本文關(guān)鍵詞：大鼠腦缺血再灌注損傷后Cathepsin L與p-Akt表達的研究

  更多相關(guān)文章： 腦缺血再灌注 Cathepsin L p-Akt Caspase 3

【摘要】：目的在腦缺血再灌注后半暗帶區(qū)神經(jīng)細胞凋亡中溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L)與磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路均發(fā)揮了重要作用,但關(guān)于兩者在缺血性腦卒中半暗帶區(qū)之間的聯(lián)系研究甚少。通過建立大鼠大腦中動脈腦缺血再灌注損傷模型,運用Western blotting檢測大鼠腦缺血半暗帶各相應(yīng)時間點Cathepsin L及p-Akt蛋白表達的動態(tài)變化,同時使用Cathepsin L的特異性抑制劑Z-FY-DMK及PI3K/Akt的特異性抑制劑LY294002分別進行干預(yù),觀察蛋白的表達變化,探討Cathepsin L與p-Akt之間的關(guān)系。方法選取周齡為10-12周的清潔級健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠85只,體重為280±20g,依據(jù)隨機數(shù)字表法將大鼠隨機分為假手術(shù)組(Sham組)10只;腦缺血再灌注組(IRI組)25只;Cathepsin L抑制劑Z-FY-DMK干預(yù)組(CLI組)25只;PI3K-Akt抑制劑LY294002干預(yù)組(LY組)25只,IRI組、CLI組及LY組大鼠分別按3h、6h、12h及24h四個時間點每個時間點每組5只隨機分為四個亞組。采用改良longa線栓法制作大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),CLI組、LY組分別ii于術(shù)前30min側(cè)腦室穿刺注入z-fy-dmk(20ug/1ul*5ul)及l(fā)y294002(25μg,5μldmso),sham組及iri組于術(shù)前30分鐘側(cè)腦室注入濃度為10ml/l的dmso5ul。對大鼠運用longa’s5級標(biāo)準(zhǔn)評分法評分;ttc染色檢測各組大鼠24h時間點相對腦梗死體積;westernblotting法檢測半暗帶區(qū)相應(yīng)時間點cathepsinl、p-akt及24h組caspase3的蛋白表達變化。結(jié)果1.造模成功率是83.33%。sham組大鼠未見神經(jīng)功能缺損癥狀;iri組、cli組、ly組大鼠均可見神經(jīng)功能缺損癥狀;與iri組相比,cli組大鼠腦神經(jīng)功能缺損評分較低,ly組大鼠腦神經(jīng)功能缺損評分較高(p0.05)。2.ttc染色檢測sham組大鼠腦組織未見白色梗死灶,iri組、cli組、ly組缺血側(cè)皮質(zhì)均可見蒼白色梗死灶,cli組大鼠腦梗死體積較iri組減小,ly組大鼠腦梗死體積較iri組增加(p㩳0.05)。3.westernblotting檢測到sham組大鼠缺血側(cè)大腦視前區(qū)皮質(zhì)可見cathepsinl蛋白少許表達,iri組cathepsinl在大鼠腦缺血再灌注后3h、6h、12h呈上升趨勢,12h達到高峰,24h下降,均高于sham組(p㩳0.05);cli組各相應(yīng)時間點cathepsinl蛋白的表達較iri組表達減少(p0.05);ly組cathepsinl表達在再灌注后3h、6h、12h呈上升趨勢,12h到達高峰,24h下降,各相應(yīng)時間點cathepsinl蛋白表達較iri組增加(p0.05)。sham組大鼠缺血側(cè)大腦視前區(qū)皮質(zhì)可見p-akt蛋白少許表達,iri組p-akt蛋白表達在大鼠腦缺血再灌注后3h達高峰,6h、12h有下降,24h再度升高;CLI組p-Akt蛋白表達在再灌注后3h、6h、12h、24h呈持續(xù)增高趨勢,3h、6h較IRI組相應(yīng)時間點減少,12h、24h較IRI組相應(yīng)時間點增高(p0.05);LY組p-Akt蛋白表達在3h達高峰,6h、12h有下降,24h再度上升,各相應(yīng)時間點較IRI組都有減少(p0.05)。4.Western blotting檢測各實驗組大鼠缺血側(cè)大腦皮質(zhì)視前區(qū)24h時間點caspase 3蛋白表達:Sham組幾乎不表達,IRI組、CLI組、LY組明顯表達,CLI組較IRI組表達少(P0.05),LY組較IRI組表達增加(P0.05)。結(jié)論1.大鼠腦缺血再灌注損傷后,大鼠腦缺血半暗帶Cathepsin L與p-Akt的表達具有一定相關(guān)性。2.大鼠腦缺血再灌注損傷后,Z-FY-DMK可能通過抑制Cathepsin L減少Caspase 3表達,減輕腦損傷;LY294002可能通過抑制PI3K/Akt信號通路,增加Caspase 3表達,加重腦損傷。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血再灌注 Cathepsin L p-Akt Caspase 3
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 第1章 緒論13-15
• 第2章 材料與方法15-21
• 2.1 材料15-16
• 2.2 實驗方法16-20
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析20-21
• 第3章 結(jié)果21-29
• 3.1 動物模型成功率及神經(jīng)功能缺損評分21-22
• 3.2 TTC染色22-23
• 3.3 Western blotting檢測Cathepsin L的蛋白表達23-24
• 3.4 Western blotting檢測p-Akt的蛋白表達24-25
• 3.5 Western blotting檢測Caspase 3 蛋白表達25-26
• 3.6 Cathepsin L與p-Akt相關(guān)分析26-29
• 第4章 討論29-37
• 4.1 動物模型評價29
• 4.2 溶酶體與缺血再灌注損傷29-30
• 4.3 Caspase 3 與凋亡30-31
• 4.4 Cathepsin L與缺血再灌注損傷31-33
• 4.5 p-Akt與缺血再灌注損傷33-34
• 4.6 展望34-37
• 第5章 結(jié)論37-39
• 參考文獻39-45
• 附錄45-47
• 綜述47-55
• 參考文獻53-55
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果55-57
• 致謝57

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張輝;肖勤;陳生弟;;溶酶體蛋白酶cathepsin L與神經(jīng)退行性疾病[J];中國臨床神經(jīng)科學(xué);2010年03期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 晉云;肝細胞癌SuperArray腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因芯片篩選及Cathepsin L表達實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張創(chuàng);大鼠腦缺血再灌注損傷后Cathepsin L與p-Akt表達的研究[D];南華大學(xué);2015年

2 楊磊;Cathepsin L新型抑制劑Clik148對大鼠局灶性缺血性腦損傷的保護作用及其抑制星形膠質(zhì)細胞死亡的機制[D];蘇州大學(xué);2012年

，

本文編號：624691