發(fā)布時(shí)間：2017-08-28 11:09

  本文關(guān)鍵詞：厚樸酚對(duì)戊四氮點(diǎn)燃慢性癲癇大鼠行為及海馬BDNF表達(dá)的影響

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【摘要】：目的:癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)中一種常見的慢性疾病,影響著約全世界大約有1%-2%人口,具有較高的發(fā)生率和死亡率。其臨床特征為短暫性、發(fā)作性、重復(fù)性、刻板性。電生理特征為腦內(nèi)神經(jīng)元高度同步化異常放電。以神經(jīng)元凋亡,尤其是海馬等邊緣系統(tǒng)的神經(jīng)元凋亡伴膠質(zhì)細(xì)胞增生為主要病理改變。目前,有效藥物治療僅能控制住70%的癲癇發(fā)作,仍有30%癲癇患者發(fā)展成難治性癲癇,約30-40%的患者伴有認(rèn)知功能障礙,表現(xiàn)為記憶力減退、語(yǔ)言障礙、執(zhí)行力差、社會(huì)認(rèn)知障礙等方面。因此,癲癇仍然是困擾人類的一大難題,尋求一種既能控制癲癇發(fā)作又能改善認(rèn)知功能的藥物迫在眉睫。本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象為戊四氮點(diǎn)燃的慢性癲癇大鼠模型,分別用厚樸酚(magnolol,Mag)高、中、低三個(gè)劑量對(duì)其進(jìn)行干預(yù),統(tǒng)計(jì)點(diǎn)燃率來反應(yīng)癲癇發(fā)作情況,通過Morris水迷宮檢測(cè)致癇大鼠認(rèn)知功能,應(yīng)用Western Blot及免疫組化方法檢測(cè)BDNF(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)在海馬組織中的表達(dá)情況,以觀察厚樸酚對(duì)戊四氮點(diǎn)燃癲癇大鼠的行為、認(rèn)知及海馬BDNF表達(dá)的影響,并初步探討厚樸酚對(duì)戊四氮(Pentylenetetrazole,PTZ)致癇大鼠的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。方法:選用健康清潔的雄性SD大鼠75只,體重約為250-300g。采用隨機(jī)對(duì)照分組原則,分為正常對(duì)照組(NC組)、戊四氮組(PTZ組)、低劑量厚樸酚組(L組)、中劑量厚樸酚組(M組)、和高劑量厚樸酚組(H組),每組大鼠15只。自實(shí)驗(yàn)第一天起,每天上午10點(diǎn)除NC組外各組大鼠腹腔注射PTZ 35mg/kg,NC組大鼠注射相同計(jì)量的生理鹽水,共計(jì)42天。L組、M組和H組于注射PTZ前半小時(shí)分別通過腹腔注射低劑量(2.5mg/kg)厚樸酚、中劑量(5mg/kg)厚樸酚、高劑量(10mg/kg)厚樸酚。打藥后分別觀察大鼠癲癇發(fā)作情況1小時(shí),依據(jù)Racine分級(jí)來評(píng)價(jià)大鼠癲癇發(fā)作等級(jí)。于藥物注射結(jié)束24小時(shí)后,進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試評(píng)價(jià)學(xué)習(xí)記憶能力,從而評(píng)估認(rèn)知受損情況。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后斷頭取腦分離海馬組織,用Western Blot方法檢測(cè)BDNF蛋白表達(dá)水平;對(duì)相關(guān)腦組織固定,用透射電鏡觀察海馬CA1區(qū)超微結(jié)構(gòu)變化或者免疫組織化學(xué)方法觀察BDNF在海馬中的表達(dá)情況。結(jié)果:1行為學(xué)觀察PTZ組大鼠從第4-6天開始反復(fù)出現(xiàn)洗臉、點(diǎn)頭及面部抽搐等表現(xiàn),第7-15天出現(xiàn)單側(cè)前肢或雙前肢抬起、全身肌陣攣,最終出現(xiàn)全身強(qiáng)直陣攣性發(fā)作,達(dá)到Racine分級(jí)完全點(diǎn)燃的標(biāo)準(zhǔn)。截止到第42天,點(diǎn)燃大鼠毛發(fā)無光澤,精神萎靡,飲食尚可,體重未出現(xiàn)明顯變化。PTZ組大鼠點(diǎn)燃率為93.3%,明顯高于L組、M組、H組和NC組(P0.05)。與PTZ組大鼠相比,厚樸酚給藥組大鼠點(diǎn)燃時(shí)間延長(zhǎng),發(fā)作等級(jí)明顯降低,第8-10天大鼠開始出現(xiàn)洗臉、點(diǎn)頭及面部抽搐等表現(xiàn)。截止到第42天,厚樸酚給藥組大鼠中L組、M組、H組大鼠點(diǎn)燃率分別為6.7%、13.3%、33.3%,三組間兩兩比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2水迷宮測(cè)試結(jié)果定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果:①以各組大鼠每日逃避潛伏期均值進(jìn)行比較。⑴實(shí)驗(yàn)第1天,PTZ組大鼠的逃避潛伏期(71.635±6.905)與NC組大鼠(42.206±8.316)相比有所延長(zhǎng),與PTZ組相比,H組(60.158±6.302)、M組(57.426±5.912)和L組(59.346±7.213)的逃避潛伏期均有所縮短,但各組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。⑵第2天,各組大鼠逃避潛伏期均比第1天明顯縮短(P0.05),PTZ組的逃避潛伏期(28.563±4.372)與NC組(8.452±2.121)相比明顯延長(zhǎng)(P0.05);與PTZ組相比,H組(21.260±5.165)、M組(17.123±5.272)和L組(20.145±4.265)的逃避潛伏期均有所縮短(P0.05),且與NC組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。⑶第3天,各組大鼠逃避潛伏期均較第2天明顯縮短(P0.05),NC組(6.258±2.192)、PTZ組(23.456±4.265)、H組(15.321±4.132)、M組(12.365±3.234)、L組(14.259±3.124)的逃避潛伏期相互比較結(jié)果同第2天。⑷各組大鼠逃避潛伏期均較第3天又明顯縮短(P0.05),NC組(4.625±1.151)、PTZ組(16.235±2.532)、H組(8.632±2.171)、M組(7.235±1.185)、L組(9.125±1.905)的逃避潛伏期相互比較結(jié)果與第3天相同。提示PTZ致癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降,厚樸酚可以部分改善其學(xué)習(xí)記憶能力。②空間探索試驗(yàn)結(jié)果:PTZ組大鼠(2.78±1.05)與NC組大鼠(19.73±3.21)相比,穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少(P0.05);與PTZ組相比,H組(8.63±2.73)、M組(12.71±2.74)、L組(10.89±3.41)穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增多(P0.05),與NC組相比亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。提示慢性癲癇大鼠的空間記憶能力下降,而厚樸酚可以改善其空間記憶能力。3透射電鏡觀察海馬CA1區(qū)超微結(jié)構(gòu)變化NC組電鏡觀察:神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)完整,細(xì)胞核呈圓形,染色質(zhì)分布均勻,細(xì)胞器豐富,可見圓形或橢圓型線粒體,線粒體嵴清晰,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及高爾基體發(fā)達(dá),突觸前后膜結(jié)構(gòu)清晰,靠近突觸前膜可見許多突觸囊泡,突觸間隙清晰。PTZ組電鏡觀察:海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張明顯,線粒體腫脹,嵴變少,細(xì)胞核染色質(zhì)固縮,突觸數(shù)量減少,突觸前后膜模糊不清,突觸間隙增寬,突觸囊泡數(shù)量減少。L組及M組海馬神經(jīng)元細(xì)胞核結(jié)構(gòu)完整,無固縮現(xiàn)象,細(xì)胞器的形態(tài)基本正常,突觸數(shù)量基本不減少,突觸前后膜較清楚,突觸前膜的囊泡數(shù)量較多。H組海馬神經(jīng)元可見線粒體腫脹,嵴變少,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,突觸囊泡數(shù)量較少,間隙增寬。4 BDNF免疫組化結(jié)果NC組、PTZ組、L組、M組及H組大鼠海馬組織中均可見到彌漫分布的BDNF免疫反應(yīng)產(chǎn)物,陽(yáng)性細(xì)胞主要表達(dá)在細(xì)胞漿中,為染色較深的棕褐色顆粒。NC組海馬CA1及CA3區(qū)400倍視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為(85.672±6.566,87.369±6.354);PTZ組海馬CA1區(qū)及CA3區(qū)400倍視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為(37.743±7.393,35.521±5.231);H組海馬CA1區(qū)及CA3區(qū)400倍視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為(34.245±5.051,34.965±5.967);M組海馬CA1區(qū)及CA3區(qū)400倍視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為(69.662±6.093,68.348±6.147);L組海馬CA1區(qū)及CA3區(qū)400倍視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為(55.863±8.125,57.625±7.159)。與L、M組及N組相比,PTZ組海馬CA1及CA3區(qū)400倍視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯降低(P0.05);與H組相比,PTZ組海馬CA1及CA3區(qū)400倍視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)升高,但是無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與N組相比,L組、M組、H組海馬CA1及CA3區(qū)400倍視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著下降(P0.05),N組與L組、M組、H組之間兩兩比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5 BDNF Western blot結(jié)果與L組(1.148±0.112)、M組(1.972±0.158)及N組(2.317±0.163)相比,PTZ組海馬BDNF蛋白表達(dá)水平(1.215±0.167)明顯降低(P0.05);與H組(1.148±0.112)相比,PTZ組海馬BDNF蛋白表達(dá)水平升高,但是無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與N組相比,L組、M組、H組海馬BDNF蛋白表達(dá)水平顯著下降(P0.05),N組與L組、M組、H組之間比較海馬BDNF蛋白表達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1本實(shí)驗(yàn)采用戊四氮化學(xué)點(diǎn)燃方法成功建立了伴有認(rèn)知功能損害的慢性癲癇大鼠模型。2癲癇發(fā)作可以導(dǎo)致透射電鏡下大鼠海馬組織超微結(jié)構(gòu)的改變。3癲癇發(fā)作可導(dǎo)致大鼠海馬組織中BDNF蛋白表達(dá)下降。4厚樸酚能夠降低大鼠癲癇發(fā)作率并且改善致癇大鼠認(rèn)知功能。進(jìn)而推測(cè)其可能機(jī)制為通過上調(diào)大鼠海馬組織中BDNF水平從而起到神經(jīng)保護(hù)作用。5本實(shí)驗(yàn)中,5mg/kg厚樸酚劑量可能為改善認(rèn)知功能且降低癲癇發(fā)作可能性的最佳劑量。
【關(guān)鍵詞】：癲癇 厚樸酚 戊四氮 認(rèn)知功能 BDNF
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.1
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-23
• 結(jié)果23-26
• 附圖26-34
• 附表34-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 綜述 淺談顳葉內(nèi)側(cè)癲癇對(duì)認(rèn)知功能的影響42-49
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 致謝49-50
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷50

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本文編號(hào)：747750