本文關(guān)鍵詞：Endothelin-1誘導(dǎo)獼猴局部腦缺血模型的建立及缺血損傷灶周圍細胞學(xué)變化的初步研究

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【摘要】：[目的]中風(fēng)是世界范圍內(nèi)引起死亡的最常見的原因之一,而腦缺血疾病約占中風(fēng)的70%-90%,其死亡率和致殘率均較高。建立成功率高、可重復(fù)性好、梗死部位及面積穩(wěn)定,且能較好的模擬人類腦缺血實際情況的實驗動物模型,是研究其病理生理及防治方法的重要手段。Endothelin-1(內(nèi)皮素-1,ET-1)在國外已被廣泛應(yīng)用于嚙齒類動物腦缺血模型的研究,但在靈長類動物上應(yīng)用的報道較少,而國內(nèi)被用于腦缺血模型的研究甚少。腦缺血后神經(jīng)元的死亡及伴隨的反應(yīng)性的膠質(zhì)細胞增生和瘢痕形成,在現(xiàn)有的治療方法下很難被逆轉(zhuǎn)。2014年陳功等通過一種神經(jīng)轉(zhuǎn)錄因子(NeuroDl)把小鼠腦損傷后激活的星形膠質(zhì)細胞直接重編程轉(zhuǎn)化為具有功能的神經(jīng)元,為腦損傷治療方面的研究提供了新的思路。本實驗首次通過ET-1誘導(dǎo)建立獼猴局部腦缺血模型,并初步研究獼猴腦缺血后缺血灶周圍細胞學(xué)的變化規(guī)律。為以后獼猴局部腦缺血模型中激活的星形膠質(zhì)細胞向神經(jīng)元轉(zhuǎn)化的研究,提供初步的參考。[方法]1.本實驗歷經(jīng)兩次,第一次實驗為摸索實驗,取2只殘疾獼猴(均為雄性),第二次實驗取3只殘疾獼猴(2只雄性,1只雌性),殘疾獼猴選取標準：全身無肉眼可見畸形或者全身僅有部分肢體的部分關(guān)節(jié)畸形,但頭面部正常無畸形。限于樣本數(shù),采用獼猴左右大腦半球?qū)φ?實驗側(cè)采用ET-1皮質(zhì)內(nèi)注射誘導(dǎo)局部腦缺血模型,對照側(cè)采用生理鹽水注射,方法同實驗組。第一次實驗實驗組ET-1劑量分別0.2ug/10u1、lug/10u1、5ug/10ul,第二次實驗為2.5ug/10ul、5ug/10u1、10ug/10ul。兩次實驗實驗組及對照組溶劑均為10u1生理鹽水。2.第一次實驗獼猴于損傷后1周(W)、2W、3W、4W進行腦組織多聚甲醛灌注取材,第二次實驗為損傷后2W、4W、6W、8W取材,后均做免疫組化,行NEUN, GFAP及IBA1熒光染色,分析實驗組及對照組損傷灶周圍神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞及小膠質(zhì)細胞的變化規(guī)律,其中第二次實驗各獼猴另加做尼式染色分析其神經(jīng)元損傷范圍。[結(jié)果]1. Endothelin-1注射之后相比生理鹽水對照組產(chǎn)生了更大范圍的神經(jīng)元損傷,而且造成的缺血損傷灶位置固定,為圍繞注藥針道的區(qū)域,不同時間段5ug/10ulET-1注藥針道外神經(jīng)元損傷范圍較穩(wěn)定,約針道外1500um。2.缺血灶周圍細胞學(xué)的變化規(guī)律：時間關(guān)系：ET-1劑量為2.5ug時星形膠質(zhì)細胞激活上升的過程在時間上至少持續(xù)了28d,而下降則最遲出現(xiàn)在56d,最高峰出現(xiàn)在28d和42d或者42d和56d之間,小膠質(zhì)細胞的激活程度：28d42d56d,高峰可能在28d之前或者28d和42d之間。劑量為5ug時星形膠質(zhì)細胞激活19d到33d是一個上升的過程,最高峰應(yīng)在33d之后,小膠質(zhì)細胞的激活程度：19d33d,高峰可能在19d之前或19d和33d之間。劑量為10ug時星形膠質(zhì)細胞激活15d到29d是一個上升的過程,最高峰在29d之后,小膠質(zhì)細胞的激活程度：15d29d,高峰可能在15d之前或15d和29d之間。每個劑量下GFAP+星形膠質(zhì)細胞和IBA1+小膠質(zhì)細胞激活的高峰對比,IBA1+小膠質(zhì)細胞的高峰出現(xiàn)的均早�？臻g關(guān)系：各ET-1劑量、每個時間點針道附近和往外500um相北,GFAP+星形膠質(zhì)細胞及IBAI+小膠質(zhì)細胞的增殖程度及NEUN+神經(jīng)元損傷程度是遞減的,直至正常區(qū)域。劑量關(guān)系：假設(shè)三個時間段內(nèi)(15d-19d,29d-33d,28d-29d),由于時間相差很近,激活的星形膠質(zhì)細胞及小膠質(zhì)細胞的程度變化不大。那么每個時間段,ET-1低劑量下IBA1+小膠質(zhì)細胞的增殖的形態(tài)及數(shù)量均較高劑量嚴重。尼氏染色下隨著隨著ET-1劑量的增加,神經(jīng)元損傷范圍有增加的趨勢。[結(jié)論]1. Endothelin-1皮質(zhì)內(nèi)注射誘導(dǎo)獼猴局部腦缺血模型,是一種創(chuàng)傷小、易定位、可重復(fù)、操作簡單的、較理想的獼猴局部腦缺血模型。2.此模型缺血損傷灶周圍GFAP+星形膠質(zhì)細胞及IBA1+小膠質(zhì)細胞變化具有時間和空間上的依賴性。3.推測隨著ET-1劑量的加大,可能會導(dǎo)致神經(jīng)元損傷范圍的增加,以及相同時間點上缺血損傷灶中心處IBA1+小膠質(zhì)細胞及GFAP+星形膠質(zhì)細胞的增殖程度降低。
【關(guān)鍵詞】：Endothelin-1 局部腦缺血 獼猴 星形膠質(zhì)細胞 神經(jīng)元小膠質(zhì)細胞
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-20
• 材料與方法20-29
• 結(jié)果29-46
• 討論46-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-58
• 綜述58-66
• 參考文獻62-66
• 碩士期間發(fā)表文章66-67
• 致謝67

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 吳兆蘇,姚崇華,趙冬;我國人群腦卒中發(fā)病率、死亡率的流行病學(xué)研究[J];中華流行病學(xué)雜志;2003年03期

2 王忠誠,程學(xué)銘,李世綽,王文志,吳升平,王可嘉,周樹舜,趙馥,戴欽舜,宋家仁,蔡琰;中國六城市居民神經(jīng)系統(tǒng)疾病的流行病學(xué)調(diào)查[J];中華神經(jīng)外科雜志;1985年01期

3 欒國明，王忠誠，戴建平，周榮，孫波，李桂林，張萍，，梁順起，閆麗;猴急性腦缺血行動脈血靜脈竇逆行灌注治療的實驗研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;1995年06期

本文編號：710159