本文關(guān)鍵詞：Fibulin-2在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 膠質(zhì)瘤 fibulin-2 生物學(xué)行為 基因沉默 實時熒光定量PCR 蛋白免疫印跡

【摘要】：目的：研究Fibulin-2在腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本瘤體與瘤旁中的表達(dá)差異及其對膠質(zhì)瘤細(xì)胞系生物學(xué)行為的影響方法：應(yīng)用實時熒光定量PCR (Real-time PCR)技術(shù)檢測3例膠質(zhì)瘤病理組織及瘤周組織中Fibulin-2 mRNA的表達(dá),研究Fibulin-2的表達(dá)差異,各組指標(biāo)因素之間的差異性比較用t檢驗。利用基因干擾技術(shù),構(gòu)建特異性干擾FBLN2基因的shRNA病毒載體,包裝病毒感染膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U-87mg細(xì)胞,通過Real-time PCR及蛋白免疫印跡技術(shù)(western-blot)檢測Fibulin-2表達(dá)降低后,通過CCK-8實驗檢測分析U87mg細(xì)胞增殖情況、通過流式細(xì)胞術(shù)分析U87mg細(xì)胞的凋亡情況,通過transwell小室檢測U87mg細(xì)胞的侵襲性及遷移性；利用基因過表達(dá)技術(shù),構(gòu)建FBLN2過表達(dá)病毒載體,包裝病毒后感染U87細(xì)胞,通過WB及real-time PCR技術(shù)檢測到FBLN2基因表達(dá)增加后再通過上述實驗檢測U87細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲性及遷移性等生物學(xué)行為,各組因素指標(biāo)問差異性比較用t檢驗,通過對比FBLN2干擾、正常、過表達(dá)后細(xì)胞生物學(xué)行為的變化,來研究FBLN2及其蛋白產(chǎn)物在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用。結(jié)果：1.FBLN2 mRNA水平在膠質(zhì)瘤組織顯著低于瘤旁組織(p0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義)；2.FBLN2基因沉默后U87mg細(xì)胞的增殖能力相對于對照組減弱而過表達(dá)后相對于對照組U87mg的增殖性增強(qiáng)(P0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義)；3. FBLN2基因沉默后對U87mg細(xì)胞系的凋亡增強(qiáng),而過表達(dá)后U-87mg的凋亡無明顯差異；4. FBLN2基因沉默后U87mg細(xì)胞系的侵襲性增強(qiáng)(p0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義),而過表達(dá)后侵襲性減弱；5. FBLN2基因沉默U-87mg細(xì)胞系的遷移性增強(qiáng)(p0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義)而過表達(dá)后遷移能力減弱。結(jié)論：fibulin-2在膠質(zhì)瘤病理組織中瘤體與瘤旁組織具有顯著差別,腫瘤組織中fibulin-2的mRNA水平顯著低于瘤周組織,在細(xì)胞系實驗中,FBLN2基因過表達(dá)組細(xì)胞的增殖性增強(qiáng)于干擾組,凋亡無明顯變化,侵襲性、遷移性：FBLN過表達(dá)組FBLN2正常組FBLN2干擾組。這與既往的文獻(xiàn)報道在非轉(zhuǎn)移性實體腫瘤中FBLN2作為抑癌基因的報道相同,提示fibulin-2與膠質(zhì)瘤的進(jìn)展可能相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 fibulin-2 生物學(xué)行為 基因沉默 實時熒光定量PCR 蛋白免疫印跡
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 縮略詞表(以字母順序排列)7-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-18
• 第一部分 Fbln2在膠質(zhì)瘤瘤體及瘤周組織中的表達(dá)差異檢測18-27
• 實驗?zāi)康?/span>18
• 實驗材料、設(shè)備及試劑18-20
• 組織標(biāo)本20-21
• 實驗方法21-25
• 實驗結(jié)果25-26
• 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析26-27
• 第二部分 膠質(zhì)瘤細(xì)胞系培養(yǎng)及慢病毒載體構(gòu)建篩選27-81
• 一. U-87細(xì)胞培養(yǎng)27-29
• 實驗?zāi)康?/span>27
• 試劑、溶液、耗材、儀器、實驗材料27-28
• 實驗方法28-29
• 二. FBLN2過表達(dá)及干擾載體的構(gòu)建及信息29-42
• 三. 質(zhì)粒載體的轉(zhuǎn)化、擴(kuò)增及提取42-49
• 實驗?zāi)康?/span>42
• 技術(shù)路線42
• 試劑、溶液、耗材、儀器42-44
• 實驗方法44-47
• 實驗結(jié)果47-48
• 質(zhì)粒測序48-49
• 四. Fbln2過表達(dá)及干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染U87mg細(xì)胞49-52
• 實驗?zāi)康?/span>49
• 試劑，耗材，儀器49-50
• 實驗方法50-52
• 五. Real-time PCR篩選Fbln2最佳干擾載體及檢測過表達(dá)載體效率檢測52-60
• 實驗?zāi)康?/span>52
• 試劑、耗材、儀器52-54
• 實驗方法54-57
• 實驗結(jié)果57-59
• 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析59-60
• 六. WB篩選最佳Fibulin-2干擾載體及檢測過表達(dá)載體效率檢測60-69
• 實驗?zāi)康?/span>60
• 試劑、溶液、儀器、耗材60-62
• 試劑配制62-63
• 實驗方法63-68
• 實驗結(jié)果68-69
• 七. 慢病毒包裝69-71
• 實驗?zāi)康?/span>69
• 試劑、耗材、儀器69-70
• 實驗方法70-71
• 八. 慢病毒感染293Ta細(xì)胞驗證慢病毒的有效性71-73
• 實驗?zāi)康?/span>71
• 試劑、耗材、儀器71-72
• 實驗方法72-73
• 九. Real-Time PCR檢測慢病毒感染后293Ta細(xì)胞FBLN2表達(dá)效率73-81
• 實驗?zāi)康?/span>73
• 試劑、洛液、耗材、儀器73-75
• 實驗方法75-79
• 實驗結(jié)果79-80
• 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析80-81
• 第三部分 Fibulin-2干擾及過表達(dá)后對U87mg細(xì)胞生物學(xué)行為的影響81-99
• 一. cck-8法檢測Fibulin-2干擾和過表達(dá)對U87mg細(xì)胞的增殖影響81-85
• 實驗?zāi)康?/span>81
• 試劑，，耗材81-82
• 實驗方法82-83
• 實驗結(jié)果83-84
• 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析84-85
• 二 流式細(xì)胞術(shù)檢測Fibulin-2過表達(dá)及干擾對U87mg細(xì)胞凋亡的影響85-90
• 實驗方法85
• 試劑、耗材、儀器85-86
• 實驗方法86
• 實驗結(jié)果86-90
• 三 transwel小室檢測Fibulin-2干擾和過表達(dá)對U87mg細(xì)胞侵襲的影響90-94
• 實驗?zāi)康?/span>90
• 試劑，耗材90-91
• 實驗方法91-92
• 實驗結(jié)果92-94
• 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析94
• 四 transwel小室檢測Fibulin-2干擾和過表達(dá)對U87mg細(xì)胞遷移的影響94-99
• 實驗?zāi)康?/span>94
• 試劑、耗材94-95
• 實驗方法95-97
• 實驗結(jié)果97-98
• 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析98-99
• 討論99-102
• 結(jié)論102-103
• 參考文獻(xiàn)103-108
• 綜述108-115
• 參考文獻(xiàn)112-115
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果115-116
• 致謝116

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本文編號：850542