本文關(guān)鍵詞：miR-27a作用于Wnt信號(hào)通路促進(jìn)顱咽管瘤鈣化的相關(guān)研究

  更多相關(guān)文章： 顱咽管瘤 造釉細(xì)胞型顱咽管瘤 鱗狀乳頭型顱咽管瘤 miR-27a Wnt/β-catenin信號(hào)通路 鈣化

【摘要】：研究背景及目的顱咽管瘤是由外胚葉形成的顱咽管細(xì)胞發(fā)展而來的一種常見的胚胎殘余上皮源性腫瘤,是兒童顱內(nèi)最常見的先天性腫瘤,占兒童顱內(nèi)腫瘤的12-14%,占兒童鞍區(qū)腫瘤的50%以上。顱咽管瘤最早是由奧地利的Erdheim教授于1904年首次提出其與胚胎的咽鼓管相關(guān),并將其作為一類單獨(dú)的鞍區(qū)腫瘤進(jìn)行描述。其后是1932年美國(guó)的Cushing教授在書中第一次以”顱咽管瘤”為名稱對(duì)此類腫瘤進(jìn)行了比較詳細(xì)的描述,從而確立了其命名,并一直沿用至今天。顱咽管瘤在病理組織學(xué)上屬于良性腫瘤(WHO I級(jí)),其主要的病理組織類型可分為兩種亞型：造釉細(xì)胞型顱咽管瘤(adamantinomatous craniopharyngioma ACP)和鱗狀乳頭型顱咽管瘤(papillary craniopharyngioma PCP),前者好發(fā)于兒童患者,多表現(xiàn)為囊性或者囊性為主的囊實(shí)性的病變,大多數(shù)腫瘤影像學(xué)上可見鈣化,在兒童患者中鈣化出現(xiàn)的比例甚至超過80%,術(shù)中可見腫瘤與周圍組織粘連嚴(yán)重,而后者以成人多見,實(shí)性腫瘤較多,影像學(xué)檢查罕見鈣化,與周圍重要結(jié)構(gòu)的炎性粘連也較輕,術(shù)后病理資料也證實(shí)：造釉細(xì)胞型顱咽管瘤多發(fā)生鈣化,而鱗狀乳頭型顱咽管瘤基本上不發(fā)生鈣化。在影響顱咽管瘤手術(shù)治療及預(yù)后的眾多危險(xiǎn)因素當(dāng)中,鈣化是其中較為重要的一個(gè)。目前大量臨床資料表明,顱咽管瘤的鈣化灶常常與腫瘤周圍的重要組織結(jié)構(gòu)包括垂體柄、視交叉、三腦室底等粘連緊密,手術(shù)中對(duì)其完整剝離存在一定困難,增加了腫瘤手術(shù)全切除的難度。手術(shù)治療中如果要對(duì)顱咽管瘤進(jìn)行全切除,完整剝離鈣化灶,有可能損傷周圍重要的組織結(jié)構(gòu)導(dǎo)致患者術(shù)后并發(fā)癥嚴(yán)重,嚴(yán)重影響患者的預(yù)后和生活質(zhì)量,而若不完整剝離粘連的鈣化灶,僅對(duì)腫瘤行部分切除,則大大增加了患者術(shù)后腫瘤的復(fù)發(fā)率。因此較好的全切除顱咽管瘤并盡量不損傷其周圍重要結(jié)構(gòu)一直是神經(jīng)外科醫(yī)生面臨的難題。經(jīng)典的Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路是指由Wnt信號(hào)蛋白與細(xì)胞表面Frizzled(FZD)受體家族結(jié)合而后導(dǎo)致一系列反應(yīng),其中β-連環(huán)蛋白(β-catenin)是Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵因子,β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)量最多,也可存在于細(xì)胞膜及細(xì)胞核中。當(dāng)Wnt信號(hào)通路未激活時(shí),存在于細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin與APC、AXIN、GSK-3β等蛋白因子形成的降解復(fù)合體結(jié)合在一起,β-catenin被降解復(fù)合體中的因子磷酸化。經(jīng)磷酸化后的β-catenin隨即通過啟動(dòng)的β-轉(zhuǎn)導(dǎo)重復(fù)相容蛋白(β-TrCP)介導(dǎo)泛素／蛋白酶體途徑在細(xì)胞質(zhì)中被降解。而當(dāng)Wnt信號(hào)通路被激活時(shí),β-catenin從降解復(fù)合體中逃離出來并大量在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)積聚,其中一部分可通過核膜孔進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與LFF/TCF結(jié)合,從而激活下游基因的表達(dá),在腫瘤的發(fā)生及多種生物學(xué)行為中扮演重要角色。造釉型顱咽管瘤被證實(shí)存在β-catenin基因CTNNB1的突變導(dǎo)致Wnt信號(hào)通路的激活,而在鱗狀乳頭型顱咽管瘤中不存在這種突變,Wnt信號(hào)通路的激活參與造釉型顱咽管瘤的發(fā)生,但其與腫瘤的多種表現(xiàn)包括炎癥、鈣化、囊腫形成等的關(guān)系及作用機(jī)理還不十分清楚。小RNA(microRNA,miRNA)是一類非編碼蛋白質(zhì)的單鏈小RNA分子,由大約22個(gè)核苷酸組成,在進(jìn)化過程中高度保守。miR-27是小RNA家族中功能比較顯著的一種,目前發(fā)現(xiàn)人類存在有miR-27a、miR-27b兩種亞型,大量的研究發(fā)現(xiàn)miR-27在人體多種疾病比如乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌及胃腺癌等腫瘤中的表達(dá)較正常組織顯著上調(diào),在這些疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起到重要作用,此外,miR-27在成牙質(zhì)細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化過程中的起重要作用,可以促進(jìn)牙質(zhì)和骨化的形成。并且證實(shí)miR-27在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(humanmesenchymalstemcells,hMSC)轉(zhuǎn)化為骨細(xì)胞的過程中可通過抑制Wnt信號(hào)通路中的APC基因的表達(dá),引起細(xì)胞質(zhì)內(nèi)β-catenin的大量積累而進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),激活Wnt信號(hào)通路從而影響骨細(xì)胞的分化。而下調(diào)miR-27表達(dá)可促進(jìn)β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中的降解,誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡,造成骨質(zhì)疏松。此外,miR-27也可作用于骨成型蛋白信號(hào)通路中的BMPR2基因,促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化。顱咽管瘤是起源于原始口腔外胚層形成的顱咽管殘余上皮細(xì)胞,目前組織學(xué)上認(rèn)為造釉細(xì)胞型顱咽管瘤與牙源性上皮腫瘤存在較大的相似性,并且牙源性組織所特有的釉質(zhì)蛋白在造釉細(xì)胞型顱咽管瘤中的表達(dá)也已得到確認(rèn),而在鱗狀乳頭型顱咽管瘤中則沒有發(fā)現(xiàn)表達(dá)。miR-27可作用于Wnt信號(hào)通路引起β-catenin的入核促進(jìn)牙質(zhì)的形成和骨細(xì)胞的分化,在顱咽管瘤尤其是造釉細(xì)胞型顱咽管瘤中miR-27的表達(dá)及其與Wnt信號(hào)通路的激活對(duì)顱咽管瘤鈣化形成的作用機(jī)理仍不十分明確,有待進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)。本研究主要通過檢測(cè)miR-27a和β-catenin在顱咽管瘤中的表達(dá)情況,明確Wnt信號(hào)通路的激活與鈣化的關(guān)系,并且采用上調(diào)miR-27a在顱咽管瘤細(xì)胞中表達(dá)的方法,然后檢測(cè)Wnt信號(hào)通路關(guān)鍵因子β-catenin表達(dá)的變化及鈣化相關(guān)蛋白ALP,BMP2的表達(dá)情況,尋找miR-27a作用于Wnt信號(hào)通路促進(jìn)顱咽管瘤鈣化的證據(jù),初步探討顱咽管瘤鈣化的形成機(jī)制。研究?jī)?nèi)容與方法1. p-catenin和miR-27a在顱咽管瘤中的表達(dá)。收集南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院神經(jīng)外科2013年4月至2014年10月經(jīng)病理確診為顱咽管瘤的標(biāo)本33例,其中造釉型顱咽管瘤27例,鱗狀乳頭型顱咽管瘤6例,以上病例均有完整的術(shù)前,術(shù)后影像學(xué)及臨床資料。實(shí)驗(yàn)方法：采用免疫組化的方法檢測(cè)不同病理和鈣化等級(jí)顱咽管瘤標(biāo)本中β-catenin表達(dá)情況,并分析β-catenin表達(dá)與病理類型和鈣化級(jí)別的相關(guān)性,進(jìn)一步運(yùn)用Westem blot的方法檢測(cè)顱咽管瘤組織中β-catenin表達(dá)水平,分析其表達(dá)量與病理類型及鈣化級(jí)別的相關(guān)性；利用RT-PCR的方法檢測(cè)miR-27a在不同病理類型及鈣化級(jí)別的顱咽管瘤組織中的表達(dá)量,分析其與顱咽管瘤病理類型及鈣化級(jí)別之間的關(guān)系。2. miR-27a通過作用于Wnt信號(hào)通路促進(jìn)顱咽管瘤鈣化的初步研究通過上述方法取得的新鮮顱咽管瘤標(biāo)本,取腫瘤組織的實(shí)體部分進(jìn)行顱咽管瘤細(xì)胞的原代培養(yǎng),得到顱咽管瘤的細(xì)胞模型并驗(yàn)證。通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染上調(diào)miR-27a的顱咽管瘤細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組(miR-27a+),設(shè)置空白對(duì)照組,通過qRT-PCR的方法檢測(cè)miRNA的表達(dá)水平來確認(rèn)轉(zhuǎn)染成功,相同的條件下培養(yǎng)72小時(shí)后進(jìn)一步采用Westem blot檢測(cè)每組細(xì)胞內(nèi)β-catenin蛋白和鈣化相關(guān)蛋白BMP2, ALP的表達(dá)水平,最后通過茜素紅染色的方法檢測(cè)每組細(xì)胞的鈣鹽沉積情況,為進(jìn)一步驗(yàn)證上述試驗(yàn)的結(jié)果,取上調(diào)miR-27a成功的腫瘤細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組加入Wnt信號(hào)通路阻斷劑,相同條件下繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí),再次通過Western blot的方法驗(yàn)證試驗(yàn)組和空白對(duì)照組鈣化相關(guān)蛋白ALP, BMP2的表達(dá)水平。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料用x±s表示,組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、不同鈣化級(jí)別間多重比較采用SNK法(Student-Neuman-Keuls)。以P0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果1. β-catenin和miR-27a在顱咽管瘤中的表達(dá)以及其與顱咽管瘤不同病理類型及鈣化分級(jí)的關(guān)系。運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)不同顱咽管瘤組織中β-catenin的表達(dá)水平,結(jié)果顯示造釉細(xì)胞型顱咽管瘤組織的標(biāo)本中β-catenin的表達(dá)強(qiáng)度高于鱗狀乳頭型顱咽管瘤,并且造釉細(xì)胞型顱咽管瘤組織標(biāo)本中可見β-catenin在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá),其中造釉細(xì)胞型顱咽管瘤存在β-catenin細(xì)胞核表達(dá)細(xì)胞常出現(xiàn)于渦旋狀細(xì)胞及鈣化灶區(qū)域周邊細(xì)胞。而鱗狀乳頭型顱咽管瘤的組織標(biāo)本中β-catenin多表達(dá)于細(xì)胞膜上,未發(fā)現(xiàn)其在細(xì)胞核中表達(dá)。進(jìn)一步采用western blot的方法對(duì)所有顱咽管瘤組織中β-catenin的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示造釉型顱咽管瘤組織中β-catenin蛋白的表達(dá)水平高于鱗狀乳頭型顱咽管瘤(P=0.013,0.05)；并且在造釉細(xì)胞型顱咽管瘤組織中β-catenin蛋白的表達(dá)與鈣化的級(jí)別有較高的一致性(rs=0.791,P0.001),鈣化級(jí)別高的顱咽管瘤組織β-catenin蛋白的表達(dá)水平也較高,而未見鈣化的造釉細(xì)胞型顱咽管瘤β-catenin的表達(dá)水平和鱗狀乳頭型顱咽管瘤的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.237)。利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)顱咽管瘤組織中的miR-27a的表達(dá)水平,結(jié)果顯示造釉細(xì)胞型顱咽管瘤組織標(biāo)本中miR-27a的表達(dá)水平要高于鱗狀乳頭型顱咽管瘤(P值為0.024,0.05),并且在造釉細(xì)胞型顱咽管瘤組織中miR-27a的表達(dá)水平在不同鈣化級(jí)別分組中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p值均0.05),隨著鈣化級(jí)別的升高,miR-27a的表達(dá)水平也升高(rs=0.680,P0.001)。而在未發(fā)生鈣化的造釉細(xì)胞型顱咽管瘤中·miR-27a的表達(dá)與在鱗狀乳頭型顱咽管瘤中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)意義(P值=0.31)。2. miR-27a通過作用于Wnt信號(hào)通路促進(jìn)顱咽管瘤鈣化的研究用qRT-PCR進(jìn)行顱咽管瘤細(xì)胞miR-27a的表達(dá)檢測(cè),轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)組(miR-27a+)表達(dá)水平高于空白對(duì)照組,驗(yàn)證轉(zhuǎn)染成功。采用Western blot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)β-catenin和鈣化相關(guān)蛋白BMP2, ALP的表達(dá)水平,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)β-catenin和鈣化相關(guān)蛋白BMP2, ALP的表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P值均0.05)；茜素紅染色結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組的鈣鹽沉積明顯較對(duì)照組多.為進(jìn)一步驗(yàn)證上述試驗(yàn)結(jié)果,利用Westem blot檢測(cè)Wnt信號(hào)阻斷實(shí)驗(yàn)組(Wnt-)和對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)β-catenin和鈣化相關(guān)蛋白BMP2,ALP的表達(dá)水平,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)鈣化相關(guān)蛋白BMP2,ALP的表達(dá)水平均低于對(duì)照組(P值均0.05)。結(jié)論miR-27a和Wnt信號(hào)通路的激活在顱咽管瘤的鈣化過程中扮演了重要的角色。在造釉細(xì)胞型顱咽管瘤中miR-27a的表達(dá)可促進(jìn)顱咽管瘤細(xì)胞的鈣化,這種促進(jìn)作用是通過作用于Wnt信號(hào)通路產(chǎn)生的。阻斷Wnt信號(hào)通路的激活可以抑制這種促進(jìn)作用。miR-27a激活Wnt信號(hào)通路促進(jìn)顱咽管瘤細(xì)胞的鈣化是顱咽管瘤鈣化形成的可能機(jī)制之一,Wnt信號(hào)通路的激活后作用于目的基因促進(jìn)顱咽管瘤細(xì)胞的鈣化的具體機(jī)制還需要進(jìn)一步進(jìn)行研究。
【關(guān)鍵詞】：顱咽管瘤 造釉細(xì)胞型顱咽管瘤 鱗狀乳頭型顱咽管瘤 miR-27a Wnt/β-catenin信號(hào)通路 鈣化
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 前言18-21
• 第一章 miR-27a和β-catenin在顱咽管瘤中的表達(dá)21-37
• 一 引言21-22
• 二 材料與方法22-31
• 三 結(jié)果31-37
• 第二章 miR-27a通過作用于Wnt信號(hào)通路促進(jìn)顱咽管瘤鈣化的研究37-50
• 一 引言37
• 二 材料與方法37-46
• 三 結(jié)果46-50
• 全文討論50-54
• 總結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 英文縮寫詞簡(jiǎn)表61-63
• 攻讀學(xué)位期間成果63-64
• 致謝64-66

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王志利;侯林生;;常用鎖孔手術(shù)入路的解剖學(xué)和臨床應(yīng)用研究[J];河南外科學(xué)雜志;2011年06期

2 王小飛;王志剛;;顱咽管瘤手術(shù)治療現(xiàn)狀及進(jìn)展[J];臨床神經(jīng)外科雜志;2013年05期

3 黃廣龍;吳欣洪;郭邦明;漆松濤;;顱咽管瘤組織中IFN-α、IFN-αR、OPN的表達(dá)變化及意義[J];山東醫(yī)藥;2012年30期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 潘軍;顱咽管瘤的外科學(xué)分型及其在顯微手術(shù)中的應(yīng)用研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

2 周杰;釉質(zhì)上皮型顱咽管瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒓癐L-6對(duì)釉質(zhì)上皮型顱咽管瘤細(xì)胞體外遷移特性的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

3 常洪波;應(yīng)用~(32)P膠體治療顱咽管瘤臨床安全性及體外實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 宗慶華;經(jīng)額縱裂入路及鞍區(qū)的顯微解剖學(xué)研究[D];鄭州大學(xué);2010年

2 王小飛;顯微手術(shù)治療顱咽管瘤回顧性臨床分析[D];山東大學(xué);2009年

3 韓獎(jiǎng)勵(lì);CT成像模擬眶上鎖孔入路磨除前床突前后頸內(nèi)動(dòng)脈床突上段的顯露[D];中南大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：643101