本文關(guān)鍵詞：褪黑素對實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及其抗氧化應(yīng)激機制

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【摘要】：目的:探討褪黑素(MT)對實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)小鼠發(fā)病的神經(jīng)保護(hù)作用及其抗氧化應(yīng)激機制,為多發(fā)性硬化(MS)尋找新的治療藥物。方法:將48只雌性C57BL/6小鼠(周齡6-8周,體重18-22g)隨機分成正常對照組、EAE對照組、MT干預(yù)組,每組16只;各組再隨機分為甲、乙兩個亞組。利用MOG35-55多肽、完全弗氏佐劑(CFA)、結(jié)核桿菌H37Ra、百日咳毒素(PTX)等對EAE對照組和MT干預(yù)組小鼠進(jìn)行免疫制備EAE動物模型。正常對照組僅注射不含MOG35-55的CFA。以Benson 5分評分標(biāo)準(zhǔn)每天對小鼠進(jìn)行1次神經(jīng)功能障礙評分,并記錄各組小鼠活動、進(jìn)食、毛發(fā)、體重等情況。自造模當(dāng)天開始MT干預(yù)組給予腹腔注射MT10 mg/kg(10mg/ml),而正常對照組與EAE對照組每日腹腔注射生理鹽水1ml/kg。EAE對照組和MT干預(yù)組按照上述要求連續(xù)注射藥物至發(fā)病高峰期,處死小鼠取材。若小鼠連續(xù)3天評分無加重、四肢完全癱瘓、瀕臨死亡或者死亡作為EAE發(fā)病高峰期。正常對照組及其余未發(fā)病小鼠則于造模后28天處死、取材。所有甲亞組小鼠經(jīng)4%甲醛灌注固定后取脊髓,乙亞組則在冰盤上斷頭迅速取出腦組織,制作成腦組織勻漿,離心后取上清液放置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆�。待所有小鼠全部取材完畢�?甲亞組用免疫組化法觀察脊髓轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)和血紅素加氧酶-1(HO-1)的表達(dá)情況,以及用HE染色觀察脊髓實質(zhì)中炎性細(xì)胞浸潤及特殊的“血管袖套”現(xiàn)象;乙亞組則分別用黃嘌呤氧化酶法和紫外分光法檢測腦組織勻漿中超氧化物歧化酶(sod)及過氧化氫酶(cat)活力;用比色法和化學(xué)熒光法檢測組織勻漿中硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物(tbars)和活性氧(ros)含量。結(jié)果:(1)實驗小鼠發(fā)病情況觀察:正常對照組中無發(fā)病小鼠。eae對照組、mt干預(yù)組均有不同程度發(fā)病,其發(fā)病率分別為81.2%、56.3%(p0.05)。(2)實驗小鼠神經(jīng)功能障礙評分、潛伏期及進(jìn)展期變化:eae對照組和mt干預(yù)組發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評分分別為2.8±1.0分、1.4±0.7分。mt干預(yù)組小鼠神經(jīng)功能障礙程度較eae對照組明顯減輕(p0.05)。mt干預(yù)組的發(fā)病潛伏期為15.23±1.86天,較eae對照組的發(fā)病潛伏期(12.77±1.92天)明顯延長(p0.05)。mt干預(yù)組的發(fā)病進(jìn)展期為4.00±0.87天,較eae對照組的進(jìn)展期(6.92±1.80天)明顯縮短(p0.05)。(3)組織病理改變:正常對照組小鼠脊髓組織無異常。eae對照組小鼠發(fā)病高峰期可見脊髓實質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤,典型者可在小靜脈周圍形成“袖套”狀改變,在脊髓的腰膨大前正中裂周圍這種改變較為明顯。而mt干預(yù)組炎性細(xì)胞浸潤情況較eae對照組有所減輕,“血管袖套”現(xiàn)象也較少見。(4)各組小鼠腦組織勻漿sod和cat活力:發(fā)病高峰期,正常對照組、eae對照組、mt干預(yù)組sod活力分別是164.72±6.68、107.09±26.41、132.13±17.72u/mgprot。正常對照組、eae對照組、mt干預(yù)組cat活力分為10.69±0.70、5.69±1.67、7.50±2.24umol/mgprot。eae對照組、mt干預(yù)組sod及cat活力較正常對照組均明顯降低(p0.05);mt干預(yù)組sod及cat活力較eae對照組均明顯升高(p0.05)。(5)各組小鼠腦組織勻漿tbars和ros含量:發(fā)病高峰期,正常對照組、eae對照組、mt干預(yù)組tbars含量分別是19.50±3.47、38.77±12.32、28.86±7.52ug/g,正常對照組、eae對照組、mt干預(yù)組ros含量分別為47.00±4.53、92.63±25.03、69.00±17.25ηnmol/mgprot。eae對照組、mt干預(yù)組tbars和ros含量均顯著高于正常對照組(p0.05),mt干預(yù)組tbars和ros含量較eae對照組明顯下降(p0.05)。(6)實驗小鼠脊髓nrf2和ho-1表達(dá):發(fā)病高峰期,正常對照組、eae對照組、mt干預(yù)組脊髓nrf2表達(dá)陽性細(xì)胞計數(shù)分別是15.13±3.27、27.63±3.58、54.88±10.01個,正常對照組、eae對照組、mt干預(yù)組脊髓ho-1陽性細(xì)胞計數(shù)分別為11.50±2.82、30.38±9.72、48.88±13.97個。eae對照組和mt干預(yù)組nrf2及ho-1的表達(dá)均較正常對照組小鼠明顯升高(p0.05),mt干預(yù)組nrf2和ho-1表達(dá)較eae對照組升高更明顯(p0.05)。(7)相關(guān)性分析:eae對照組和mt干預(yù)組小鼠發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評分與腦組織勻漿sod和cat活力及脊髓組織nrf2和ho-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(p0.05);與腦組織勻漿tbars和ros含量呈正相關(guān)(p0.05)。eae對照組和mt干預(yù)組小鼠潛伏期與腦組織勻漿sod和cat活力及脊髓組織nrf2和ho-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(p0.05);與腦組織勻漿tbars和ros含量呈正相關(guān)(p0.05)。eae對照組和mt干預(yù)組小鼠進(jìn)展期與腦組織勻漿sod和cat活力及脊髓組織nrf2和ho-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(p0.05);與腦組織勻漿tbars和ros含量呈正相關(guān)(p0.05)。結(jié)論:(1)本實驗采用皮下注射mog35-55多肽建立eae模型,發(fā)病小鼠神經(jīng)功能障礙明顯,脊髓實質(zhì)中有大量的炎性細(xì)胞浸潤,在血管周圍細(xì)胞聚集可呈“袖套狀”改變,說明此法造模成功,可重復(fù)性好。(2)EAE發(fā)病中存在著氧化和抗氧化失衡,TBARS、ROS含量增加,抗氧化酶SOD、CAT活力降低,氧化應(yīng)激損害可能是導(dǎo)致EAE不斷進(jìn)展的一個重要因素。(3)MT可以降低EAE小鼠發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評分、延長潛伏期、縮短進(jìn)展期,減少脊髓組織中炎性細(xì)胞浸潤,提示MT對EAE小鼠具有神經(jīng)保護(hù)作用。(4)MT對EAE小鼠的保護(hù)作用可能是通過激活Nrf2/ARE信號通路,抑制脂質(zhì)過氧化、上調(diào)抗氧化酶活性,降低氧化應(yīng)激損害而發(fā)揮的。
【關(guān)鍵詞】：褪黑素 實驗變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R744.5
【目錄】：

• 中文摘要3-7
• 英文摘要7-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-25
• 結(jié)果25-33
• 討論33-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-54
• 英漢縮略詞對照表54-56
• 致謝56-57
• 多發(fā)性硬化的疾病修正治療研究進(jìn)展（綜述）57-68
• 參考文獻(xiàn)63-68

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本文編號：772928