發(fā)布時(shí)間：2017-09-03 00:07

  本文關(guān)鍵詞：大鼠脊髓背角TRPV4在背根神經(jīng)節(jié)持續(xù)受壓致神經(jīng)病理性疼痛中的作用

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【摘要】：研究背景神經(jīng)病理性疼痛(NP, neuropathic pain)因其反復(fù)發(fā)作,較難治愈,已成為嚴(yán)重危害人類健康的世界性難題。各種動(dòng)物模型的出現(xiàn)為神經(jīng)病理性疼痛的研究提供了基礎(chǔ)。背根神經(jīng)節(jié)持續(xù)受壓(CCD, chronic compression of the dorsal root ganglion)模型是一種公認(rèn)的神經(jīng)病理性疼痛模型,其模擬了臨床椎間孔狹窄所致的根性疼痛痛覺過敏和自發(fā)性疼痛等癥狀。瞬時(shí)感受器電位離子通道(TRP, transient receptor potential)家族為最大的離子通道家族之一,其家族成員TRPV1和TRPV4作為感覺傳導(dǎo)器,可參與介導(dǎo)各種病理因素所誘發(fā)的疼痛敏感過程。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn),TRPV1可表達(dá)于脊髓背角片層Ⅰ和Ⅱ,脊髓背角TRPV1離子通道可能介導(dǎo)NP的病理過程。研究發(fā)現(xiàn),坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷模型大鼠脊髓背角TRPV1表達(dá)量增加可持續(xù)2周以上,并與機(jī)械痛敏的變化時(shí)程相一致。新的研究也指出,預(yù)先鞘內(nèi)注射TRPV1抑制劑后,樹脂毒素致痛模型大鼠脊髓背角TRPV1表達(dá)下調(diào)的同時(shí)可延緩大鼠熱痛閾的升高,提示脊髓背角TRPV1可能與樹脂毒素致痛模型大鼠神經(jīng)痛的形成相關(guān)。以上研究表明脊髓背角TRPV1在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要的作用。脊髓背角是外周感覺傳入的聚集地,外周的傷害性感覺信息在上傳至大腦產(chǎn)生痛覺前必須經(jīng)過脊髓背角的初步整合,而大腦下傳至外周的調(diào)制信息亦必須經(jīng)過脊髓背角的加工處理,脊髓背角在解剖學(xué)結(jié)構(gòu)和位置上的重要性決定了其勢(shì)必在痛覺的傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。目前的研究結(jié)果顯示TPRV4在神經(jīng)系統(tǒng)的分布多見于DRG、皮膚感覺神經(jīng)終端及游離神經(jīng)末梢。我們課題組的研究也顯示大鼠DRG神經(jīng)元內(nèi)TRPV4可參與CCD機(jī)械痛敏的病理過程；TRPV4可能通過NO-cGMP-PKG通路發(fā)揮作用。我們的研究還顯示抑制DRG神經(jīng)元內(nèi)TRPV4的表達(dá)僅可部分減輕CCD誘導(dǎo)的疼痛過敏,提示CCD所致神經(jīng)病理性疼痛還存在其他機(jī)制。我們近期通過免疫熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn)CCD大鼠術(shù)側(cè)脊髓背角TRPV4陽性表達(dá)增多。TRPV1和TRPV4同屬TRP家族,氨基酸序列同源性較高,二者的生物活性具有較高的統(tǒng)一性。綜合以上研究我們初步推斷脊髓背角TRPV4可能參與CCD誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛的病理過程。研究目的探討瞬時(shí)感受器電位離子通道香草素受體亞家族4(TRPV4, transient receptor potential vanilloid 4)在脊髓背角是否有表達(dá),大鼠背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion, DRG)持續(xù)受壓(chronic compression of dorsal root ganglion, CCD)后,脊髓背角TRPV4基因及蛋白變化,初步探討脊髓背角TRPV4在CCD致神經(jīng)病理性疼痛中的作用。研究方法1.制備CCD模型采用清潔級(jí)健康成年雄性Wistar大鼠,共60只,隨機(jī)分為三組,分別為空白對(duì)照組20只、CCD手術(shù)組20只、CCD+釕紅組20只。CCD手術(shù)為將直徑0.63mm長(zhǎng)度約4mm"U"型不銹鋼棒植入大鼠腰椎第4及第5椎間孔,使之?dāng)D壓背根神經(jīng)節(jié)及周圍組織,擠壓成功時(shí)可見術(shù)側(cè)后肢肌肉突然的不自主收縮�？瞻捉M除了不插入鋼棒外,其他步驟與CCD組相同。CCD術(shù)后第7天,CCD+釕紅組大鼠進(jìn)行鞘內(nèi)注射TRPV4抑制劑釕紅。2.機(jī)械刺激痛閾值檢測(cè)機(jī)械刺激疼痛閾值檢測(cè)選在術(shù)前1天,術(shù)后第7天鞘內(nèi)注射給藥前及給藥后2小時(shí)。方法如下：將大鼠置于紅色半透明玻璃箱內(nèi)適應(yīng)環(huán)境30min,使用BME-404型電子式機(jī)械測(cè)痛儀以針刺端透過玻璃箱底部網(wǎng)格層垂直刺激大鼠術(shù)側(cè)后肢足底第三、四趾間皮膚,縮爪或舔足現(xiàn)象為陽性表現(xiàn)。此時(shí)刺激數(shù)值即代表大鼠機(jī)械刺激痛閾值,連續(xù)測(cè)量需間隔5min,以5次測(cè)量的平均值作為變量進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。3.脊髓背角TRPV4基因及蛋白檢測(cè)術(shù)后第7天大鼠機(jī)械刺激痛閾值檢測(cè)結(jié)束后將所有大鼠處死取材,使用RT-PCR及Western Blot技術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組大鼠脊髓背角TRPV4基因及蛋白變化。結(jié)果1.TRPV4在大鼠脊髓背角中的表達(dá)Western-Blot和RT-PCR結(jié)果顯示：空白對(duì)照組大鼠脊髓背角存在TRPV4蛋白及基因表達(dá),表明TRPV4在脊髓背角有表達(dá)。2.CCD模型后大鼠術(shù)側(cè)脊髓背角內(nèi)TRPV4表達(dá)變化Western-Blot結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組相比,術(shù)后第7天,CCD手術(shù)組大鼠術(shù)側(cè)脊髓背角TRPV4蛋白表達(dá)顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；RT-PCR結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,術(shù)后第7天,CCD手術(shù)組大鼠術(shù)側(cè)脊髓背角TRPV4基因表達(dá)顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；3.釕紅對(duì)CCD大鼠術(shù)側(cè)機(jī)械刺激痛閾值的影響機(jī)械刺激痛閾值測(cè)量結(jié)果顯示：與CCD手術(shù)組相比,鞘內(nèi)注射TRPV4抑制劑釕紅2小時(shí)后,CCD+釕紅組大鼠手術(shù)側(cè)機(jī)械刺激痛閾值明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。4.釕紅對(duì)CCD大鼠術(shù)側(cè)脊髓背角內(nèi)TRPV4表達(dá)的影響Western-Blot結(jié)果顯示：與CCD手術(shù)組相比,鞘內(nèi)注射TRPV4抑制劑釕紅2小時(shí)后,CCD+釕紅組大鼠術(shù)側(cè)脊髓背角TRPV4蛋白表達(dá)顯著減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示,與CCD手術(shù)組相比,鞘內(nèi)注射TRPV4抑制劑釕紅2小時(shí)后,CCD+釕紅組大鼠術(shù)側(cè)脊髓背角TRPV4基因表達(dá)顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論TRPV4蛋白在脊髓中有表達(dá)；CCD造模后脊髓背角內(nèi)TRPV4的表達(dá)明顯增高,鞘內(nèi)注射釕紅后,TRPV4的表達(dá)受到抑制的同時(shí)大鼠機(jī)械痛閾值明顯提高。本研究表明,TRPV4參與了CCD所誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛的中樞性敏化過程。
【關(guān)鍵詞】：背根神經(jīng)節(jié) 脊髓背角 TRPV4 CCD
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R741
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 符號(hào)說明14-15
• 前言15-18
• 實(shí)驗(yàn)材料18-20
• 實(shí)驗(yàn)方法20-27
• 結(jié)果27-28
• 討論28-38
• 創(chuàng)新性與局限性38
• 結(jié)論38-39
• 附圖39-43
• 參考文獻(xiàn)43-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章52
• 參與基金項(xiàng)目52-54
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表54

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本文編號(hào)：781672