本文關(guān)鍵詞：RIP1激酶參與缺血性腦中風(fēng)誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞增生及膠質(zhì)瘢痕的形成

  更多相關(guān)文章： 腦缺血 RIP1K 星形膠質(zhì)細(xì)胞 膠質(zhì)瘢痕 OGD tMCAO

【摘要】：目的:研究necroptosis死亡的關(guān)鍵激酶RIP1K(receptor interaction protein 1kinase,RIP1K)在缺血性腦中風(fēng)誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞增生及膠質(zhì)瘢痕形成中的作用,并研究其作用機(jī)制是否與調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞的VEGFD-VEGFR3信號(hào)通路有關(guān)。方法:采用大鼠短暫性大腦中動(dòng)脈阻塞(transient middle cerebral artery occlusion,t MCAO)方法,建立大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞增生及膠質(zhì)瘢痕模型。模型前5天側(cè)腦室注射慢病毒沉默RIP1K基因,以腦萎縮體積、行為學(xué)癥狀等指標(biāo)評(píng)價(jià)大鼠腦中風(fēng)后期的神經(jīng)功能恢復(fù)情況。采用原代培養(yǎng)的新生大鼠皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)再灌注的方法,建立體外星形膠質(zhì)細(xì)胞增生及膠質(zhì)瘢痕形成的細(xì)胞模型。星形膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元co-culture法檢測(cè)RIP1K基因沉默對(duì)神經(jīng)元軸突的影響。LDH方法檢測(cè)OGD再灌注誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞乳酸脫氫酶漏出率。免疫熒光法、western blot法檢測(cè)體內(nèi)體外缺糖缺氧再灌注對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增生及膠質(zhì)瘢痕形成的標(biāo)志蛋白GFAP、neurocan以及phosphacan表達(dá)情況。Western blot法及免疫熒光法觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞RIP1K、VEGFD、VEGFR3表達(dá)情況。結(jié)果:術(shù)前5天給予RIP1K基因沉默病毒可有效減少t MCAO誘導(dǎo)的大鼠膠質(zhì)瘢痕的形成,減少腦中風(fēng)28天后腦萎縮體積(P0.01),及改善行為學(xué)癥狀(P0.01)。Western blot結(jié)果顯示:t MCAO后皮層缺血區(qū)膠質(zhì)瘢痕標(biāo)志蛋白GFAP、neurocan、phosphacan以及RIP1K表達(dá)上調(diào)(P0.01)。在RIP1K基因沉默后,免疫組化顯示sh RIP1K可抑制皮層缺血區(qū)膠質(zhì)瘢痕標(biāo)志蛋白GFAP、neurocan、表達(dá)上調(diào)以及VEGFD、VEGFR3表達(dá)的上調(diào)(P0.01)。在星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪再灌注的體外星形膠質(zhì)細(xì)胞增生及膠質(zhì)瘢痕模型,Western Blot結(jié)果顯示:星形膠質(zhì)細(xì)胞在OGD再灌注后,膠質(zhì)瘢痕的標(biāo)志蛋白GFAP、neurocan、phosphacan以及RIP1K、VEGFD、VEGFR3表達(dá)上調(diào)(P0.01),Elisa結(jié)果顯示:在星形膠質(zhì)細(xì)胞OGD/再灌注后,星形膠質(zhì)細(xì)胞以及培養(yǎng)基中VEGFD表達(dá)較正常組均增加。RIP1K基因沉默可對(duì)抗OGD/再灌注引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP、neurocan、phosphacan、RIP1K表達(dá)變化,并減少VEGFD、VEGFR3表達(dá)的上調(diào)(P0.01)。在星形膠質(zhì)細(xì)胞OGD/再灌注膠質(zhì)瘢痕模型與神經(jīng)元共培養(yǎng)系統(tǒng)中,LDH結(jié)果顯示:RIP1K基因沉默可以抑制OGD/再灌注誘導(dǎo)的細(xì)胞乳酸脫氫酶漏出率(P0.01),促進(jìn)神經(jīng)元軸突的延伸(P0.01)。結(jié)論:1.抑制RIP1K可以促進(jìn)缺血性腦中風(fēng)后期神經(jīng)功能的恢復(fù),其作用可能與RIP1K基因沉默抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞增生及膠質(zhì)瘢痕的形成有關(guān)。2.RIP1基因沉默抑制膠質(zhì)瘢痕的形成的機(jī)制可能與抑制VEGFD-VEGFR3信號(hào)通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血 RIP1K 星形膠質(zhì)細(xì)胞 膠質(zhì)瘢痕 OGD tMCAO
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-14
• 第一部分RIP1K基因沉默對(duì)OGD-再灌注誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)瘢痕抑制作用以及促進(jìn)神經(jīng)元軸突的延伸14-27
• 材料和方法14-19
• 結(jié)果19-26
• 小結(jié)26-27
• 第二部分RIP1K基因沉默對(duì)tMCAO誘導(dǎo)的大鼠膠質(zhì)瘢痕抑制作用以及促進(jìn)腦缺血后期神經(jīng)功能的恢復(fù)27-39
• 材料和方法27-30
• 結(jié)果30-38
• 小結(jié)38-39
• 第三部分RIP1 K通過(guò)影響VEGFD-VEGFR3 信號(hào)通路參與膠質(zhì)瘢痕的形成39-46
• 材料和方法39-41
• 結(jié)果41-45
• 小結(jié)45-46
• 討論46-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 綜述 膠質(zhì)瘢痕形成對(duì)缺血性腦中風(fēng)的意義以及展望58-67
• 參考文獻(xiàn)64-67
• 英文縮寫(xiě)詞表67-68
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文及獲得的資助68-69
• 致謝69-70

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本文編號(hào)：810518