本文關(guān)鍵詞：氧糖剝奪再灌注后HT22細(xì)胞高爾基體形態(tài)變化及干預(yù)作用研究

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【摘要】：目的:建立HT22細(xì)胞氧糖剝奪再灌注(oxygen-glucose deprivation followed by reperfusion,OGD/R)模型,探討其不同再灌注時(shí)間點(diǎn)高爾基體形態(tài)學(xué)改變和H89(PKA抑制劑)干預(yù)效果及作用。方法:1.模型的建立:以HT22細(xì)胞為研究對(duì)象,將HT22細(xì)胞氧糖剝奪6h后再分別在正常培養(yǎng)條件下培養(yǎng)6h、12h、24h,建立OGD/R模型。2.實(shí)驗(yàn)分組:實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、OGD/R組、H89干預(yù)組。OGD/R組和H89干預(yù)組按再灌注時(shí)間點(diǎn)不同分為6h、12h、24h三個(gè)亞組(OGD/R組的三個(gè)亞組分別稱(chēng)為OGD/R6h、OGD/R12h、OGD/R24h;H89干預(yù)組的三個(gè)亞組分別稱(chēng)為OGD/R6h+H89、OGD/R12h+H89、OGD/R24h+H89)。H89干預(yù)組是將該組HT22細(xì)胞在缺氧缺糖造模結(jié)束后,加入含100μM H89的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間。3.檢測(cè)方法:采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性;Hoechest 33258檢測(cè)細(xì)胞凋亡;Western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中GM130、GAAP的蛋白表達(dá)水平;熒光顯微鏡觀察高爾基體形態(tài)變化。結(jié)果:1.MTT結(jié)果顯示:OGD/R組與H89干預(yù)組HT22細(xì)胞經(jīng)氧糖剝奪再灌注6h、12h、24h后,細(xì)胞活性顯著降低,其吸光度(optical density,OD)值與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);H89干預(yù)組細(xì)胞OD值高于OGD/R組,其中12h點(diǎn)對(duì)應(yīng)兩亞組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),6h、24h點(diǎn)對(duì)應(yīng)兩亞組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);2.Hoechest 33258結(jié)果顯示:OGD/R組與H89干預(yù)組HT22細(xì)胞經(jīng)氧糖剝奪再灌注6h、12h、24h后,細(xì)胞凋亡率顯著上升,與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);H89干預(yù)組與OGD/R組各時(shí)間點(diǎn)對(duì)應(yīng)兩亞組間細(xì)胞凋亡率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);3.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示:OGD/R組與H89干預(yù)組HT22細(xì)胞在氧糖剝奪再灌注12h、24h點(diǎn)GM130蛋白表達(dá)水平出現(xiàn)下降,與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);H89干預(yù)組與OGD/R組各時(shí)間點(diǎn)對(duì)應(yīng)兩亞組間GM130蛋白表達(dá)水平兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);OGD/R組HT22細(xì)胞在再灌注12h、24h點(diǎn)GAAP表達(dá)水平降低,與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)差異(P0.05);H89干預(yù)組細(xì)胞在再灌注6h、12h、24h點(diǎn)GAAP表達(dá)水平降低,與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);H89干預(yù)組24h點(diǎn)亞組GAAP表達(dá)水平高于對(duì)應(yīng)的OGD/R亞組,兩亞組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),6h、12h點(diǎn)兩亞組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);4.免疫熒光結(jié)果顯示:OGD/R組HT22細(xì)胞在再灌注6h點(diǎn)出現(xiàn)高爾基體結(jié)構(gòu)松散,可見(jiàn)部分碎裂片斷,但仍聚集于核周;隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng),OGD/R組HT22細(xì)胞在再灌注12h、24h點(diǎn)高爾基體發(fā)生明顯的碎裂;H89干預(yù)組HT22細(xì)胞在再灌注6h、12h點(diǎn)可見(jiàn)高爾基體結(jié)構(gòu)稍有松散,形態(tài)基本完整,在再灌注24h點(diǎn)可見(jiàn)高爾基體發(fā)生明顯碎裂;在再灌注6h、12h點(diǎn),H89干預(yù)組HT22細(xì)胞的高爾基體形態(tài)較對(duì)應(yīng)同時(shí)間點(diǎn)的OGD/R亞組細(xì)胞高爾基體形態(tài)相對(duì)更完整,而在再灌注24h點(diǎn),對(duì)應(yīng)亞組間比較無(wú)明顯差異。結(jié)論:1.氧糖剝奪再灌注損傷后HT22細(xì)胞發(fā)生高爾基體應(yīng)激碎裂,細(xì)胞凋亡增加,其機(jī)制可能與GM130、GAAP表達(dá)水平降低有關(guān)。2.H89干預(yù)后未影響到高爾基體形態(tài)和細(xì)胞凋亡的變化。
【關(guān)鍵詞】：氧糖剝奪再灌注 高爾基體碎裂 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R741
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮略詞11-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 材料與方法14-20
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 2.2 HT22細(xì)胞培養(yǎng)15-16
• 2.3 實(shí)驗(yàn)分組16
• 2.4 氧糖剝奪再灌注模型的建立16-17
• 2.5 MTT法測(cè)定細(xì)胞活性17
• 2.6 Hoechst33258染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡率17-18
• 2.7 Western blot檢測(cè)GM130、GAAP蛋白表達(dá)18-19
• 2.8 免疫熒光檢測(cè)觀察高爾基體形態(tài)19
• 2.9 統(tǒng)計(jì)分析19-20
• 第3章 結(jié)果20-29
• 3.1 氧糖剝奪/再灌注及H89干預(yù)對(duì)HT22細(xì)胞活性的影響20-21
• 3.2 氧糖剝奪/再灌注及H89干預(yù)對(duì)HT22細(xì)胞凋亡率的影響21-23
• 3.3 氧糖剝奪/再灌注及H89干預(yù)對(duì)HT22細(xì)胞GM130、GAAP蛋白表達(dá)水平的影響23-26
• 3.4 氧糖剝奪/再灌注及H89干預(yù)后對(duì)HT22細(xì)胞高爾基體形態(tài)的影響26-29
• 第4章 討論29-34
• 4.1 氧糖剝奪再灌注模型的建立、評(píng)估及意義29-30
• 4.2 氧糖剝奪再灌注后高爾基體形態(tài)變化30-31
• 4.3 H89抑制劑干預(yù)高爾基體碎裂后對(duì)細(xì)胞凋亡的影響31-34
• 第5章 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-40
• 綜述 高爾基體在氧化應(yīng)激中促凋亡作用的研究進(jìn)展40-46
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 攻讀學(xué)位期間研究成果46-47
• 致謝47

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