本文關(guān)鍵詞：聚乙烯亞胺介導(dǎo)Bmk CT基因?qū)6膠質(zhì)瘤細(xì)胞體內(nèi)外作用研究

  更多相關(guān)文章： Bmk CT PEI 膠質(zhì)瘤 增殖 水腫 通路

【摘要】：目的東亞鉗蝎氯離子通道毒素(Buthus martensii Karsch Chlorotoxin-like Toxin,Bmk CT)是一個(gè)神經(jīng)毒素蛋白,可以特異性的與膠質(zhì)瘤細(xì)胞結(jié)合而不與正常細(xì)胞結(jié)合�；|(zhì)金屬蛋白酶2和氯離子通道是其和膠質(zhì)瘤細(xì)胞的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)證明通過(guò)腹腔注射Bmk CT蛋白,能夠顯著抑制大鼠皮下膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。為了降低免疫原性,防止蛋白降解以及降低成本,前期實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了Bmk CT基因密碼子序列并整合到腺病毒載體,獲得重組病毒Ad-Bmk CT,將其注射荷瘤鼠瘤內(nèi),能抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。而由于病毒載體體內(nèi)注射的安全性問(wèn)題,本課題組構(gòu)建了pEGFP-N1-Bmk CT重組質(zhì)粒,并期望通過(guò)非病毒載體體內(nèi)轉(zhuǎn)染的方式達(dá)到治療效果。方法采用陽(yáng)離子聚合物(polyethyleneimine,PEI)轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-Bmk CT重組質(zhì)粒和pEGFP-N1空載體至C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞,進(jìn)行MTS實(shí)驗(yàn),觀察36 h、48 h、72h時(shí)生長(zhǎng)抑制率和細(xì)胞轉(zhuǎn)染率。Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后48 h時(shí)PCNA、cyclinD1、c-myc、VEGF、MMP-9、AQP-1、p-ERK、p-AKT、p-NF-κBp65蛋白表達(dá)水平。構(gòu)建原位C6膠質(zhì)瘤大鼠模型,核磁檢查成瘤率,同時(shí)將造模成功動(dòng)物隨機(jī)分為3組,對(duì)照組,pEGFP-N1-Bmk CT基因治療組,pEGFP-N1空載體組。在造模后第13天,分別用生理鹽水、PEI/pEGFP-N1-Bmk CT、PEI/pEGFP-N1瘤內(nèi)注射。48 h后,通過(guò)熒光顯微鏡觀察和免疫組化檢測(cè)基因轉(zhuǎn)染區(qū)域GFP蛋白表達(dá)情況;免疫熒光檢測(cè)p-ERK、PCNA、cyclinD1、VEGF蛋白表達(dá)水平。結(jié)果PEI/pEGFP-N1-Bmk CT對(duì)C6細(xì)胞有較好的轉(zhuǎn)染率;MTT實(shí)驗(yàn)中,36 h、48 h、72 h基因治療組細(xì)胞生存活力較空載體組均降低,具有顯著性差異(P㩳0.05);western blot結(jié)果顯示PCNA、cyclinD1、c-myc、vegf、AQP1、p-ERK、p-AKT、p-NF-κBp65表達(dá)均減少;組織的免疫組化顯示GFP蛋白在膠質(zhì)瘤細(xì)胞質(zhì)中有表達(dá),熒光顯微鏡下觀察冰凍切片,基因治療組與空載體組相比,在綠色熒光蛋白相當(dāng)?shù)牡胤?p-ERK、PCNA、cyclin D1、VEGF蛋白表達(dá)水平下降。結(jié)論P(yáng)EI轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-Bmk CT重組質(zhì)粒在體內(nèi)外均可獲得相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)染率,能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖,抑制腫瘤水腫相關(guān)蛋白的表達(dá)。這可能與抑制ERK、AKT、NF-κB通路過(guò)度活化有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：Bmk CT PEI 膠質(zhì)瘤 增殖 水腫 通路
【學(xué)位授予單位】：山西中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• 英文摘要4-6
• 主要符號(hào)表6-9
• 第一部分 聚乙烯亞胺介導(dǎo)Bmk CT基因?qū)6膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外作用研究9-25
• 前言9-11
• 材料11-12
• 方法12-14
• 結(jié)果14-18
• 討論18-21
• 結(jié)論21-22
• 參考文獻(xiàn)22-25
• 第二部分 聚乙烯亞胺介導(dǎo)Bmk CT基因?qū)6膠質(zhì)瘤細(xì)胞體內(nèi)作用研究25-37
• 前言25-27
• 材料27
• 方法27-30
• 結(jié)果30-33
• 討論33-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 附錄 綜述 神經(jīng)膠質(zhì)瘤的基因治療研究進(jìn)展37-45
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 致謝45-46
• 作者簡(jiǎn)介46

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 孫娜;趙晉華;喬文禮;趙凌舟;;~(125)I-BmK CT對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲的影響[J];核技術(shù);2013年08期

2 孫娜;趙晉華;喬文禮;邢巖;宋建華;陳香;;BmK CT對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲的影響及機(jī)制研究[J];上海醫(yī)學(xué)影像;2012年04期

3 馮幼;肖森光;羅志強(qiáng);李志英;潘挺;吳丹;;蝎毒的成分及其應(yīng)用[J];飼料博覽;2012年04期

4 高曉葳;黃永旺;劉靜;;水通道蛋白1和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2009年09期

5 張維東;張?jiān)掠?王朝霞;王兆朋;賈青;;蝎毒多肽提取物對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和細(xì)胞免疫功能的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年03期

6 文志華,趙時(shí)雨,李志強(qiáng),陶紅兵,柯瑋;Cyclin D_1和p16、p27在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與PCNA的相關(guān)性[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2003年10期

，

本文編號(hào)：619768