本文關鍵詞：Syndecan-1沉默抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖和侵襲及其潛在機制

  更多相關文章： 膠質(zhì)瘤 多配體蛋白多糖-1 增殖和侵襲 c-src/FAK

【摘要】：目的分析多配體蛋白多糖-1(Syndecan-1,SDC1)的表達水平與膠質(zhì)瘤的病理級別及膠質(zhì)瘤患者生存率的關系;檢測SDC1在不同膠質(zhì)瘤細胞株中的表達水平,探討SDC1沉默對A172和U87膠質(zhì)母細胞增殖和侵襲的影響及其機制;皮下成瘤實驗驗證SDC1的沉默對膠質(zhì)瘤增殖和侵襲的影響。方法1.利用The Cancer Genome Atlas(TCGA)和the National Center for Biotechnology Information Gene Expression Omnibus(NCBI-GEO)數(shù)據(jù)庫,通過R數(shù)據(jù)包分析SDC1的表達水平與膠質(zhì)瘤的病理級別及膠質(zhì)瘤患者生存率的關系;2.實時熒光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot分析SDC1在不同膠質(zhì)瘤細胞株中的表達水平;構(gòu)建SDC1穩(wěn)定沉默的A172和U87細胞株,轉(zhuǎn)染SDC1-sh RNA序列的細胞株為干擾組(sh SDC1),轉(zhuǎn)染scramble序列者為空白對照組(Scramble),未轉(zhuǎn)染者為陰性對照組(Control);3.采用MTT法、臺盼藍拒然法、流式細胞術和Transwell小室實驗分析SDC1的沉默對膠質(zhì)瘤細胞增殖和侵襲能力的影響,qRT-PCR和Western Blot檢測SDC1及相關蛋白的表達;4.Western Blot探討SDC1沉默抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖和侵襲的潛在機制;5.皮下成瘤實驗驗證SDC1沉默對膠質(zhì)瘤細胞體內(nèi)成瘤的影響。結(jié)果1、TCGA和NCBI-GEO的數(shù)據(jù)分析顯示:膠質(zhì)瘤中SDC1表達隨著膠質(zhì)瘤病理級別的增加而表達增強(P0.0001);SDC1的表達超過平均表達水平2/3的膠質(zhì)瘤患者生存率明顯低于其表達低于平均水平1/3的膠質(zhì)瘤患者(P=0);2、qRT-PCR和Western blot顯示SDC1高表達于細胞株U87和A172細胞中,低表達于細胞株U251和SHG-44(P0.05);成功構(gòu)建穩(wěn)定沉默SDC1的A172和U87膠質(zhì)母細胞細胞株,qRT-PCR和Western blot顯示SDC1的表達在干擾組中顯著下降(P0.01);3、MTT實驗、生長曲線和平板克隆實驗顯示SDC1的沉默抑制A172和U87細胞的增殖(P0.05);流式細胞檢測顯示,A172和U87干擾組中細胞增殖率(30.84%±3.41%和35.64%±5.24%)較陰性組(47.76%±0.39%和47.20%±0.92%)和空白組(50.02%±3.39%和45.69%±1.44%)相比明顯下降(P0.01);Transwell小室實驗顯示,A172和U87細胞干擾組中細胞遷移力(58.40±5.24vs255.8±16.09,226.5±22.84和138.1±3.21vs 319.0±10.91,307.8±8.83,P0.01)和侵襲力(61.67±16.26 vs 233.7±17.24,244.3±28.15和840.7±48.64 vs1400±53.84,1416±98.33,P0.01)也明顯降低;qRT-PCR和Western blot顯示干擾組PCNA和MMP-9表達明顯降低(P0.01);4、與陰性對照組和空白對照組相比,干擾組中c-src Tyr 416和FAK Tyr 397磷酸化程度在A172干擾組中下降1.61倍和2.21倍,U87中下降1.78倍和1.5倍(P0.05);c-src/FAK復合物下游信號Erk,p-38mapk和Akt的磷酸化程度,在A172干擾組中下降2.16倍,3.55倍和1.48倍,在U87細胞中為2.07倍,2.80倍和1.71倍(P0.05);5、裸鼠成瘤實驗顯示,干擾組和對照組的腫瘤體積分別為830±500mm3和4800±1530 mm3(P0.05);腫瘤在干擾組和對照組中的平均質(zhì)量分別為0.89±0.34 g vs 2.30±1.05 g(P0.05);兩組裸鼠的體重無明顯差異;免疫組化實驗顯示干擾組中SDC1表達強度降低,血管密度降低。結(jié)論1、膠質(zhì)瘤中SDC1表達增強與腫瘤等級及不良預后密切相關;體外實驗顯示SDC1的沉默抑制膠質(zhì)瘤的增殖,侵襲和遷移;體內(nèi)實驗顯示SDC1的沉默抑制膠質(zhì)瘤的皮下成瘤的增殖和惡性進展;2、SDC1的沉默可能通過下調(diào)c-src/FAK復合物的活性抑制A172和U87膠質(zhì)瘤細胞的integrinαⅤβ3/αⅤβ5信號通路,有望成為膠質(zhì)瘤生物治療的新靶點。
【關鍵詞】：膠質(zhì)瘤 多配體蛋白多糖-1 增殖和侵襲 c-src/FAK
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 1 材料和方法14-23
• 2 結(jié)果23-38
• 3 討論38-41
• 4 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-47
• 文獻綜述47-59
• 參考文獻52-59
• 致謝59-60
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 姜華,周幽心,邵忠,傅軍,黃煜倫,葉明;Syndecan-1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義[J];蘇州大學學報(醫(yī)學版);2005年01期

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本文編號：614833