本文關(guān)鍵詞：腦紅蛋白對(duì)小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系生長(zhǎng)速度的影響

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【摘要】：背景與目的腦紅蛋白(neuroglobin,Ngb)過(guò)去被認(rèn)為在神經(jīng)元細(xì)胞的特異性表達(dá),然而現(xiàn)在在多種腫瘤細(xì)胞中也被發(fā)現(xiàn)存在表達(dá)。這說(shuō)明Ngb除了參與低氧調(diào)節(jié)和保護(hù)神經(jīng)元及腦組織免于缺血缺氧性損傷外,可能在腫瘤的發(fā)生、形成和代謝中也發(fā)揮了作用。迄今為止,揭露Ngb和腫瘤發(fā)生之間直接聯(lián)系的文章很少。然而,另兩個(gè)球蛋白家族的成員,肌紅蛋白(myoglobin,Mb)和細(xì)胞紅蛋白(cytoglobin,Cygb)已被多次報(bào)道參與了腫瘤的形成。其可能機(jī)制包括清除氧氮自由基,通過(guò)調(diào)節(jié)低氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)表達(dá),參與低氧環(huán)境下的適應(yīng),以及增加線粒體膜的穩(wěn)定性。這些過(guò)程說(shuō)明球蛋白家族或多或少通過(guò)和細(xì)胞色素c之間的某種聯(lián)系,參與干擾細(xì)胞凋亡途徑。之前有研究通過(guò)人類免疫缺陷病毒1型反式激活因子(transactivator of transcription,TAT)蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù),使大分子Ngb蛋白成功穿過(guò)血腦屏障(blood-brain barrier,BBB)進(jìn)入腦內(nèi),解決了Ngb進(jìn)入腦內(nèi)細(xì)胞發(fā)揮腦保護(hù)作用的瓶頸問(wèn)題,使臨床應(yīng)用成為可能。因此,實(shí)現(xiàn)臨床應(yīng)用之前,去探索Ngb對(duì)腦腫瘤發(fā)生、發(fā)展的潛在影響具有重要意義。本研究擬通過(guò)探討Ngb是否在腦腫瘤細(xì)胞系中存在表達(dá),并結(jié)合慢病毒載體介導(dǎo),上調(diào)小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系N2a內(nèi)Ngb的表達(dá),來(lái)研究Ngb過(guò)表達(dá)狀態(tài)下細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖情況,為將來(lái)深入其機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ),為Ngb在腦血管病的神經(jīng)保護(hù)治療中的應(yīng)用提供保障。方法1.通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、細(xì)胞免疫熒光、Western Blot的方法,檢查Ngb在小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(N2a)、人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系(U251)、大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(C6)中的表達(dá)情況。2.將包裝好的Ngb過(guò)表達(dá)慢病毒導(dǎo)入N2a細(xì)胞,上調(diào)其表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物通過(guò)Western Blot鑒定,并進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)去觀察處理組和對(duì)照組之間細(xì)胞的增殖情況,包括細(xì)胞活力檢測(cè)和克隆形成試驗(yàn)。結(jié)果1.通過(guò)RT-PCR、免疫熒光檢查和Western Blot,表明Ngb在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(N2a)與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(U251、C6)均有表達(dá)。2.感染Lenti-Ngb-GFP組的Ngb表達(dá)較對(duì)照組和Lenti-GFP組顯著升高。3.Lenti-Ngb-GFP感染組從第六天起細(xì)胞增值速度明顯快于其他組(P0.01)。在相同環(huán)境培養(yǎng)14天后,慢病毒感染組和對(duì)照組在克隆數(shù)量上未見差異。然而Lenti-Ngb-GFP組形成的細(xì)胞克隆平均大于Lenti-GFP組和對(duì)照組(P0.05)。結(jié)論1.通過(guò)RT-PCR、細(xì)胞免疫熒光的方法證實(shí)Ngb在多種腦腫瘤細(xì)胞系中存在表達(dá)。2.通過(guò)使用Lenti-Ngb-GFP感染N2a細(xì)胞,成功上調(diào)了N2a細(xì)胞內(nèi)Ngb的表達(dá)。3.通過(guò)細(xì)胞增殖試驗(yàn)和平板克隆形成試驗(yàn),證實(shí)Ngb表達(dá)上調(diào)可以加速腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：腦紅蛋白 腦腫瘤 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-25
• 1. 主要實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器12-15
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑12-13
• 1.2 主要儀器設(shè)備13-14
• 1.3 常用試劑配制14-15
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法15-24
• 3. 統(tǒng)計(jì)方法及數(shù)據(jù)庫(kù)24
• 4. 數(shù)據(jù)庫(kù)24-25
• 結(jié)果25-31
• 1. Ngb在多種腫瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況25-26
• 2. 慢病毒感染N2a情況26-28
• 3. Ngb表達(dá)對(duì)N2a細(xì)胞生長(zhǎng)的影響28-31
• 討論31-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 綜述39-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 致謝47

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