發(fā)布時間：2017-09-02 06:46

  本文關(guān)鍵詞：Cystatin F基因敲除加重cuprizone模型髓鞘脫失的分子機制

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【摘要】：目的：多發(fā)性硬化(Multiple sclerosis, MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥性脫髓鞘疾病,以神經(jīng)炎癥、髓鞘脫失、膠質(zhì)細胞增生及軸突損傷為主要病理學特點。多數(shù)MS患者由復(fù)發(fā)-緩解型逐步發(fā)展為繼發(fā)進展型,患者無明顯緩解期,癥狀加重,全身免疫治療無效,多死于并發(fā)癥。由于其發(fā)病機制不清,因此目前缺乏有效的治療方法。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)Ⅱ型半胱氨酸蛋白酶抑制劑F(cystatin F, cys F)在脫髓鞘疾病中表達增多,為進一步闡明cys F基因的功能角色,我們利用cys F基因敲除小鼠構(gòu)建cuprizone脫髓鞘模型,發(fā)現(xiàn)敲除cys F基因明顯加重髓鞘脫失,但是cys F參與cuprizone誘導(dǎo)的髓鞘脫失的機制不清。本研究的目的在于探討cys F基因敲除后加重cuprizone模型髓鞘脫失的分子機制。方法：本研究分別利用C57BL/6J野生型、cystatin F基因敲除(cys F KO)和cathepsin C基因過表達(Cat C OE)小鼠,飼育0.2%cuprizone建立急性中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘脫失模型,以正常C57BL/6J小鼠作為空白對照。Cys F KO小鼠cuprizone飼育4周后,采用Real-time PCR和酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法分析腦內(nèi)趨化因子CXCL2的表達情況；Cat COE小鼠cuprizone飼育5周后,利用髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein, MBP)和成熟少突膠質(zhì)細胞標志物(CC1)免疫組織化學染色觀察髓鞘脫失以及少突膠質(zhì)細胞殘留情況；利用白細胞共同抗原(CD45)免疫組織化學染色觀察上述兩種基因工程小鼠cuprizone模型腦內(nèi)炎癥細胞侵潤情況。利用有活性的重組cathepsin C(Cat C)與原代混合培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞共孵育,采用Real-time PCR和ELISA對培養(yǎng)細胞CXCL2mRNA和培養(yǎng)介質(zhì)中CXCL2的表達量進行分析。采用單因數(shù)方差分析和線性回歸分析法,對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果：飼育cuprizone4周后,無論在mRNA水平還是蛋白水平,在cys F KO與野生型小鼠腦內(nèi)CXCL2的表達量都顯著高于空白對照組小鼠,在對cys F KO小鼠與野生型小鼠比較中發(fā)現(xiàn),KO小鼠CXCL2的表達量顯著高于野生型小鼠。cuprizone飼育4周后在脫髓部位出現(xiàn)大量CD45陽性細胞,在對比cys F KO小鼠與野生型小鼠發(fā)現(xiàn),KO小鼠CD45陽性細胞數(shù)顯著多于野生型小鼠。體外實驗顯示Cat C可誘導(dǎo)體外膠質(zhì)細胞產(chǎn)生和分泌趨化因子CXCL2,其mRNA表達呈劑量依賴性。與空白對照相比,cuprizone飼育5周后髓鞘殘留面積比以及少突膠質(zhì)細胞殘留均顯著減少并且在脫髓部位出現(xiàn)大量CD45陽性細胞,在對CatCOE小鼠與野生型小鼠比較中發(fā)現(xiàn),OE小鼠髓鞘殘留面積比以及少突膠質(zhì)細胞殘留數(shù)量明顯少于野生型小鼠,而且OE小鼠脫髓部位CD45陽性細胞數(shù)顯著多于野生型小鼠。結(jié)論：1. Cathepsin C可以誘導(dǎo)腦內(nèi)膠質(zhì)細胞產(chǎn)生趨化因子CXCL2。2. Cystatin F基因敲除解除了對Cathepsin C的抑制作用引起趨化因子的上調(diào)導(dǎo)致炎性細胞侵潤增多,最終引起髓鞘脫失加重。
【關(guān)鍵詞】：多發(fā)性硬化 cystatin F cuprizone cathepsin C 趨化因子
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R744.51
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-21
• 1. 實驗材料12-13
• 2. 實驗方法13-21
• 結(jié)果21-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻31-35
• 綜述35-49
• 參考文獻44-49
• 致謝49

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3 李丹;程敬亮;任翠萍;張勇;李彩霞;李華麗;王娟;李建靈;;滲透性髓鞘脫失綜合征17例MRI表現(xiàn)[J];鄭州大學學報(醫(yī)學版);2010年02期

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5 范凱;宋大為;馬堅妹;;Cuprizone介導(dǎo)的急性脫髓動物模型髓鞘脫失及再生的機制[J];神經(jīng)解剖學雜志;2007年02期

6 陳瑜;鄭榮遠;方恢林;胡強;梁珊珊;;實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠神經(jīng)損害與腦組織中絲裂原活化蛋白激酶表達的關(guān)系[J];中國臨床神經(jīng)科學;2014年02期

7 林世和,梁美源,饒明俐,劉多三;同心園性硬化——Balo氏病一例報告[J];吉林醫(yī)科大學學報;1978年02期

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本文編號：777012