本文關鍵詞：亞甲藍對實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠的保護作用

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【摘要】：目的:利用多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)國際公認的動物模型實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠,觀察亞甲藍(methylene blue,MB)對EAE小鼠的保護作用,研究MB對EAE小鼠脾組織RORγt、STAT3、Foxp3、IL-1β、IL-6、IL-17A、IL-10、TGF-βm RNA水平和IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、TGF-β蛋白濃度的影響,探索MB對EAE小鼠的保護機制,為治療MS的新方向和方法提供有意義的基礎實驗依據(jù)。方法:1選取24只8-10周齡的C57BL/6雌性小鼠(體重18-20g),將其隨機分為3組:Control組、EAE組及MB組,每組小鼠各8只。EAE組和MB組使用MOG35-55合成多肽作為抗原,輔以結核菌素、完全弗氏佐劑及百日咳毒素,建立小鼠EAE模型,Control組不予免疫。免疫當天記為第0天,自免疫第1天開始,MB組小鼠給予MB 20mg/kg每日1次腹腔注射,Control組和EAE組小鼠給予等體積生理鹽水每日1次腹腔注射。每日早晚2次對各組小鼠的體重變化和發(fā)病情況進行觀察,并進行神經(jīng)功能評分,觀察小鼠發(fā)病情況及病程。2選取30只8-10周齡的C57BL/6雌性小鼠(體重18-20g),將其隨機分為3組:Control組、EAE組及MB組,每組小鼠各10只。EAE組和MB組建立小鼠EAE模型,Control組不予免疫。免疫當天記為第0天,自免疫第1天開始,MB組小鼠給予MB 20mg/kg每日1次腹腔注射,Control組和EAE組小鼠給予等體積生理鹽水每日1次腹腔注射。每日早晚2次對各組小鼠的體重變化和發(fā)病情況進行觀察,并進行神經(jīng)功能評分。于免疫后第25天將各組小鼠處死,于無菌條件下取出小鼠脾組織進行實驗。其中每組隨機選5只利用實時定量PCR方法檢測脾組織RORγt、STAT3、Foxp3、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、TGF-βm RNA水平,另外5只采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(雙抗體夾心法)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測定小鼠脾細胞培養(yǎng)液上清液中IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A及TGF-β蛋白濃度。結果:1各組小鼠病程比較:EAE組和MB組小鼠發(fā)病率為100%,Control組小鼠不發(fā)病;MB組與EAE組小鼠相比,MB組小鼠發(fā)病時間晚,且神經(jīng)功能評分(免疫后25天)明顯降低(P0.05)。2各組小鼠脾組織中RORγt、STAT3、Foxp3、IL-1β、IL-6、IL-17A、IL-10、TGF-βm RNA水平:在免疫25天時,與Control組相比,EAE組RORγt、STAT3、IL-1β、IL-6、IL-17A m RNA水平均顯著增高(P0.05),Foxp3、IL-10、TGF-βm RNA水平均顯著減低(P0.05);與EAE組相比,MB組RORγt、STAT3、IL-1β、IL-6、IL-17A m RNA水平均顯著減低(P0.05),而Foxp3、IL-10、TGF-βm RNA水平均顯著增高(P0.05)。3各組小鼠脾細胞培養(yǎng)液上清液中IL-1β、IL-6、IL-17A、IL-10、TGF-β蛋白濃度:在免疫25天時,與Control組相比,EAE組中IL-1β、IL-6、IL-17A蛋白濃度顯著升高(P0.05),而IL-10及TGF-β蛋白濃度顯著降低(P0.05);與EAE組相比,MB組中IL-1β、IL-6、IL-17A蛋白濃度顯著降低(P0.05),而IL-10及TGF-β蛋白濃度顯著升高(P0.05)。結論:1 MB能夠推遲EAE小鼠的發(fā)病時間,降低小鼠神經(jīng)功能損傷,對EAE起保護作用。2 MB可以提高EAE小鼠脾組織中Foxp3、IL-10及TGF-β的水平,降低RORγt、STAT3、IL-1β、IL-6、IL-17A的水平。3 MB可能通過調(diào)節(jié)免疫炎癥平衡對EAE產(chǎn)生保護作用。
【關鍵詞】：多發(fā)性硬化 實驗性自身免疫性腦脊髓炎 亞甲藍 IL-1β IL-6 IL-17A IL-10 TGF-β
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R744.51
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-19
• 結果19-23
• 附圖23-30
• 附表30-31
• 討論31-36
• 結論36-37
• 參考文獻37-42
• 綜述 CD4+T細胞中Th17/Treg細胞在多發(fā)性硬化中的作用42-57
• 參考文獻49-57
• 致謝57-58
• 個人簡歷58

【參考文獻】

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1 郭敏芳;紀寧;馬存根;;多發(fā)性硬化的免疫學發(fā)病機制(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2008年06期

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本文編號：564686