本文關(guān)鍵詞：肥胖對(duì)海人酸誘導(dǎo)小鼠顳葉癲癇的影響及機(jī)制的初步研究

  更多相關(guān)文章： 肥胖 顳葉癲癇 瘦素 神經(jīng)元 星形膠質(zhì)細(xì)胞

【摘要】：背景：肥胖(obesity)是引起糖尿病、心血管疾病、肝癌和中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷等一系列人類疾病的危險(xiǎn)因素。流行病學(xué)調(diào)查表明未經(jīng)治療的癲癇患者中超重和肥胖者患難治性癲癇比率要比正常體質(zhì)量者高；超重和肥胖者患難治性癲癇比率高于非難治性癲癇比率。癲癇(epilepsy)是神經(jīng)元自發(fā)反復(fù)超同步放電引起機(jī)體抽搐的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性疾病,發(fā)病率高,嚴(yán)重影響患者和家庭的生活工作。顳葉癲癇(temporal lobe epilepsy, TLE)占到癲癇患者的30-40%,其中30%以上會(huì)發(fā)展為難治性癲癇(refractory epilepsy)。肥胖在顳葉癲癇的發(fā)生發(fā)展中作用有待進(jìn)一步研究。瘦素(leptin)不僅是重要的能量平衡因子,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中也扮演重要角色,肥胖引起瘦素水平的升高,進(jìn)而影響顳葉癲癇相關(guān)病理的改變,可能是肥胖影響顳葉癲癇的潛在機(jī)制。方法：首先,將4-5周齡C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為高脂飼料喂養(yǎng)組和標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)組,每周進(jìn)行體質(zhì)量稱量,喂養(yǎng)12周后,體質(zhì)量和血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)顯示小鼠肥胖模型建立成功。在此基礎(chǔ)上右側(cè)海馬微量注射海人酸(kainic acid,KA)誘導(dǎo)顳葉癲癇小鼠模型,將正常體質(zhì)量小鼠分為注射Saline組(CS組)、注射KA組(CK組)、leptin預(yù)處理組(Lep+CK組)、Nanobody(leptin受體拮抗劑)預(yù)處理組(Nanobody+Lep+CK組)、AG490(JAK2/STAT3信號(hào)通路阻斷劑)預(yù)處理組(AG490+Lep+CK組)；將肥胖小鼠分為注射Saline組(OS組)、注射KA組(OK組)、Nanobody預(yù)處理組(Nanobody+OK組)、leptin預(yù)處理組(Lep+OK組)、AG490預(yù)處理組(AG490+Lep+OK組)。觀察小鼠行為學(xué)、損傷相關(guān)的血清指標(biāo)和右側(cè)海馬病理損傷。結(jié)果：第一部分：1高脂飲食誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠肥胖模型構(gòu)建成功相比于標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)的小鼠,高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠體內(nèi)脂肪量、血清甘油三脂、膽固醇和脂肪酸含量明顯升高(p0.05),體質(zhì)量增加20%以上。2 肥胖加重了海人酸誘導(dǎo)的小鼠顳葉癲癇1)右側(cè)海馬微量注射200 ng KA后,肥胖小鼠存活率為25%,而正常小鼠存活率100%,差異顯著(p0.05)。2)右側(cè)海馬微量注射100 ng KA后,OK組小鼠存活率低,OK組小鼠Racine score (4.6)顯著增加,與CK組小鼠(3.2)相比差異顯著(p0.05),(≥3分,TLE模型構(gòu)建成功)。3)海人酸注射后,小鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脫氫酶(LDH)顯著升高(p0.05),OK組小鼠血清CK-MB和LDH濃度高于CK小鼠,但差異不顯著(p0.05)。4)OK組小鼠海馬神經(jīng)元的丟失、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)和S-100β的表達(dá)都高于正常小鼠,肥胖加重了海人酸誘導(dǎo)的海馬病理損傷。第二部分：1肥胖加重小鼠顳葉癲癇的重要因素可能是其高瘦素水平1)外源性瘦素增加了正常小鼠TLE的Racine score評(píng)分,加重了海馬神經(jīng)元的丟失,過度激活了星形膠質(zhì)細(xì)胞和促進(jìn)了S-100p的表達(dá),Nanobody預(yù)處理逆轉(zhuǎn)了外源性瘦素對(duì)正常小鼠TLE的影響。2)肥胖小鼠血清瘦素水平是正常小鼠的2倍以上,差異顯著(p0.05),且未發(fā)生瘦素耐受。在海人酸誘導(dǎo)前,Nanobody預(yù)處理阻斷了內(nèi)源性瘦素的作用,逆轉(zhuǎn)了肥胖引起小鼠Racine score評(píng)分的增加、星形膠質(zhì)細(xì)胞的過度活化和S-100β表達(dá)的升高。另外,外源性瘦素增加了肥胖小鼠TLE的Racine score評(píng)分,過度激活了星形膠質(zhì)細(xì)胞和促進(jìn)S-100β的表達(dá)。2 leptin-JAK2/STAT3信號(hào)通路的活化可能是星形膠質(zhì)細(xì)胞過度活化的潛在機(jī)制外源性瘦素增加了正常小鼠和肥胖小鼠TLE海馬p-STAT3和GFAP的表達(dá)而AG490預(yù)處理,小鼠TLE海馬P-STAT3和GFAP的表達(dá)降低,逆轉(zhuǎn)了外源性瘦素的作用。結(jié)論：高脂飲食誘導(dǎo)的C57BL/6J肥胖小鼠血清瘦素水平明顯升高；肥胖加重了海人酸誘導(dǎo)的小鼠顳葉癲癇的海馬損傷；肥胖引起的高瘦素水平可能是肥胖加重小鼠顳葉癲癇的損傷重要因素；Leptin-JAK2/STAT3信號(hào)通路過度激活星形膠質(zhì)細(xì)胞可能是瘦素加重顳葉癲癇小鼠的海馬損傷的潛在機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：肥胖 顳葉癲癇 瘦素 神經(jīng)元 星形膠質(zhì)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.1;R589.2
【目錄】：

• 英文縮略字表6-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-16
• 第一部分 肥胖加重海人酸誘導(dǎo)顳葉癲癇小鼠的損傷16-38
• 1 實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器16
• 1.3 主要試劑16-17
• 1.4 試劑配制17-19
• 2 方法19-27
• 2.1 高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠模型的建立19
• 2.2 葡萄糖耐量測(cè)定19
• 2.3 血清膽固醇、游離脂肪酸和甘油三脂的測(cè)定19-20
• 2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組20
• 2.5 海人酸誘導(dǎo)顳葉癲癇小鼠模型的建立20-21
• 2.6 小鼠行為學(xué)觀察21
• 2.7 血清乳酸脫氫酶和肌酸激酶同工酶濃度測(cè)定21
• 2.8 附睪脂肪墊和小鼠全腦稱重21
• 2.9 免疫化學(xué)法觀察海馬區(qū)神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞變化21-24
• 2.10 免疫熒光染色24
• 2.11 尼氏染色24
• 2.12 Western blot檢測(cè)海馬區(qū)蛋白的表達(dá)24-27
• 2.13 統(tǒng)計(jì)分析27
• 3 結(jié)果27-34
• 3.1 高脂飲食誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠肥胖模型的建立27-28
• 3.2 海人酸誘導(dǎo)顳葉癲癇小鼠模型的建立28-30
• 3.3 肥胖加重海人酸誘導(dǎo)的小鼠顳葉癲癇30-34
• 4 討論34-38
• 第二部分：肥胖相關(guān)因子瘦素可能加重顳葉癲癇海馬區(qū)損傷38-59
• 1 實(shí)驗(yàn)材料38
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物38
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器38
• 1.3 主要試劑38
• 1.4 試劑配制38
• 2 方法38-41
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組38-39
• 2.2 藥物處理39
• 2.3 小鼠血清Leptin濃度測(cè)定39
• 2.4 肥胖小鼠瘦素耐受測(cè)定39-40
• 2.5 免疫熒光雙標(biāo)40
• 2.6 免疫組化、尼氏染色和Western blot40
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析40-41
• 3 結(jié)果41-55
• 3.1 高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠血清leptin濃度顯著高于正常小鼠41
• 3.2 高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠未發(fā)生leptin耐受41-42
• 3.3 Leptin受體(OB-Rb)與星形膠質(zhì)細(xì)胞共定位42-43
• 3.4 Leptin加重了海人酸誘導(dǎo)的正常小鼠顳葉癲癇43-47
• 3.5 Leptin加重海人酸誘導(dǎo)的肥胖小鼠顳葉癲癇47-51
• 3.6 Leptin下游JAK2/STAT3信號(hào)通路的激活促進(jìn)了KA誘導(dǎo)的TLE海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化51-55
• 4 討論55-59
• 參考文獻(xiàn)59-69
• 綜述69-83
• 參考文獻(xiàn)75-83
• 發(fā)表論文情況83-84
• 致謝84

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 王爭(zhēng)艷;朱長(zhǎng)庚;劉慶瑩;王偉;;L-Glu促進(jìn)純化培養(yǎng)的海馬和皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的研究[J];中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2005年06期

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本文編號(hào)：660186