本文關(guān)鍵詞：嘌呤能受體P2Y12基因?qū)AE發(fā)病的影響及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： P2Y12 EAE CD4~+T細(xì)胞 樹(shù)突狀細(xì)胞

【摘要】：自身免疫性疾病(Autoimmune disease, AID)是指機(jī)體由于異常識(shí)別自身組織抗原而發(fā)動(dòng)免疫攻擊,致使正常組織發(fā)生損傷或病變的一類疾病。多發(fā)性硬化癥(Multiple Sclerosis, MS)是一種重要的自身免疫性疾病,主要由CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)、以脊髓和腦兩大神經(jīng)中樞系統(tǒng)的軸突脫髓鞘為主要特征的神經(jīng)退行性疾病。雖然對(duì)MS開(kāi)展了很多的研究,但是其發(fā)病機(jī)理一直是人們迫切期望解答的重要問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE)是在基礎(chǔ)研究中廣泛使用的經(jīng)典小鼠模型,很好地模擬了MS病人的臨床表型和病理特征,具有方法成熟、臨床表型明顯和評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化等優(yōu)點(diǎn)。P2Y12受體屬于嘌呤類P2Y受體家族的一員,由于其在血小板上的重要作用而受到廣泛關(guān)注。同時(shí),P2Y12受體是擁有七次跨膜結(jié)構(gòu)的G蛋白偶聯(lián)受體(G Protein-Coupled Receptors, GPCR)。GPCR受體參與調(diào)控機(jī)體多種生物學(xué)功能,并參與下游多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。已有實(shí)驗(yàn)證明P2Y12受體基因在MS發(fā)病患者上表達(dá)發(fā)生改變,但該基因是否與MS的發(fā)病具有相關(guān)性尚不明確。因此本課題主要利用P2Y12受體基因敲除小鼠構(gòu)建EAE模型,探討P2Y12受體與MS/EAE發(fā)病之間的關(guān)系。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)P2Y12基因在EAE發(fā)病小鼠脾臟中的表達(dá)水平明顯低未發(fā)病小鼠。通過(guò)構(gòu)建野生型和敲除型小鼠EAE模型,發(fā)現(xiàn)從臨床評(píng)分、病理表型和CD4+T細(xì)胞亞群等指標(biāo)上看,相比于野生型小鼠,P2Y12基因敲除后EAE發(fā)病都更為嚴(yán)重。由于EAE主要是由CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病,于是我們體外分離了野生型和敲除型小鼠脾臟中的naive CD4+ T細(xì)胞,結(jié)果表明P2Y12缺失并不影響CD4+T細(xì)胞的體外分化和增殖活化。為了進(jìn)一步探討P2Y12影響EAE的發(fā)病機(jī)制,我們?cè)隗w外誘導(dǎo)了骨髓來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞(BMDC),對(duì)DC細(xì)胞因子的分泌、表面分子的表達(dá)和Th細(xì)胞誘導(dǎo)等方面進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,相比于野生型DC,P2Y12基因缺失DC可以分泌更多的TGF-β和IL-23p19,同時(shí)DC表面分子CD40、CD86和MHCⅡ類分子表達(dá)也明顯升高。從流式染色結(jié)果看出,P2Y12基因缺失DC的培養(yǎng)上清會(huì)促進(jìn)naive CD4+ T細(xì)胞向Th17方向進(jìn)行分化。綜上所述,P2Y12基因缺失使DC的功能發(fā)生異常,改變EAE小鼠體內(nèi)CD4+T細(xì)胞亞群的比例,加劇EAE小鼠發(fā)病進(jìn)程。該研究提示我們P2Y12可能是EAE治療的一個(gè)潛在靶標(biāo),同時(shí)也為臨床上P2Y12抑制劑的使用提供了相應(yīng)的指導(dǎo)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：P2Y12 EAE CD4~+T細(xì)胞 樹(shù)突狀細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R744.51
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 第一章 前言12-21
• 1. 自身免疫性疾病12-15
• 1.1 概述12-13
• 1.2 自身免疫性疾病的決定因素13-15
• 2. 免疫細(xì)胞15-17
• 2.1 免疫異常與AID的關(guān)系15-16
• 2.2 多發(fā)性硬化癥中的免疫細(xì)胞16-17
• 3. 嘌呤類受體17-18
• 3.1 概述17-18
• 3.2 嘌呤受體與MS的關(guān)系18
• 4. 樹(shù)突狀細(xì)胞18-20
• 4.1 樹(shù)突狀細(xì)胞與EAE19
• 4.2 樹(shù)突狀細(xì)胞與銀屑病19-20
• 4.3 樹(shù)突狀細(xì)胞與Ⅰ型糖尿病20
• 4.4 樹(shù)突狀細(xì)胞和系統(tǒng)性紅斑狼瘡20
• 結(jié)語(yǔ)20-21
• 第二章 P2Y12基因?qū)AE小鼠發(fā)病影響的研究21-38
• 引言21-22
• 材料22-25
• 1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22
• 2. 主要試劑22-23
• 3. 實(shí)驗(yàn)器材23
• 4. 主要儀器23
• 5. 試劑配制23-25
• 方法25-32
• 1. P2Y12基因敲除小鼠繁殖與鑒定25-27
• 2. EAE動(dòng)物模型的構(gòu)建及評(píng)分27
• 3. 小鼠脊髓組織取材以及病理染色27-30
• 4. 脾淋巴細(xì)胞的分離與流式檢測(cè)30
• 5. 小鼠血清分離和細(xì)胞因子ELISA檢測(cè)30-32
• 結(jié)果32-36
• 1. P2Y12基因在EAE小鼠中表達(dá)水平的檢測(cè)32
• 2. P2Y12基因敲除EAE小鼠的臨床評(píng)分32-33
• 3. P2Y12基因敲除EAE小鼠的病理學(xué)分析33-34
• 4. P2Y12基因敲除EAE小鼠脾細(xì)胞亞群的檢測(cè)34-35
• 5. P2Y12基因敲除EAE小鼠血清中細(xì)胞因子表達(dá)的檢測(cè)35-36
• 討論36-38
• 第三章 P2Y12基因?qū)D4~+T細(xì)胞功能影響的研究38-51
• 引言38
• 材料38-41
• 1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物38-39
• 2. 主要試劑39
• 3. 實(shí)驗(yàn)器材39
• 4. 主要儀器39
• 5. 試劑配制39-41
• 方法41-44
• 1. 脾臟中T細(xì)胞及其亞群的檢測(cè)41-42
• 2. Naive CD4~+T細(xì)胞分選及體外分化42-43
• 3. Naive CD4~+T細(xì)胞體外增殖43-44
• 結(jié)果44-49
• 1. P2Y12基因缺失小鼠的T細(xì)胞亞群檢測(cè)44-47
• 2. P2Y12基因缺失對(duì)CD4~+T細(xì)胞體外分化的影響47-48
• 3. P2Y12基因缺失對(duì)CD4~+T細(xì)胞增殖能力的影響48-49
• 討論49-51
• 第四章 P2Y12基因?qū)?shù)突狀細(xì)胞功能影響的研究51-64
• 引言51-52
• 材料52-53
• 1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物52
• 2. 主要試劑52
• 3. 實(shí)驗(yàn)器材52
• 4. 主要儀器52-53
• 5. 試劑配制53
• 方法53-58
• 1. 小鼠骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞(BMDCs)的制備和純度檢測(cè)53-54
• 2. BMDC細(xì)胞因子表達(dá)水平的檢測(cè)54-57
• 3. BMDC表面分子的檢測(cè)57
• 4. BMDC培養(yǎng)上清和CD4~+T細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)57-58
• 結(jié)果58-62
• 1. 骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞BMDC純度的檢測(cè)58
• 2. P2Y12基因缺失對(duì)DC表面分子表達(dá)的影響58-59
• 3. P2Y12基因缺失對(duì)DC細(xì)胞因子表達(dá)的影響59-60
• 4. P2Y12基因缺失對(duì)DC誘導(dǎo)的CD4~+T細(xì)胞分化的影響60-62
• 討論62-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-77
• 綜述77-88
• 參考文獻(xiàn)83-88
• 致謝88

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 孔令平,劉妍,黃志勤;樹(shù)突狀細(xì)胞的特性與分化發(fā)育[J];贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年02期

2 趙謹(jǐn) ,王心;樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells)[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2005年06期

3 張臨友,郭松,楊寶峰;激素與樹(shù)突狀細(xì)胞[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(移植與血液凈化分冊(cè));2005年05期

4 吳萍萍;杜曉英;劉書遜;陳榮軍;壽張飛;陳江華;;不同來(lái)源人樹(shù)突狀細(xì)胞的培養(yǎng)誘導(dǎo)及鑒定[J];浙江醫(yī)學(xué);2007年09期

5 ;封面圖片——樹(shù)突狀細(xì)胞[J];中國(guó)廠礦醫(yī)學(xué);2009年04期

6 張錦X,陳海濱,謝慶東,王駿;人血樹(shù)突狀細(xì)胞形成細(xì)胞簇功能的體外觀察[J];解剖學(xué)雜志;1997年02期

7 曹華,張銳,裴雪濤;樹(shù)突狀細(xì)胞的生物學(xué)特性及臨床應(yīng)用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2000年06期

8 王黎明,劉艷榮,李金蘭,常艷,付家瑜,高暉,陳珊珊;人慢性粒細(xì)胞白血病樹(shù)突狀細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2000年05期

9 夏青,張學(xué)軍;真皮樹(shù)突狀細(xì)胞與皮膚病[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊(cè);2000年02期

10 劉青,金巖,吳織芬;樹(shù)突狀細(xì)胞與口腔疾病[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2000年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔣應(yīng)明;萬(wàn)濤;陳國(guó)友;夏大靜;周向陽(yáng);修方明;張意;曹雪濤;;樹(shù)突狀細(xì)胞來(lái)源的鈣粘著相關(guān)蛋白新基因的克隆、表達(dá)及功能研究[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

2 王勝軍;王麗莉;李堅(jiān);許化溪;;肺癌患者胸水中樹(shù)突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)和初步鑒定[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

3 徐克成;牛立志;郭子倩;張德春;左建生;;樹(shù)突狀細(xì)胞及其在癌腫治療中應(yīng)用[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2003年

4 何廣勝;邵宗鴻;和虹;劉鴻;施白;潔均;曹燕然;Q，

本文編號(hào)：660661