本文關(guān)鍵詞：黃芩苷對(duì)腸上皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷后屏障功能的影響

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【摘要】：目的探討黃芩苷對(duì)腸上皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷后屏障功能的影響及其可能機(jī)制。方法建立大鼠小腸上皮細(xì)胞(IEC-6)缺氧復(fù)氧損傷模型,加入新鮮培養(yǎng)基和黃芩苷溶液,置常規(guī)培養(yǎng)箱24h。采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖,篩選黃芩苷濃度,設(shè)立對(duì)照組(A),缺氧復(fù)氧組(B),缺氧復(fù)氧+5.0×10-3mol/L黃芩苷組(C),缺氧復(fù)氧+1.0×103mol/L黃芩苷組(D),缺氧復(fù)氧+0.2×10-3mol/L黃芩苷組(E)：采用紫外線分光光度計(jì)檢測(cè)細(xì)胞上清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量；采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定細(xì)胞上清中環(huán)磷酸腺苷(cAMP)含量；采用Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞緊密連接蛋白Occludin和Zonula Occludens 1(ZO-1)的表達(dá)及核因子-K B(NF-K B)、蛋白激酶A(PKA)蛋白表達(dá)水平；采用實(shí)時(shí)熒光定量(RT)PCR方法檢測(cè)Occludin和ZO-1的mRNA表達(dá)水平。IEC-6細(xì)胞以2×105細(xì)胞/毫升的密度置入transwell小板中,使用微孔電阻系統(tǒng)測(cè)量跨細(xì)胞上皮電阻(TER)來評(píng)估單層上皮細(xì)胞的完整性,只有當(dāng)TER值10000hm/well,表明單層上皮細(xì)胞層融合,再行缺氧復(fù)氧損傷模型的制備,分組處理后,再次使用微孔電阻系統(tǒng)測(cè)量跨細(xì)胞上皮電阻。結(jié)果MTT比色法顯示黃芩苷可緩解缺氧復(fù)氧對(duì)細(xì)胞增殖的抑制(對(duì)照組吸光度值：0.442±0.015,缺氧復(fù)氧組：0.256±0.007,5.0×10-3mol／L黃芩苷組：0.407±0.008；P0.05)；缺氧復(fù)氧組較對(duì)照組細(xì)胞上清中MDA含量增加[對(duì)照組：(3.502±0.231)mol/L,缺氧復(fù)氧組：(5.541±0.143)mol/L；P0.05],SOD含量減少[對(duì)照組：(20.073±0.493)×103U/L,缺氧復(fù)氧組：(13.324±0.081) ×103U/L；P0.05],cAMP含量增加[對(duì)照組：(4.575±0.122)×10-3mol/,缺氧復(fù)氧組：(7.28±O.143)×10-a3mol/L,P0.05].Occludin和ZO-1的蛋白、mRNA表達(dá)量減少,NF-K B(P65).PKA蛋白表達(dá)量增加(P均0.05)；TER值減小(對(duì)照組：1177.5±26.30hm/well,缺氧復(fù)氧組：586.25±11.090hm/well:P 0.05).與缺氧復(fù)氧組相比,黃芩苷各組隨黃芩苷濃度升高,細(xì)胞上清中MDA逐漸減少[5.0×10-3mol/L黃芩苷組：(4.320±0.106)mol/L,1.0×10-3mol/L黃芩苷組：(4.578±0.080)mol/L,0.2×10-3mol/L黃芩苷組：(4.928± 0.118)mol/L,F=110.796,P0.05],SOD增加[5.0×10-3mol/L黃芩苷組：(18.462±0.284)×103/L,1.0×10-3mol/L黃芩苷組：(16.624±0.364)× 103U/L,0.2×10-3mol/L黃芩苷組：(14.023±0.140)×103U/L,F=255.54,P 0.05],細(xì)胞上清中cAMP逐漸減少[5.0×10-3mol/L黃芩苷組：(5.155±0.152)× 10-3mol/L,1.0×10.3mol/L黃芩苷組：(6.27±0.168)×10-3mol/L,0.2×10-3mol/L黃芩苷組：(6.948±0.199)×10-3mol/L,F=211.77,P0.05].Occludin和Z0-1的蛋白、mRNA表達(dá)量增加,NF-K B(P65)、PKA蛋白表達(dá)量減少(P均0.05),TER值增大(5.0×10-3mol/L黃芩苷組：1105±31.090hm/well,1.0 ×10-3mol/L黃芩苷組：790±18.260hm/well,0.2×10-3mol/L黃芩苷組：619.5 ±14.980hm/well,F=255.54,P0.05).結(jié)論黃芩苷可緩解缺氧復(fù)氧損傷對(duì)腸上皮細(xì)胞屏障功能的破壞作用,其可能機(jī)制為通過NF-K B和cAMP/PKA信號(hào)通路。
【關(guān)鍵詞】：黃芩苷 腸屏障 缺血再灌注 缺氧復(fù)氧 緊密連接蛋白
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743
【目錄】：

• 英文縮略詞及術(shù)語表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-10
• 材料及方法10-24
• 結(jié)果24-31
• 討論31-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-41
• 綜述41-49
• 引用文獻(xiàn)45-49
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文49-50
• 致謝50

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