本文關鍵詞：睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠學習記憶的保護作用

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【摘要】：腦衰老(Brain aging)是一種增齡性腦功能的慢性退行性病變,也是人體整體衰老的重要組成部分。臨床主要表現(xiàn)為學習記憶減退、認知功能障礙和思維紊亂等。隨著我國人口老齡化的加劇,腦衰老的發(fā)病率正在逐年上升,而且已有低齡化趨勢,這不僅影響到中老年人的生活質量,而且還給社會和家庭帶來沉重的負擔。但是有關腦衰老具體的發(fā)病機制尚不完全清楚,目前全世界尚未在治療上取得突破性的進展。因此,需要深入探尋腦衰老的發(fā)病機制和研發(fā)延緩腦衰老的有效治療方法和藥物,為臨床治療腦衰老提供有效的依據(jù)。目的：1.研究內分泌衰退對腦衰老的學習記憶障礙的影響；2.研究睪丸組織移植手術對內分泌衰退的改善作用；3.研究內分泌衰退對海馬神經元和雄激素受體信號通路的影響,以及睪丸組織移植手術的保護作用。方法：將40只昆明種雄性小鼠隨機分為四組：假手術組、去勢組、雄激素對照組(30mg/kg)和睪丸組織塊移植組。切除小鼠雙側睪丸,建立內分泌衰退小鼠模型。將睪丸組織塊植入已去勢小鼠背部皮下或皮下肌肉層,建立同種異體睪丸組織移植模型。造模后,雄激素組小鼠灌胃治療三個月,其他各組給予等量生理鹽水。治療結束后,取出移植組小鼠背部移植物進行肉眼和組織學觀察；稱量并計算小鼠性腺器官(前列腺和精囊腺)指數(shù)；ELISA法測量各組小鼠血清睪丸酮水平；Morris水迷宮觀察小鼠行為學變化；HE染色觀察海馬CA1區(qū)形態(tài)學改變；蛋白免疫印跡檢測小鼠腦內雄激素受體和凋亡相關蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9)的表達；RT-PCR法檢測小鼠腦內雄激素受體和凋亡相關基因的表達情況。結果：1.睪丸組織移植物生長狀況和形態(tài)觀察：通過肉眼觀察,發(fā)現(xiàn)睪丸組織塊與周圍組織之間建立了血管連接；顯微鏡觀察病理切片,可以發(fā)現(xiàn)移植物在形態(tài)結構和細胞組成上基本保持完整,在多個生精小管截面中可觀察到生精細胞,其中包括圓形精子細胞和長形精子細胞,但精原細胞和精母細胞很少能看到。睪丸2.間質見血竇和少量間質細胞。3.睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠性腺器官的影響：與假手術組相比,去勢組小鼠性腺器官系數(shù)明顯下降(P0.01)；與去勢組相比,移植組小鼠性腺器官系數(shù)顯著增加(P0.01)；與雄激素組相比,移植組小鼠性腺器官系數(shù)無明顯差異(P0.05)。4.睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠內分泌水平的影響：與假手術組相比,去勢組小鼠血清睪丸酮含量明顯下降(P0.01)；與去勢組相比,移植組小鼠血清睪丸酮水平顯著增加(P0.01)；與雄激素組相比,移植組小鼠血清睪丸酮含量差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠行為學的影響：與假手術組相比,去勢組小鼠的潛伏逃逸期縮短,游泳路程明顯增加,穿越平臺的次數(shù)也大幅度地下降(P0.01)；與去勢組小鼠相比,移植組小鼠潛伏逃逸期延長,游泳路程顯著降低,穿越平臺的次數(shù)也顯著性升高(P0.01)；與雄激素組相比,移植組小鼠潛伏逃逸期、游泳路程和穿越平臺的次數(shù)均無顯著差異(P0.05)。6.睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠海馬神經元形態(tài)結構的影響：從腦組織切片HE染色結果來看,假手術組海馬CA1區(qū)神經元有4～6層,排列緊密,整齊和均勻,細胞層次分明,結構完整,核大而圓,核仁清晰可見；去勢組海馬CA1區(qū)細胞排列稀疏而松散,部分區(qū)域細胞有缺失或裂縫,細胞間隙大,核固縮,只有1～2層神經元,細胞數(shù)量明顯減少；雄激素組和移植組海馬CA1區(qū)形態(tài)結構較去勢組均有好轉,神經元排列整齊有序,細胞數(shù)量明顯增多。7.睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠激素受體和凋亡相關蛋白表達的影響：與假手術組相比,去勢組小鼠Caspase-3和Caspase-9蛋白表達顯著增加,AR和Bcl-2蛋白表達顯著下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)；與去勢組相比,移植組Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表達顯著減少,AR和Bcl-2蛋白表達明顯增加,差異極顯著(P0.01)；與雄激素組相比,移植組腦內AR和凋亡相關蛋白表達均無明顯差異(P0.05)。8.睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠雄激素受體和凋亡相關基因表達的影響：與假手術組相比,去勢組小鼠AR和凋亡相關基因的mRNA表達明顯減弱,表現(xiàn)為弱條帶,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)；與去勢組相比,移植組AR和凋亡相關基因的mRNA表達明顯增強,表現(xiàn)為高亮度條帶,差異極顯著(P0.01)。與雄激素組相比,移植組腦內AR和凋亡相關基因的mRNA表達量無明顯差異(P0.05)。結論：1.切除小鼠雙側睪丸后,性腺器官指數(shù)大大下降,血清睪丸酮含量也顯著減少,證明了內分泌衰退小鼠模型建立比較成功。2.移植睪丸組織塊后,發(fā)現(xiàn)組織移植物與周圍組織建立血管聯(lián)系,病理形態(tài)保持正常,性腺器官重量明顯加重,血清睪丸酮含量大幅度上升,證明了同種異體睪丸組織移植模型建立比較成功。3.睪丸組織移植與雄激素雄激素替代療法效果相當,可以代替服用雄激素改善腦衰老引起的學習記憶障礙。4.睪丸組織移植可能是通過分泌內源性睪丸酮,結合腦內雄激素受體,調控神經元凋亡相關基因的表達,上調Bcl-2蛋白水平,降低Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表達量,抑制大腦神經元凋亡,進而改善學習記憶能力。
【關鍵詞】：腦衰老 學習記憶 睪丸組織移植 內分泌衰退癡呆型 睪丸酮
【學位授予單位】：安徽大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R741;R699.8
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-11
• 英文縮略詞表11-14
• 前言14-18
• 第一部分 同種異體睪丸組織移植術建立內分泌衰退模型的方法18-33
• 1 材料18-19
• 1.1 實驗動物18
• 1.2 藥品與試劑18-19
• 1.3 主要儀器19
• 2 方法19-25
• 2.1 試劑的配制19
• 2.2 動物模型的制備19-20
• 2.3 給藥與分組20
• 2.4 取材及樣本制備20-21
• 2.5 模型驗證21-25
• 2.6 統(tǒng)計學分析25
• 3 結果與分析25-31
• 3.1 睪丸組織移植對內分泌衰退小鼠活動狀況的影響25
• 3.2 睪丸組織移植物的生長狀況和形態(tài)觀察25-27
• 3.3 睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠性腺器官系數(shù)的影響27-28
• 3.4 睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠血清睪丸酮含量的影響28
• 3.5 睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠行為學的影響28-31
• 4 討論31-33
• 第二部分 睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠學習記憶損害的改善作用的研究33-53
• 1 材料33-35
• 1.1 實驗動物33
• 1.2 藥品與試劑33-34
• 1.3 主要儀器34-35
• 2 方法35-45
• 2.1 試劑的配制35-36
• 2.2 動物模型的制備36
• 2.3 給藥與分組36
• 2.4 取材及樣本制備36
• 2.5 HE染色觀察海馬神經元病理形態(tài)36-37
• 2.6 蛋白免疫印跡法分析雄激素受體和凋亡相關蛋白表達37-40
• 2.7 RT-PCR法檢測雄激素受體和凋亡相關基因的表達40-45
• 2.8 統(tǒng)計學分析45
• 3 結果與分析45-51
• 3.1 睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠海馬神經元的影響45-46
• 3.2 睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠激素受體和凋亡相關蛋白表達的影響46-47
• 3.3 睪丸組織移植對內分泌衰退癡呆型小鼠雄激素受體和凋亡相關基因表達的影響47-51
• 4 討論51-53
• 總結53-54
• 參考文獻54-59
• 攻讀學位期間主要成果59-60
• 致謝60-61
• 個人簡歷61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 鄭璐;邱蕾;張瑤;馮天驕;于建春;張占軍;;遠志皂苷對快速腦老化鼠學習記憶能力的改善及對神經遞質的影響[J];北京中醫(yī)藥大學學報;2010年03期

2 崔德華;田小生;王賀成;王維;肖衛(wèi)忠;樊東升;;腦衰老與阿爾茨海默病癥狀出現(xiàn)前階段[J];生物化學與生物物理進展;2012年08期

3 陳琛;李素霞;孟適秋;閆薇;孫洪強;陸林;;腦衰老相關認知損傷研究進展[J];中國老年學雜志;2015年02期

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本文編號：650970