本文關(guān)鍵詞：視神經(jīng)脊髓炎及多發(fā)性硬化關(guān)聯(lián)基因FcRL3的表達研究

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【摘要】：目的與疾病關(guān)聯(lián)的基因多態(tài)性可能增加了疾病發(fā)生發(fā)展的危險因素,但是更重要的是認識這種多態(tài)性位點如何改變基因及細胞的功能,從而進一步認識疾病的發(fā)病機制。在本課題組的前期研究中,我們發(fā)現(xiàn)Fc RL3基因多態(tài)性與中國漢族人群NMO和MS相關(guān)聯(lián)。在這部分,我們將進一步探討Fc RL3基因多態(tài)性與NMO及MS患者發(fā)病的關(guān)系,特別是Fc RL3基因表達與臨床用藥及患者病程不同時期之間的關(guān)系;同時構(gòu)建表達有Fc RL3的體外模型Jurkat細胞,觀察NMO和MS的急性期治療藥物甲強龍對Fc RL3表達水平的影響。初步探討Fc RL3基因在NMO和MS發(fā)病過程中的可能機制。方法1、收集臨床確診的MS組56例,NMO組57例以及正常對照77例。其中MS組中收集患者血液標(biāo)本62份,包括部分患者不同用藥時期的外周血:急性期13例,緩解期5例;NMO組收集患者血液標(biāo)本98份,其中部分患者采集不同用藥時期的外周血:用藥前(急性期)、用藥中(急性期)、用藥后(緩解期),包括急性期67例,緩解期31例;正常對照的血液標(biāo)本77份。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和實時熒光定量PCR技術(shù)檢測患者及正常對照標(biāo)本外周血Fc RL3 m RNA的表達。2、收集Jurkat細胞株,驗證Jurkat細胞株高表達Fc RL3蛋白。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測Jurkat細胞株不同用藥時期Fc RL3 m RNA的表達;采用Western-blotting蛋白免疫印跡法檢測不同用藥時期Jurkat細胞株上Fc RL3蛋白的表達情況;流式細胞術(shù)分析檢測激素對Jurkat細胞上Fc RL3表達的影響。結(jié)果1、Fc RL3 m RNA在患者中的表達量明顯低于正常對照Fc RL3的表達量(p0.05);不管是在MS患者還是NMO患者。在NMO組中,患者急性期的表達量明顯低于在緩解期的表達量(p0.05)。2、在MS組中,不同基因型表達存在顯著的統(tǒng)計學(xué)差異,CC基因型Fc RL3 m RNA較其他基因型明顯增高(CC vs CT,P=0.014;CC vs TT,p=0.005),在NMO組中,不同基因型Fc RL3 m RNA表達存在著明顯差異(CT vs TT,p=0.038);然而,在正常對照中,不同基因型的Fc RL3 m RNA表達不存在統(tǒng)計學(xué)差異。對于相同基因型TT,NMO組的Fc RL3 m RNA表達明顯低于對照組(p=0.000),同時,MS組的Fc RL3 m RNA表達明顯低于對照組(p=0.001);對于相同基因型CT,NMO組(p=0.004)和MS組(p=0.009)的Fc RL3 m RNA表達明顯低于對照組;對于相同基因型CC,NMO組和MS組的Fc RL3 m RNA表達與對照組相比沒有明顯統(tǒng)計學(xué)差異。3、在NMO組中,可觀察到同一病人在激素不同用藥時期(用藥前—用藥中—用藥后)出現(xiàn)外周血Fc RL3 m RNA表達不同趨勢,表現(xiàn)為使用激素后Fc RL3表達抑制,緩解期Fc RL3 m RNA表達升高的趨勢。4、NMO患者病程的不同時期(急性期—緩解期),不同病程Fc RL3 m RNA表達存在明顯的統(tǒng)計學(xué)差異,緩解期較急性期Fc RL3基因表達明顯增高(p=0.045);在MS組中,患者臨床病程的不同時期(急性期-緩解期),Fc RL3m RNA表達不存在統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.297)。5、經(jīng)驗證Jurkat細胞上Fc RL3蛋白高表達。Jurkat細胞上Fc RL3蛋白的表達在不同濃度激素干預(yù)時有量的差異,在0.25mg甲強龍干預(yù)水平,Jurkat細胞出現(xiàn)抑制但不致死,故0.25mg為最適用藥濃度。7、Jurkat細胞在0.25mg激素干預(yù)的不同用藥時期(24h-48h),出現(xiàn)使用激素后Fc RL3表達抑制,用藥后一定時間Fc RL3 m RNA表達升高的趨勢。結(jié)論1、FcRL3基因與中國漢族人群NMO和MS均具有相關(guān)性。2、在中國漢族人群NMO和MS患者中,Fc RL3基因rs7528684位點作為啟動子及其近側(cè)區(qū)域可結(jié)合控制轉(zhuǎn)錄起始的元件,影響外周血Fc RL3轉(zhuǎn)錄,從而調(diào)節(jié)Fc RL3基因的表達。3、外周血單個核細胞的Fc RL3 m RNA在NMO和MS緩解期表達增高,推測其可能是一種保護性反應(yīng),具體機制有待進一步探討。4、藥物干預(yù)后,Jurkat細胞上Fc RL3表達呈劑量時間效應(yīng)關(guān)系,推測Fc RL3基因在免疫調(diào)節(jié)中的準確作用和在胞內(nèi)信號通路中起著一定的作用。目的視神經(jīng)脊髓炎(Neuromyelitis Optica,NMO)和多發(fā)性硬化(Multiple sclerosis,MS)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥性脫髓鞘性的自身免疫性疾病。視神經(jīng)脊髓炎,以往被視為多發(fā)性硬化的一種特殊亞型。自從NMO的自身特異性抗體NMO-Ig G的發(fā)現(xiàn),人們才把NMO從MS中獨立出來。近來,自噬相關(guān)基因5(autophagy-related gene,ATG5)發(fā)現(xiàn)與許多的自身免疫性疾病和炎性疾病發(fā)病相關(guān)。ATG5在T細胞上表達的增加可能參與了MS病人的炎性脫髓鞘過程。然而目前國內(nèi)外尚未見有關(guān)ATG5基因多態(tài)性與NMO及MS發(fā)病相關(guān)性的報道。本研究主要對自噬相關(guān)基因5(ATG5)基因多態(tài)性和視神經(jīng)脊髓炎以及多發(fā)性硬化的疾病易感性進行探討。方法收集2007-2012年復(fù)旦大學(xué)華山醫(yī)院和福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院及門診確診的視神經(jīng)脊髓炎患者109例,多發(fā)性硬化患者144例,健康對照288例,采用Mass Array對病例組及健康對照組進行ATG5基因的5個SNP位點進行基因多態(tài)性分析。結(jié)果1、NMO組rs548234的CC基因型與正常對照組相比具有明顯意義(P=0.016),同時進一步比較NMO-Ig G陽性的NMO組與正常對照組,我們發(fā)現(xiàn)rs548234位點T等位基因(P=0.003)和rs6937876位點的A等位基因(P=0.003)是一種保護因素。MS組ATG5的5個SNP位點的基因型和等位基因頻率與正常對照組相比較不存在明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);2、NMO組中,rs548234的CC基因型增加疾病易感性(p=0.016);3、在NMO-Ig G(+)的NMO患者中,rs548234(p=0.003)位點的T等位基因和rs6937876(p=0.009)位點的A等位基因為其保護因素;4、我們并沒有發(fā)現(xiàn)ATG5基因多態(tài)性與MS的發(fā)病存在相關(guān)性。結(jié)論ATG5的基因多態(tài)性與中國漢族人群視神經(jīng)脊髓炎發(fā)病相關(guān),而與多發(fā)性硬化的發(fā)生風(fēng)險無明顯相關(guān)性。這對進一步闡明自噬相關(guān)的自身免疫反應(yīng)在NMO發(fā)病過程中的可能機制提供線索。
【關(guān)鍵詞】：視神經(jīng)脊髓炎 多發(fā)性硬化 Fc受體樣基因3 Jurkat細胞 激素 視神經(jīng)脊髓炎 多發(fā)性硬化 單核苷酸多態(tài)性 自噬相關(guān)基因5 相關(guān)性研究
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R744.5
【目錄】：

• 第一部分 視神經(jīng)脊髓炎及多發(fā)性硬化關(guān)聯(lián)基因Fc RL3的表達研究中文摘要4-47
• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文縮寫詞釋義表11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-26
• 結(jié)果26-39
• 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-47
• 第二部分ATG5基因多態(tài)性與中國南方漢族人群視神經(jīng)脊髓炎相關(guān)性的研究中文摘要47-77
• 摘要48-50
• Abstract50-52
• 英文縮寫詞釋義表52-53
• 前言53-55
• 材料與方法55-64
• 結(jié)果64-67
• 討論67-68
• 結(jié)論68-69
• 附表69-71
• 參考文獻71-77
• 綜述77-91
• 參考文獻85-91
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章91-92
• 致謝92

【參考文獻】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 吳驊;FCRL3基因多態(tài)性與中國人群類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)聯(lián)研究及其與自身免疫性疾病相關(guān)性研究的Meta分析[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

2 劉啟兵;中國漢族人群多發(fā)性硬化關(guān)聯(lián)基因的篩選及FCRL3基因多態(tài)與多發(fā)性硬化相關(guān)性的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號：725509