本文關(guān)鍵詞：Cystatin F基因敲除加重cuprizone模型髓鞘脫失的分子機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 多發(fā)性硬化 cystatin F cuprizone cathepsin C 趨化因子

【摘要】：目的：多發(fā)性硬化(Multiple sclerosis, MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥性脫髓鞘疾病,以神經(jīng)炎癥、髓鞘脫失、膠質(zhì)細(xì)胞增生及軸突損傷為主要病理學(xué)特點(diǎn)。多數(shù)MS患者由復(fù)發(fā)-緩解型逐步發(fā)展為繼發(fā)進(jìn)展型,患者無(wú)明顯緩解期,癥狀加重,全身免疫治療無(wú)效,多死于并發(fā)癥。由于其發(fā)病機(jī)制不清,因此目前缺乏有效的治療方法。我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)Ⅱ型半胱氨酸蛋白酶抑制劑F(cystatin F, cys F)在脫髓鞘疾病中表達(dá)增多,為進(jìn)一步闡明cys F基因的功能角色,我們利用cys F基因敲除小鼠構(gòu)建cuprizone脫髓鞘模型,發(fā)現(xiàn)敲除cys F基因明顯加重髓鞘脫失,但是cys F參與cuprizone誘導(dǎo)的髓鞘脫失的機(jī)制不清。本研究的目的在于探討cys F基因敲除后加重cuprizone模型髓鞘脫失的分子機(jī)制。方法：本研究分別利用C57BL/6J野生型、cystatin F基因敲除(cys F KO)和cathepsin C基因過(guò)表達(dá)(Cat C OE)小鼠,飼育0.2%cuprizone建立急性中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘脫失模型,以正常C57BL/6J小鼠作為空白對(duì)照。Cys F KO小鼠cuprizone飼育4周后,采用Real-time PCR和酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法分析腦內(nèi)趨化因子CXCL2的表達(dá)情況；Cat COE小鼠cuprizone飼育5周后,利用髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein, MBP)和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物(CC1)免疫組織化學(xué)染色觀察髓鞘脫失以及少突膠質(zhì)細(xì)胞殘留情況；利用白細(xì)胞共同抗原(CD45)免疫組織化學(xué)染色觀察上述兩種基因工程小鼠cuprizone模型腦內(nèi)炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)情況。利用有活性的重組cathepsin C(Cat C)與原代混合培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞共孵育,采用Real-time PCR和ELISA對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞CXCL2mRNA和培養(yǎng)介質(zhì)中CXCL2的表達(dá)量進(jìn)行分析。采用單因數(shù)方差分析和線性回歸分析法,對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：飼育cuprizone4周后,無(wú)論在mRNA水平還是蛋白水平,在cys F KO與野生型小鼠腦內(nèi)CXCL2的表達(dá)量都顯著高于空白對(duì)照組小鼠,在對(duì)cys F KO小鼠與野生型小鼠比較中發(fā)現(xiàn),KO小鼠CXCL2的表達(dá)量顯著高于野生型小鼠。cuprizone飼育4周后在脫髓部位出現(xiàn)大量CD45陽(yáng)性細(xì)胞,在對(duì)比cys F KO小鼠與野生型小鼠發(fā)現(xiàn),KO小鼠CD45陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著多于野生型小鼠。體外實(shí)驗(yàn)顯示Cat C可誘導(dǎo)體外膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生和分泌趨化因子CXCL2,其mRNA表達(dá)呈劑量依賴性。與空白對(duì)照相比,cuprizone飼育5周后髓鞘殘留面積比以及少突膠質(zhì)細(xì)胞殘留均顯著減少并且在脫髓部位出現(xiàn)大量CD45陽(yáng)性細(xì)胞,在對(duì)CatCOE小鼠與野生型小鼠比較中發(fā)現(xiàn),OE小鼠髓鞘殘留面積比以及少突膠質(zhì)細(xì)胞殘留數(shù)量明顯少于野生型小鼠,而且OE小鼠脫髓部位CD45陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著多于野生型小鼠。結(jié)論：1. Cathepsin C可以誘導(dǎo)腦內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子CXCL2。2. Cystatin F基因敲除解除了對(duì)Cathepsin C的抑制作用引起趨化因子的上調(diào)導(dǎo)致炎性細(xì)胞侵潤(rùn)增多,最終引起髓鞘脫失加重。
【關(guān)鍵詞】：多發(fā)性硬化 cystatin F cuprizone cathepsin C 趨化因子
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R744.51
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-21
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料12-13
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法13-21
• 結(jié)果21-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 綜述35-49
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 致謝49

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李仲光;王小木;夏峰;王津存;;滲透性髓鞘脫失綜合征的臨床研究[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2009年05期

2 石炎川;陳躍鴻;;橋腦中央髓鞘溶解癥1例[J];罕少疾病雜志;2006年02期

3 李丹;程敬亮;任翠萍;張勇;李彩霞;李華麗;王娟;李建靈;;滲透性髓鞘脫失綜合征17例MRI表現(xiàn)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年02期

4 陳保平,陳道平,陳敏誨;HSV-2感染小鼠導(dǎo)致脊髓白質(zhì)髓鞘脫失的研究[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;1999年06期

5 范凱;宋大為;馬堅(jiān)妹;;Cuprizone介導(dǎo)的急性脫髓動(dòng)物模型髓鞘脫失及再生的機(jī)制[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2007年02期

6 陳瑜;鄭榮遠(yuǎn);方恢林;胡強(qiáng);梁珊珊;;實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠神經(jīng)損害與腦組織中絲裂原活化蛋白激酶表達(dá)的關(guān)系[J];中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué);2014年02期

7 林世和,梁美源,饒明俐,劉多三;同心園性硬化——Balo氏病一例報(bào)告[J];吉林醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1978年02期

8 李越星,田淑芬,賈新州,吳麗娟,張秋榮,左越煥;肌萎縮側(cè)索硬化癥的周圍神經(jīng)損害[J];中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐;2005年05期

9 張杰敏,蔡方成;空腸彎曲菌誘發(fā)周圍神經(jīng)病的免疫學(xué)證據(jù)[J];中華兒科雜志;2001年02期

10 潘瑋;吳亮;;腎上腺腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良治療體會(huì)[J];甘肅醫(yī)藥;2013年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王洪凱;梅峰;韋美;陳成立;劉志;肖嵐;;Cuprizone介導(dǎo)的髓鞘脫失與年齡相關(guān)性研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 朱德生;FTY-720對(duì)EAE小鼠的治療作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 梁夢(mèng)茹;淫羊藿提取物對(duì)Cuprizone介導(dǎo)的髓鞘脫失動(dòng)物模型的影響及機(jī)制初探[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 梁俊杰;Cystatin F基因敲除加重cuprizone模型髓鞘脫失的分子機(jī)制[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王玨瓊;馬索羅酚和丹參酮ⅡA對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠治療作用的病理學(xué)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：777012