本文關(guān)鍵詞：硫化氫通過(guò)上調(diào)BDNF-TrkB通路拮抗同型半胱氨酸誘導(dǎo)HT22細(xì)胞自噬

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【摘要】：目的:本研究以同型半胱氨酸(Homocysteine Hcy)處理的HT22細(xì)胞作為細(xì)胞自噬模型,探討硫化氫(Hydrogen sulfide H2S)是否可通過(guò)上調(diào)BDNF-TrkB通路拮抗同型半胱氨酸誘導(dǎo)HT22細(xì)胞自噬。方法:1、蛋白免疫印跡法(Western Bloting)法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3II/I比值、P62、Beclin-1蛋白的表達(dá)和電鏡檢測(cè)自噬結(jié)構(gòu)確定Hcy是否能夠誘導(dǎo)HT22細(xì)胞自噬,并建立細(xì)胞自噬模型,同時(shí)觀察不同濃度的H2S是否有拮抗Hcy誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬的作用。2、采用蛋白免疫印跡法(Western Bloting,WB)檢測(cè)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及受體(brain-derived neurotrophic factor,BDNF,Tyrosine kinase receptor B)蛋白的表達(dá),觀察不同濃度的Hcy對(duì)BDNF蛋白和p-Trk B/TrkB蛋白比值的作用,同時(shí)檢測(cè)H2S是否能上調(diào)Hcy誘導(dǎo)自噬的HT22細(xì)胞中BDNF蛋白、p-TrkB/Trk B蛋白比值的表達(dá)。3、采用BDNF-TrkB抑制劑(k252a)預(yù)處理NaHS及Hcy共處理的HT22細(xì)胞,Western Blotting檢測(cè)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3II/I比值、P62、Beclin-1蛋白的表達(dá)確定抑制劑k252a是否可以逆轉(zhuǎn)H2S拮抗Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)胞自噬作用。結(jié)果:1、Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)胞的自噬;Hcy(2.5、5、10 mmol/L)處理HT22細(xì)胞24h后電鏡檢測(cè)自噬泡的數(shù)量呈濃度依賴性增加,wb檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白lc3ii/i比值、beclin-1蛋白表達(dá)呈現(xiàn)濃度依賴性上調(diào),p62蛋白表達(dá)呈現(xiàn)濃度依耐性下調(diào),以上表明hcy可以誘導(dǎo)ht22細(xì)胞自噬。2、h2s拮抗hcy誘導(dǎo)ht22細(xì)胞自噬;nahs(100、200、400μmol/l)可濃度依賴性抑制hcy(5mmol/l,24h)誘導(dǎo)的ht22細(xì)胞中自噬泡數(shù)量的增加和自噬相關(guān)蛋白lc3ii/i比和beclin-1蛋白的上調(diào)、p62蛋白的下調(diào),結(jié)果表明h2s可拮抗hcy誘導(dǎo)的ht22細(xì)胞自噬。3、h2s通過(guò)上調(diào)bdnf-trkb通路拮抗hcy誘導(dǎo)的ht22細(xì)胞自噬;hcy(2.5、5、10mmol/l)處理ht22細(xì)胞24小時(shí)后檢測(cè)bdnf蛋白、p-trkb/trkb蛋白比值呈濃度依賴性下調(diào),表明hcy可以抑制ht22細(xì)胞bdnf蛋白、p-trkb/trkb蛋白比值的表達(dá)。nahs(100、200、400μmol/l,24h)處理ht22細(xì)胞后濃度依賴性地上調(diào)bdnf蛋白、p-trkb/trkb蛋白比值的表達(dá)。予以nahs(400μmol/l)預(yù)處理ht22細(xì)胞半小時(shí),然后加入hcy(5mmol/l)共同處理24小時(shí),h2s可以逆轉(zhuǎn)hcy對(duì)ht22細(xì)胞bdnf蛋白表達(dá)的抑制和p-trkb/trkb蛋白比值的下調(diào)。予以k252a(10nmol/l)預(yù)處理nahs、hcy共處理的ht22細(xì)胞后,h2s拮抗hcy誘導(dǎo)的ht22細(xì)胞自噬的作用被部分阻斷,即相對(duì)于h2s保護(hù)組ht22細(xì)胞的自噬泡數(shù)量增加和自噬相關(guān)蛋白lc3ii/i比值和beclin-1蛋白表達(dá)上調(diào)及p62蛋白表達(dá)下調(diào)。此結(jié)果表明h2s通過(guò)上調(diào)bdnf-trkb通路拮抗hcy誘導(dǎo)的ht22細(xì)胞自噬。結(jié)論:h2s通過(guò)上調(diào)bdnf-trkb通路拮抗hcy誘導(dǎo)ht22細(xì)胞自噬。
【關(guān)鍵詞】：硫化氫 同型半胱氨酸 細(xì)胞自噬 BDNF-TrkB通路
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R741
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-13
• 第1章 緒論13-17
• 1、同型半胱氨酸的神經(jīng)毒性作用13-14
• 2、H_2S的神經(jīng)保護(hù)作用14-15
• 3、腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子酪氨酸激酶受體B的神經(jīng)保護(hù)作用15
• 4.科學(xué)假說(shuō)和研究目的15-17
• 第2章 材料和方法17-27
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器17-18
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑18-19
• 2.3 試劑的制備19-22
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法22-25
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25-27
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-35
• 3.1 Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)胞的自噬27-28
• 3.2 H_2S拮抗Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)胞的自噬28-30
• 3.3 Hcy 抑制HT22細(xì)胞BDNF、p-TrkB/TrkB蛋白的表達(dá)30-31
• 3.4 H2S 可上調(diào) HT22細(xì)胞BDNF、p-TrkB/TrkB蛋白的表達(dá)31-32
• 3.5 BDNF-TrkB抑制劑（K252a）阻止H_2S拮抗Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)胞自噬32-35
• 第4章 討論35-39
• 第5章 實(shí)驗(yàn)結(jié)論39-41
• 參考文獻(xiàn)41-47
• 文獻(xiàn)綜述 自噬與腦缺血疾病研究進(jìn)展47-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 碩士期間發(fā)表的論文55-57
• 致謝57

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本文編號(hào)：639390