幅增大后,出現(xiàn)長時程抑制(P0.05),并使Na~+電流的I-V曲線左移(向超極化方向漂移)。AMPA受體阻斷劑NBQX阻斷了急性缺氧引起的Na~+電流短暫增大(P0.01),并加劇了Na~+電流的缺氧后抑制(P0.01);GABAA受體阻斷劑Bicuculline對Na~+電流的缺氧性增大和缺氧后抑制無顯著性影響(P0.05);二者對急性缺氧引起的Na~+電流I-V曲線左移均無顯著影響。50μM白藜蘆醇阻斷了Na~+電流的缺氧性增大(P0.01),增強了Na~+電流的缺氧后抑制(P0.05);100μM白藜蘆醇顯著延遲了Na~+電流的缺氧性反應,使Na~+電流的缺氧性增大現(xiàn)象消失,并使Na~+電流的缺氧后抑制現(xiàn)象衰減(P0.05)。50μM和100μM白藜蘆醇均使Na~+電流激活曲線右移,接近正常。結論:人腦皮層錐體神經(jīng)元Na~+電流對急性缺氧的反應主要表現(xiàn)為長時程抑制;AMPA受體活動可影響Na~+電流對急性缺氧的反應。白藜蘆醇對人腦皮層錐體神經(jīng)元Na~+電流急性缺氧性反應的調(diào)節(jié)作用與劑量有關,小劑量可模擬NBQX的作用,而大劑量可降低Na~+通道對缺氧的敏感性。實驗二白藜蘆醇對大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元膜電位急性缺氧性變化的影響目的:研究大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元膜電位急性缺氧性變化的特征以及白藜蘆醇對神經(jīng)元膜電位急性缺氧性變化的影響。方法:采用全細胞膜片鉗記錄法,在大鼠大腦皮層腦片上記錄錐體神經(jīng)元的膜電位,觀察急性缺氧和白藜蘆醇對膜電位的影響。結果:急性缺氧使大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元的膜電位出現(xiàn)一個明顯的去極化,隨后呈長時程的超極化,可持續(xù)30min以上。50μmol/L白藜蘆醇對早期缺氧性去極化以及缺氧后超極化幅度均有抑制作用(P0.05);100μmol/L白藜蘆醇完全阻斷了缺氧性去極化的發(fā)生,并對缺氧后超極化幅度有抑制作用(P0.05)。結論:大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元膜電位的急性缺氧性變化主要表現(xiàn)為早期的去極化和缺氧后的長時程超極化。白藜蘆醇對大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元膜電位的急性缺氧性變化有調(diào)節(jié)作用,抑制缺氧早期的膜電位去極化,減輕缺氧后錐體神經(jīng)元的抑制狀態(tài),并與劑量相關。實驗三白藜蘆醇對大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元興奮性缺氧后變化的影響目的:研究大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元興奮性缺氧后變化,以及白藜蘆醇對興奮性缺氧后變化的影響。方法:采用全細胞膜片鉗記錄法,在電流鉗模式下向大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元內(nèi)注射去極化電流誘發(fā)錐體神經(jīng)元的動作電位,記錄在缺氧前及缺氧后35min錐體神經(jīng)元的動作電位,觀察急性缺氧和白藜蘆醇對錐體神經(jīng)元動作電位頻率和去極化電流閾值的影響。結果:急性缺氧后,大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元誘發(fā)動作電位的閾值增高、發(fā)放頻率降低。50μmol/L和100μmol/L白藜蘆醇對錐體神經(jīng)元缺氧后動作電位閾值的升高以及動作電位發(fā)放頻率的降低均有抑制作用(P0.05),且50μmol/L白藜蘆醇較100μmol/L白藜蘆醇的抑制作用更明顯(P0.05)。結論:大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元在缺氧后表現(xiàn)為低興奮性。白藜蘆醇對缺氧引起大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元的低興奮性有抑制作用,并與劑量相關。
【關鍵詞】：白藜蘆醇 缺氧 皮層錐體神經(jīng)元 Na~+電流 膜電位 興奮性
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R742
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-14
• 前言14-16
• 文獻回顧16-24
• 實驗一 白藜蘆醇對人腦皮層錐體神經(jīng)元Na+電流急性缺氧性變化的影響24-36
• 1 材料24-26
• 2 方法26-27
• 3 結果27-32
• 4 討論32-36
• 實驗二 白藜蘆醇對大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元膜電位急性缺氧性變化的影響36-41
• 1 材料36
• 2 方法36-37
• 3 結果37-39
• 4 討論39-41
• 實驗三 白藜蘆醇對大鼠大腦皮層錐體神經(jīng)元興奮性缺氧后變化的影響41-46
• 1 材料41
• 2 方法41-42
• 3 結果42-45
• 4 討論45-46
• 小結46-47
• 參考文獻47-57
• 個人簡歷和研究成果57-58
• 致謝58

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本文編號：851153