本文關(guān)鍵詞：硫酸鎂對(duì)6-羥基多巴胺損傷的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用

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【摘要】：研究目的:1.研究硫酸鎂(MgSO4)對(duì)6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamin,6-OHDA)損傷的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y是否具有保護(hù)作用。2.研究6-OHDA損傷SH-SY5Y細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表達(dá)變化,Mg SO4對(duì)其影響和意義。3.研究鎂離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC41A1、NIPA1、Mag T1和CNNM2的m RNA及蛋白在6-OHDA損傷的SH-SY5Y細(xì)胞中表達(dá)量的變化,補(bǔ)充Mg SO4對(duì)其影響及意義。4.研究經(jīng)6-OHDA損傷的SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)總抗氧化能力及活性氧(reactive oxygen species,ROS)代謝有何改變,以及Mg SO4對(duì)其影響及意義。研究方法:1.用Cell Counting Kit-8(CCK-8)試劑盒測(cè)定SH-SY5Y細(xì)胞對(duì)不同濃度(0.125m M~1m M)Mg SO4和6-OHDA的敏感性,以及Mg SO4對(duì)6-OHDA損傷細(xì)胞的細(xì)胞存活率的影響。2.培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞,隨機(jī)分為對(duì)照組、6-OHDA損傷組和Mg SO4處理組,對(duì)照組加等體積溶劑,6-OHDA損傷組加入50μM 6-OHDA孵育24h,Mg SO4處理組在損傷前1h加入0.25m M、0.5m M、1m M Mg SO4。3.通過(guò)Western Blot和細(xì)胞免疫染色,觀察細(xì)胞在上述處理下TH的表達(dá)變化。4.提取細(xì)胞的RNA、蛋白質(zhì),用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫印跡(Western Blot)法檢測(cè)上述處理下細(xì)胞鎂離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC41A1、NIPA1、Mag T1和CNNM2的m RNA和蛋白表達(dá)變化。5.2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)檢測(cè)上述處理下細(xì)胞總抗氧化能力的變化。6.利用熒光探針2’7’-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)檢測(cè)上述處理下細(xì)胞內(nèi)ROS的代謝變化。結(jié)果:1.CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,25μM~50μM的6-OHDA損傷細(xì)胞24h可降低SH-SY5Y細(xì)胞的存活率(p0.05),其中,50μM的6-OHDA可使細(xì)胞存活率下降54.07%(p0.05)。損傷前1h加入0.125m M~1m M的Mg SO4可提高6-OHDA損傷細(xì)胞的存活率(p0.05)。2.Western Blot和細(xì)胞免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SH-SY5Y細(xì)胞經(jīng)6-OHDA損傷后,TH表達(dá)較正常組減少了52.23%(p0.05),損傷前加入Mg SO4則可一定程度恢復(fù)TH的表達(dá)。1m M的Mg SO4對(duì)TH的影響具體有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.q PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SH-SY5Y細(xì)胞經(jīng)6-OHDA損傷后,細(xì)胞內(nèi)SLC41A1、NIPA1、Mag T1和CNNM2的m RNA和蛋白表達(dá)均有所下降,而損傷前1h加入Mg SO4可明顯改善這一現(xiàn)象,與損傷組相比,0.25m M~1m M的Mg SO4使SLC41A1、CNNM2的m RNA和NIPA1、Mag T1的蛋白的表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),0.5m M~1m M的Mg SO4對(duì)NIPA1和Mag T1的m RNA和SLC41A1、CNNM2的蛋白的表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.細(xì)胞總抗氧化能力檢測(cè)和細(xì)胞內(nèi)ROS測(cè)定結(jié)果顯示,6-OHDA可降低細(xì)胞總抗氧化能力(p0.05),并使細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量ROS,而Mg SO4可增加損傷細(xì)胞的總抗氧化能力,并抑制ROS的生成。結(jié)論:MgSO4對(duì)6-OHDA損傷的SH-SY5Y細(xì)胞有保護(hù)作用。鎂離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC41A1、NIPA1、Mag T1和CNNM2可能與PD的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：帕金森病 6-羥基多巴胺 SH-SY5Y 硫酸鎂
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.5
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 材料11-15
• 方法15-24
• 結(jié)果24-34
• 討論34-36
• 結(jié)論36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 致謝39-40
• 綜述40-48
• 參考文獻(xiàn)44-48

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 朱青;孫圣剛;張?jiān)式?曹學(xué)兵;;帕金森病猴模型紅細(xì)胞內(nèi)鈣鎂離子含量的測(cè)定及意義[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2005年05期

2 黨利華;王詠龍;鄒曉輝;;左旋多巴聯(lián)合硫酸鎂注射液治療帕金森病運(yùn)動(dòng)障礙的療效觀察[J];中國(guó)全科醫(yī)學(xué);2011年09期

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本文編號(hào)：628824