本文關(guān)鍵詞：敲除L-periaxin基因的大鼠RSC96細胞系的建立

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【摘要】：軸周蛋白(Periaxin)是外周神經(jīng)系統(tǒng)非致密性髓鞘中特異表達的蛋白,編碼Periaxin的基因經(jīng)由選擇性剪接產(chǎn)生兩種蛋白異構(gòu)體L-periaxin和S-periaxin,對髓鞘形成的初始化有重要作用。至今在Periaxin基因上已發(fā)現(xiàn)有18種不同的位點突變導(dǎo)致外周脫髓鞘神經(jīng)疾病腓骨肌萎縮癥4F亞型(CMT4F)的發(fā)生。利用轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶(TALENs)靶向基因敲除技術(shù)對大鼠RSC96細胞的periaxin基因進行敲除,根據(jù)TALENs設(shè)計原則,確定L-periaxin基因的敲除靶點在其編碼NLS結(jié)構(gòu)域部分,設(shè)計相應(yīng)的TALEN左臂與右臂的識別序列,構(gòu)建含上述識別序列的L-periaxin基因敲除載體TALEN-L和TALEN-R,并將其轉(zhuǎn)入RSC96細胞,經(jīng)嘌呤霉素藥物篩選,獲得L-periaxin基因敲除細胞株,經(jīng)測序確認大鼠RSC96細胞中的基因組中L-periaxin基因區(qū)段已被敲除,成功構(gòu)建了L-periaxin基因敲除細胞模型。計算L-periaxin基因敲除載體的突變率為21.6%。Western blotting實驗證明,在RSC96細胞中只能檢測到S-periaxin蛋白的表達。通過流式細胞術(shù)及MTT實驗檢測基因敲除細胞的細胞周期和生長速度,發(fā)現(xiàn)敲除L-periaxin基因的細胞生長速度緩慢,G1期細胞增多,S期細胞減少。
【作者單位】： 山西大學(xué)生物技術(shù)研究所教育部化學(xué)生物學(xué)與分子工程重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： periaxin 基因敲除 RSC細胞 TALEN技術(shù)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31170748) 山西省研究生教育創(chuàng)新項目(No.2016BY025)資助~~
【分類號】：R741
【正文快照】： Received:April 25,2016;Accepted:September 6,2016Supported by:National Natural Science Foundation of China(No.31170748),the Graduate Education and Innovation Program ofShanxi Province(No.2016BY025).Corresponding author:Yawei Shi.Tel:+86-13803451349;E-mail

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 劉雪靜;王歡;嚴放;高明明;劉國慶;黃薇;;大中型動物基因敲除技術(shù)的研究進展[J];生理科學(xué)進展;2015年01期

2 楊艷;彭婷婷;石亞偉;;Periaxin蛋白與腓骨肌萎縮癥[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2015年02期

3 李飛達;李勇;劉歡;張歡歡;劉楚新;張興舉;竇紅偉;楊文獻;杜玉濤;;利用TALENs和手工克隆技術(shù)高效獲得GHR基因敲除巴馬豬[J];遺傳;2014年09期

4 李巖強;王春連;趙開軍;;病原菌TAL效應(yīng)子與寄主靶基因相互識別的分子密碼[J];生物工程學(xué)報;2011年08期

5 肖安;胡瑩瑩;王唯曄;楊志們;王展翔;黃鵬;佟向軍;張博;林碩;;人工鋅指核酸酶介導(dǎo)的基因組定點修飾技術(shù)[J];遺傳;2011年07期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐邢賓;鐘潔;李順才;鄭李彬;李秋艷;張瑾;;中國實驗用小型豬MC3R基因的CRISPR/Cas9敲除載體構(gòu)建與驗證[J];中國畜牧雜志;2016年19期

2 梁敏;彭婷婷;石亞偉;;敲除L-periaxin基因的大鼠RSC96細胞系的建立[J];生物工程學(xué)報;2016年12期

3 肖碩;文九芳;;基因敲除技術(shù)在維生素D受體研究中的應(yīng)用進展[J];新醫(yī)學(xué);2016年06期

4 周陽;袁少飛;蔣廷亞;韓邦興;高力;陳乃富;;基因組靶向修飾技術(shù)研究進展[J];生物學(xué)雜志;2015年05期

5 陳義;魏來;周春苗;張業(yè)中;戴捷;;光譜法研究鄰菲羅啉鋅與DNA的相互作用[J];化學(xué)世界;2015年09期

6 趙長志;張懿;李廣磊;陳濟良;李京津;任瑞敏;倪攀;趙書紅;謝勝松;;sgRNAcas9軟件圖形用戶界面開發(fā)及應(yīng)用[J];遺傳;2015年10期

7 樊祥宇;林燕萍;廖國建;謝建平;;基因組定向編輯技術(shù)的專利概述及其對高校創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)教育的啟示[J];遺傳;2015年12期

8 李東;左其生;張亞妮;李碧春;;基因組編輯技術(shù)的研究進展[J];畜牧與獸醫(yī);2015年07期

9 張歡歡;劉楚新;馬月;肖麗萍;李飛達;應(yīng)華忠;劉歡;;利用TALEN技術(shù)高效制備TXNIP基因敲除小鼠模型[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2015年06期

10 陳明飛;許厚強;陳偉;倪萌萌;;貴州從江香豬與中國農(nóng)大小型豬Ⅰ系的雜交性能[J];貴州農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年06期

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王慧;任頁玫;段英俊;彭婷婷;石亞偉;;L-Periaxin蛋白與Ezrin蛋白相互作用初步分析[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2014年03期

2 沈延;黃鵬;張博;;TALEN構(gòu)建與斑馬魚基因組定點突變的實驗方法與流程[J];遺傳;2013年04期

3 沈延;肖安;黃鵬;王唯曄;朱作言;張博;;類轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物核酸酶(TALEN)介導(dǎo)的基因組定點修飾技術(shù)[J];遺傳;2013年04期

4 肖安;胡瑩瑩;王唯曄;楊志們;王展翔;黃鵬;佟向軍;張博;林碩;;人工鋅指核酸酶介導(dǎo)的基因組定點修飾技術(shù)[J];遺傳;2011年07期

5 張鵬;楊珍珍;竇紅偉;李偉杭;律波;Bolund Lars;杜玉濤;譚萍萍;馬潤林;;利用改進的手工克隆技術(shù)生產(chǎn)轉(zhuǎn)GFP基因豬克隆胚胎[J];遺傳;2011年05期

6 鐘強;趙書紅;;鋅指蛋白核酸酶的作用原理及其應(yīng)用[J];遺傳;2011年02期

7 苗麗麗;王春連;鄭崇珂;車晉英;高英;溫義昌;李貴全;趙開軍;;水稻抗白葉枯病新基因的初步定位[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年15期

8 孫振紅;苗向陽;朱瑞良;;動物轉(zhuǎn)基因新技術(shù)研究進展[J];遺傳;2010年06期

9 ;Efficient production of omega-3 fatty acid desaturase (sFat-1)-transgenic pigs by somatic cell nuclear transfer[J];Science China(Life Sciences);2010年04期

10 李玉蓉;鄒麗芳;武曉敏;楊娟;陳功友;;水稻黃單胞菌avrBs3/PthA家族基因研究進展[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年10期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉德培，方福德，，梁植權(quán);基因敲除[J];生理科學(xué)進展;1995年01期

2 賀松;張德純;;基因敲除方法及其應(yīng)用[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2009年02期

3 黃P;胡芳;曾祥云;;基因敲除模型技術(shù)及其在眼科研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀[J];眼科新進展;2011年03期

4 葉真龍;王艷;金華君;劉韜;錢其軍;;延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因敲除大鼠胚胎干細胞株的建立[J];中國組織工程研究;2013年01期

5 方福德;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所基因敲除中心成立并開始工作[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報;2001年03期

6 王景;穆媛媛;黎庶;陳志瑾;熊坤;叢延廣;;革蘭陰性菌基因敲除載體的構(gòu)建及其應(yīng)用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2009年23期

7 潘曉華;王宇罡;張戈;劉鐘;曾萬程;陳嘉凱;戴勇;秦嶺;;ERβ基因敲除小鼠的繁殖、鑒定及檢測[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年01期

8 郭敏利;樸永哲;王世全;黃瑋;周華成;楊洪澤;唐麗娜;;丙酸桿菌基因敲除體系的構(gòu)建及其應(yīng)用[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2013年07期

9 雷立芳;李大力;周軍媚;葉湘漓;;BAI1基因敲除打靶載體的快速構(gòu)建[J];生命科學(xué)研究;2012年02期

10 顧星星;陶慧;;Jagged1基因敲除小鼠血管內(nèi)皮發(fā)育異常[J];交通醫(yī)學(xué);2006年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賀松;張德純;;基因敲除方法及其應(yīng)用[A];重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會2009年論文集[C];2009年

2 王景;穆媛媛;黎庶;陳志瑾;熊坤;叢延廣;;革蘭陰性菌基因敲除載體的構(gòu)建及其應(yīng)用[A];重慶微生物學(xué)會第九屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2009年

3 孟凡偉;;利用基因敲除研究小鼠Dapper2基因的功能[A];中國遺傳學(xué)會模式生物與人類健康研討會會議論文集[C];2010年

4 黃黎珍;顧為望;;利用體細胞核移植技術(shù)生產(chǎn)基因敲除豬的研究[A];第九屆中國實驗動物科學(xué)年會（2010新疆）論文集[C];2010年

5 隋聰;熊承良;沈士亮;;敲除Attractin或Mahoganoid基因?qū)π坌孕∈笊硟?nèi)分泌激素的影響[A];湘鄂贛首屆性與生殖健康學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

6 師福山;趙德明;;朊蛋白受體基因敲除的打靶載體構(gòu)建[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(上冊)[C];2010年

7 李志杰;丁壯;;基因敲除及其在動物疾病上的研究應(yīng)用[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2005年

8 周晴晴;閆紅霞;金戈;康巧珍;;蛋白4.1R基因敲除對小鼠T細胞的影響[A];第九屆中國實驗動物科學(xué)年會（2010新疆）論文集[C];2010年

9 林蜜蜜;尹芙蓉;金暢;瞿佳;;LGR4基因敲除成年鼠眼表型研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

10 路福平;田琳;;分枝桿菌甾酮C_(1,2)位脫氫酶的基因敲除[A];2006中國微生物學(xué)會第九次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 李e灞頸ㄊ迪凹欽

本文編號：604759