本文關(guān)鍵詞：乙酰乙酸保護(hù)雙氧水引起的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡

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【摘要】：本研究旨在探討酮體成分之一乙酰乙酸對(duì)神經(jīng)細(xì)胞氧化性損傷的保護(hù)作用及潛在的機(jī)制,以外源性過氧化氫處理建立神經(jīng)細(xì)胞系PC12細(xì)胞氧化性損傷的體外模型,并在此基礎(chǔ)上研究不同濃度的乙酰乙酸預(yù)處理對(duì)損傷的拮抗作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),0.1-8.0 mmol/L的乙酰乙酸對(duì)PC12細(xì)胞無細(xì)胞毒性,說明這個(gè)濃度區(qū)間的乙酰乙酸可以作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)安全劑量。通過MTT細(xì)胞活力分析、乳酸脫氫酶漏出實(shí)驗(yàn)以及Annexin V/PI凋亡分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),在150μmol/L的過氧化氫的刺激下,PC12細(xì)胞表現(xiàn)出氧化性損傷和細(xì)胞凋亡率增高,而乙酰乙酸預(yù)處理有效地抑制了過氧化氫引起的細(xì)胞損傷和細(xì)胞凋亡。過氧化氫引起的細(xì)胞凋亡主要與氧化應(yīng)激及其介導(dǎo)的凋亡蛋白caspase-9和caspase-3激活有關(guān)。通過對(duì)胞內(nèi)活性氧水平的分析(DCFH-DA熒光探針)、抗氧化酶SOD和CAT的的活力分析(酶活檢測(cè)試劑盒)、凋亡蛋白caspase-9和caspase-3激活的分析(Western blot法)發(fā)現(xiàn),0.5-4.0 mmol/L的乙酰乙酸預(yù)處理可以有效地抑制過氧化氫引起的氧化應(yīng)激和凋亡蛋白激活。綜合結(jié)果可以確認(rèn)0.5-4.0 mmol/L的乙酰乙酸可以有效地減少過氧化氫誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞細(xì)胞死亡和LDH漏出,降低細(xì)胞凋亡率,抵抗胞內(nèi)活性氧的升高,恢復(fù)抗氧化酶活力,抑制凋亡蛋白的激活�？傊�,乙酰乙酸對(duì)過氧化氫引起的PC12神經(jīng)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷和細(xì)胞凋亡有良好的保護(hù)作用。本文為加深對(duì)乙酰乙酸的認(rèn)識(shí)提供理論依據(jù),同時(shí)為治療神經(jīng)退行性疾病或缺血缺氧再灌注損傷提供藥物選擇。
【關(guān)鍵詞】：乙酰乙酸 過氧化氫 PC12細(xì)胞 氧化應(yīng)激 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：河北科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R741
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第1章 緒論8-30
• 1.1 氧化應(yīng)激與神經(jīng)退行性疾病的關(guān)系8-18
• 1.1.1 作用效果8-12
• 1.1.2 氧化應(yīng)激與各類疾病的關(guān)系12-14
• 1.1.3 細(xì)胞的凋亡14-18
• 1.2 PC12細(xì)胞的生物學(xué)特征18-19
• 1.3 酮體的研究現(xiàn)狀19-28
• 1.3.1 酮體與癲癇20-21
• 1.3.2 酮體與阿茲海默病21-23
• 1.3.3 酮體與帕金森病23-26
• 1.3.4 酮體與肌萎縮側(cè)索硬化癥26-27
• 1.3.5 酮體與脊髓肌萎縮癥27-28
• 1.4 本研究的思路、目的和意義28-30
• 第2章 乙酰乙酸對(duì)過氧化氫引起的PC12細(xì)胞死亡的保護(hù)作用30-42
• 2.1 材料和方法30-35
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料30
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備30-31
• 2.1.3 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)31-32
• 2.1.4 PC12細(xì)胞的技術(shù)方法32
• 2.1.5 MTT法檢測(cè)乙酰乙酸對(duì)細(xì)胞的毒性作用32-33
• 2.1.6 MTT法檢測(cè)乙酰乙酸對(duì)過氧化氫引起的細(xì)胞死亡的有效保護(hù)濃度33
• 2.1.7 LDH法檢測(cè)乙酰乙酸對(duì)過氧化氫引起的細(xì)胞損傷的保護(hù)作用33-34
• 2.1.8 Annexin V/PI探針檢測(cè)乙酰乙酸對(duì)過氧化氫引起的細(xì)胞死亡的有效保護(hù)濃度34-35
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-39
• 2.2.1 乙酰乙酸對(duì)細(xì)胞的毒性作用35-36
• 2.2.2 乙酰乙酸對(duì)過氧化氫引起的細(xì)胞死亡的保護(hù)作用36-37
• 2.2.3 乙酰乙酸對(duì)過氧化氫引起的細(xì)胞損傷的保護(hù)作用37-38
• 2.2.4 乙酰乙酸對(duì)過氧化氫引起的細(xì)胞調(diào)亡的保護(hù)作用38-39
• 2.3 討論39-42
• 第3章 乙酰乙酸對(duì)過氧化氫引起的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用42-56
• 3.1 材料和方法42-49
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料42-43
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備43
• 3.1.3 DCFH-DA熒光探針檢測(cè)過氧化氫和乙酰乙酸處理后PC12細(xì)胞胞內(nèi)活性氧水平的影響43-44
• 3.1.4 SOD活力檢測(cè)試劑盒檢測(cè)過氧化氫和乙酰乙酸處理后PC12細(xì)胞胞內(nèi)抗氧化酶SOD活力變化的影響44-45
• 3.1.5 CAT活力檢測(cè)試劑盒檢測(cè)過氧化氫和乙酰乙酸處理后PC12細(xì)胞胞內(nèi)抗氧化酶SOD活力變化的影響45-46
• 3.1.6 Western blot法檢測(cè)過氧化氫和乙酰乙酸處理后PC12細(xì)胞胞內(nèi)凋亡蛋白caspase-9、caspase-3 表達(dá)變化的影響46-49
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-53
• 3.2.1 乙酰乙酸對(duì)過氧活性引起的活性氧增高的抑制作用49-50
• 3.2.2 過氧化氫和乙酰乙酸處理后PC12細(xì)胞胞內(nèi)抗氧化酶SOD活力的變化50-51
• 3.2.3 過氧化氫和乙酰乙酸處理后PC12細(xì)胞胞內(nèi)抗氧化酶CAT活力的變化51-52
• 3.2.4 過氧化氫和和乙酰乙酸處理后PC12細(xì)胞胞內(nèi)凋亡蛋白caspase-9、caspase-3 表達(dá)的變化52-53
• 3.3 討論53-56
• 研究結(jié)論及展望56-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 致謝64-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷66

【參考文獻(xiàn)】

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1 韓茜;余玲;;氧化應(yīng)激-線粒體功能異常與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J];國際眼科雜志;2015年02期

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本文編號(hào)：768173