發(fā)布時(shí)間：2017-08-15 03:10

  本文關(guān)鍵詞：UGT1A6單核苷酸多態(tài)性與缺血性卒中患者阿司匹林低反應(yīng)性的關(guān)聯(lián)性研究

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【摘要】：腦卒中是全球最常見的慢性疾病之一,其高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率、高復(fù)發(fā)率的特點(diǎn),不僅損害患者身心健康和生活質(zhì)量,而且給家庭和社會(huì)帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。通過全社會(huì)的積極干預(yù),全球范圍內(nèi)的卒中死亡率在過去幾十年已有下降趨勢,但是對(duì)于中國這樣的發(fā)展中國家,卒中患病率、死亡率仍居高不下。最新的“全球疾病負(fù)擔(dān)報(bào)告2013”顯示,卒中已成為我國居民第一死亡原因和第一致殘?jiān)�。中國已成為名副其�?shí)的世界第一卒中大國,由于缺血性卒中是腦卒中最常見的類型,因此缺血性卒中的防治工作尤為重要。阿司匹林(aspirin)又名乙酰水楊酸(acetylsalicylic acid, ASA),其使用歷史已經(jīng)有數(shù)千年,早在希波克拉底時(shí)代就有記載,當(dāng)時(shí)的人們使用柳樹皮來解熱鎮(zhèn)痛。1800年人們從柳樹皮中提煉出其具有解熱鎮(zhèn)痛作用的有效成分——水楊酸(salicylic acid, SA)。為了減輕胃腸道副作用,無數(shù)化學(xué)家努力鉆研,直到1898年德國化學(xué)家Felix Hoffman才成功合成了較為純凈的且對(duì)胃腸道副作用較小的乙酰水楊酸,1899年德國拜耳公司正式生產(chǎn)該藥,并命名為阿司匹林。阿司匹林應(yīng)用于臨床也有數(shù)百年歷史,它不僅具有解熱鎮(zhèn)痛、消炎、抗風(fēng)濕等功效,還能防止血栓形成和抗惡性腫瘤等。但是早期,人們主要運(yùn)用其消炎、解熱、鎮(zhèn)痛的功效,直到1971年英國藥理學(xué)家John Vane發(fā)現(xiàn)阿司匹林可以抑制環(huán)氧合酶(cyclooxygenase, COX),進(jìn)而抑制血栓烷素A2(thromboxane A2, TXA2)及前列腺素(prostaglandin, PGs)的生成,發(fā)揮抗血小板聚集及止痛抗炎的功效。1980年,美國食品及藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)阿司匹林用于卒中患者的二級(jí)預(yù)防。從此,阿司匹林被廣泛用于缺血性心腦血管疾病的防治中。阿司匹林是目前全球應(yīng)用最廣泛的藥物之一,作為缺血性腦血管病一、二級(jí)預(yù)防的基石,其消費(fèi)量在國內(nèi)及全球都呈逐年上漲趨勢。阿司匹林抗血小板聚集的分子機(jī)制是不可逆的乙酰化COX-1的第529位絲氨酸,改變酶的空間構(gòu)象,使其空間位阻增大,導(dǎo)致花生四烯酸難以進(jìn)入疏水口袋發(fā)生反應(yīng),從而抑制花生四烯酸(Arachidonic acid, AA)生成具有激活血小板、促進(jìn)血小板聚集功能的TXA2。由于阿司匹林對(duì)COX-1的抑制是不可逆的,所以其抗血小板聚集功能將持續(xù)血小板約7-14天的生命周期。臨床中抗血小板聚集、預(yù)防血管內(nèi)血栓形成主要使用小劑量(75mg-100mg/日)阿司匹林。循證醫(yī)學(xué)證實(shí),阿司匹林是一種有效的缺血性卒中預(yù)防用藥,可使缺血性腦卒中的年發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)降低約25-30%。但是遵醫(yī)囑服用阿司匹林的卒中患者中仍有部分人群發(fā)生缺血性事件或血小板聚集率較高,這種現(xiàn)象被稱作“阿司匹林低反應(yīng)性”(aspirin low responsiveness, ALR)..“阿司匹林反應(yīng)性差異”(aspirin responsive variation)或“阿司匹林抵抗”(aspirin resistance, AR)。阿司匹林抵抗又分為臨床抵抗和實(shí)驗(yàn)室抵抗,主要包括：接受阿司匹林治療后仍然發(fā)生血栓事件；不能抑制通過血小板COX-1介導(dǎo)的TXA2形成過程；不能延長出血時(shí)間；體外或體內(nèi)血小板功能檢測中,不能達(dá)到預(yù)期的效果。研究顯示阿司匹林低反應(yīng)性具有重要的遺傳背景。藥物遺傳學(xué)及藥物基因組學(xué)證實(shí),遺傳背景不同的人其血小板對(duì)阿司匹林的反應(yīng)性存在明顯差異。研究顯示,阿司匹林的藥物作用酶,如環(huán)氧合酶-1、環(huán)氧合酶-2、血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受體、二磷酸腺苷受體P1Y1及P2Y12的基因多態(tài)性,可能使得某些患者或人群更容易發(fā)生阿司匹林低反應(yīng)性。但是,目前關(guān)于阿司匹林代謝酶的基因多態(tài)性與阿司匹林低反應(yīng)性之間的關(guān)聯(lián)性研究甚少。肝臟內(nèi)存在眾多藥物代謝酶,包括催化氧化、還原、水解的Ⅰ相代謝酶,和催化各種結(jié)合反應(yīng)的Ⅱ相代謝酶,結(jié)合反應(yīng)主要包括乙�；�,甲基化、硫酸化,葡萄糖醛酸化等。Ⅱ相生物轉(zhuǎn)化是將藥物或Ⅰ相代謝產(chǎn)物的極性基團(tuán)與內(nèi)源性物質(zhì)結(jié)合,生成的極性增加、活性降低、易于排出的結(jié)合物。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶(uridine diphosphate glucuronosyltransferase enzymes, UGTs),是最重要Ⅱ相藥物代謝酶,它可以催化多種藥物與尿苷二磷酸葡萄糖醛酸(Uridine diphosphoglucuronic acid, UDPGA)結(jié)合,使UDPGA上的葡萄糖醛酸基(GA)與藥物結(jié)構(gòu)中的功能基團(tuán)結(jié)合,生成含葡萄糖醛酸基的結(jié)合物。UGT所催化的葡萄糖醛酸結(jié)合反應(yīng)受到亞族酶的表達(dá)水平和功能狀態(tài)的雙重調(diào)節(jié),其單核苷酸多態(tài)性可能改變酶的表達(dá)和活性。UGT是一個(gè)高度固定化的微粒體酶系,是一個(gè)龐大的超家族,目前共發(fā)現(xiàn)35種以上葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶,人類目前至少發(fā)現(xiàn)19種。其中,UGT1A6主要催化阿司匹林代謝,代謝產(chǎn)物為水楊尿酸(salicyluric acid, SUA)和葡萄糖醛酸基的結(jié)合物(salicylic acid phenolic glucuronide, SAPG). UGT1A6的多態(tài)性位點(diǎn)可能導(dǎo)致阿司匹林藥物代謝率變化以及治療效果發(fā)生變化。Nagar S等發(fā)現(xiàn)rs6759892,rs2070959,rs1105879以及其單倍體型UGT1A6*2可能影響UGT1A6酶活性。另外兩個(gè)研究表明,JGT1A6*2個(gè)體的酶活性較野生型個(gè)體低,導(dǎo)致阿司匹林醛酸化率降低。表明UGT1A6基因單核苷酸多態(tài)性可能影響阿司匹林代謝水平,但目前尚無關(guān)于UGT1A6單核苷酸多態(tài)性與阿司匹林低反應(yīng)性的關(guān)聯(lián)性研究。我們猜想,如果篩選出與阿司匹林低反應(yīng)性相關(guān)的這些多態(tài)性位點(diǎn),那么利用基因檢測初步篩選出攜帶易感基因的人群,通過改變他們抗血小板藥物、聯(lián)合用藥、改變藥物劑量等制定個(gè)體化的抗血小板治療方案,以降低阿司匹林低反應(yīng)性所引起的再發(fā)缺血性腦卒中或腦出血等并發(fā)癥,并提高抗血小板治療的效果,改善患者預(yù)后。研究目的：UGT1A6是催化阿司匹林醛酸化的最主要的Ⅱ相藥物代謝酶。其基因UGT1A6的多態(tài)性在阿司匹林代謝中扮演著重要角色。但是截至目前,鮮有研究關(guān)注UGT1A6單核苷酸多態(tài)性與個(gè)體間阿司匹林反應(yīng)性差異的相關(guān)性。我們?cè)O(shè)計(jì)此研究想要明確UGT1A6基因單核苷酸多態(tài)性與中國漢族缺血性腦卒中患者阿司匹林低反應(yīng)性之間是否存在相關(guān)性。研究方法：本研究選擇了從2011年9月到2014年10月在南京卒中注冊(cè)系統(tǒng)注冊(cè)的缺血性卒中患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：首發(fā)缺血性卒中患者；漢族,年齡大于等于18歲；在卒中發(fā)作后48小時(shí)內(nèi)服用過阿司匹林；患者在血栓彈力圖測量血小板功能之前,至少規(guī)律服用阿司匹林(100mg/d)7天；同意入組研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：同時(shí)應(yīng)用華法林、肝素或其它抗凝藥物的患者；長期服用(大于3次／周)其它非甾體類抗炎藥(NSAIDs)的患者；存在嚴(yán)重肝臟疾病和(或)腎臟疾病的患者：有惡性腫瘤患者。本研究經(jīng)南京軍區(qū)總醫(yī)院倫理委員會(huì)認(rèn)可,所有參與者均簽署知情同意書。入院時(shí)收集并記錄所有患者的基本信息：年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、收縮壓、舒張壓、入院NIHSS評(píng)分及出院mRS評(píng)分。臨床資料：高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒情況。入院后第二天清晨空腹抽取外周靜脈血,檢測血液指標(biāo)并留存提取DNA的血樣。患者入院后規(guī)律服用阿司匹林(100mg/d)7天,使用TEG血小板圖系統(tǒng)(TEG 5000, Haemonetics公司,馬薩諸塞州,美國),檢測血小板功能,即花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板抑制率(AA%)。基因分型采用iLMDR技術(shù),由上海天昊生物科技有限公司提供技術(shù)支持。設(shè)立空白對(duì)照樣本和10%重復(fù)樣本以評(píng)估分型結(jié)果的可靠性。數(shù)據(jù)通過SPSS 19.0 (Armonk, NY:IBM Crop.)進(jìn)行處理,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。連續(xù)資料用χ±s或中位數(shù)及四分位間距(inter quartile range, IQR)表示,組間比較采用t檢驗(yàn)或Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析；分類資料以頻數(shù)和率表示,組間比較采用x2檢驗(yàn)。采用goodness-of-fit x-檢驗(yàn)比較多態(tài)性位點(diǎn)基因型分布頻率,以判斷Hardy-Weinberg平衡吻合度。3個(gè)單核苷酸多態(tài)性間的連鎖不平衡(linkage disequilibrium, LD)采用Haploview4.2軟件(http://www.broad,mit.edu/mpg/haploview/)進(jìn)行分析。采用廣義線性模型分析多態(tài)性位點(diǎn)與阿司匹林反應(yīng)性之間的相關(guān)性,各位點(diǎn)分別按顯性、隱性、加性遺傳模型分別分析。在廣義線性模型分析中,血小板抑制率(AA%)為因變量,吸煙、收縮壓、總膽固醇作為廣義線性模型的調(diào)節(jié)變量。單倍體型分析采用的是PHASE 2.1軟件。研究結(jié)果：本研究共納入323例缺血性卒中患者,其中253(78.3%)例為男性；年齡的中位數(shù)四分位間距為63.0(55.0-70.0)歲；其中255(78.9%)例患者有高血壓；105(32.5%)例患者患有糖尿�。�151(46.7%)例患者吸煙。本研究3個(gè)位點(diǎn)基因型頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。其最小等位基因頻率(MAF)分別為：rs6759892(25.7%),rs2070959(23.1%),rs1105879(25.7%)。本研究三個(gè)SNP最小等位基因頻率與人類基因組單倍體型圖(HapMap)數(shù)據(jù)庫(http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/)相符。中國北京漢族人群各位點(diǎn)的最小等位基因頻率相近,CHB-MAF分別為rs6759892(26.3%),rs2070959(24.6%),rs1105879(26.3%)。廣義線性模型分析發(fā)現(xiàn),rs2070959的顯性模型(β=0.084±0.032,P=0.010)和加性模型(β=0.060±0.028,P=0.033)都與血小板抑制率呈顯著的正相關(guān)。男性患者中也呈現(xiàn)了這種相關(guān)性,顯性模型(β=0.098±0.036,P=0.006),加性模型(β=0.072±0.031,P=0.024)。當(dāng)用進(jìn)一步用Bonferroni校正進(jìn)行多重比較后,rs2070959的顯性模型仍然與阿司匹林反應(yīng)性顯著相關(guān),所有患者的校正后P值,P校正=0.029,男性患者的校正后P值,P校正=0.019。但是在女性患者中,未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)(β=0.040±0.075,P=0.597)。這些結(jié)果表明,SNPrs2070959基因型為GA和GG的患者可能比基因型為AA的患者對(duì)阿司匹林更敏感,尤其是在男性患者中。結(jié)論：SNP位點(diǎn)rs20709595的突變等位基因G與所有患者的阿司匹林反應(yīng)性相關(guān),這種關(guān)系在男性患者中尤其顯著。而SNP位點(diǎn)rs6759892、rs1105879僅在男性患者中觀察到了相關(guān)性。因此檢測與阿司匹林代謝相關(guān)的基因或?qū)嶒?yàn)室檢測血小板功能可能有利于臨床醫(yī)師為缺血性卒中患者制定個(gè)體化抗血小板治療方案。
【關(guān)鍵詞】：缺血性腦卒中 阿司匹林低反應(yīng)性 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要3-8
• ABSTRACT8-13
• 前言13-27
• 參考文獻(xiàn)23-27
• 1.1 引言27-29
• 1.2 研究對(duì)象與方法29-31
• 1.3 全基因組DNA的提取和基因型的檢測31-34
• 1.4 血小板功能測定34-37
• 1.5 統(tǒng)計(jì)分析37
• 1.6 結(jié)果37-40
• 1.7 討論40-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 綜述45-55
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 附錄/縮略詞表55-56
• 碩士在讀期間成果56-57
• 致謝57-58

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1 顧健騰,陶國才,魯開智,文欣榮;無肝期大鼠小腸異丙酚代謝相關(guān)UGT1A6的基因表達(dá)變化[J];重慶醫(yī)學(xué);2005年09期

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1 劉柯婷;UGT1A6單核苷酸多態(tài)性與缺血性卒中患者阿司匹林低反應(yīng)性的關(guān)聯(lián)性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：675970