本文關(guān)鍵詞：腦缺血再灌注大鼠PDCD-5的表達(dá)及依達(dá)拉奉干預(yù)后對(duì)其的影響

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【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)采用SD(Sprague Dawley)大鼠腦缺血再灌注模型,并從形態(tài)學(xué)水平、分子水平及藥物干預(yù)等方面進(jìn)行研究,檢測(cè)腦缺血再灌注大鼠海馬組織中PDCD-5和Caspase-3的表達(dá)變化,并觀察依達(dá)拉奉對(duì)缺血再灌注大鼠的海馬組織中細(xì)胞凋亡的影響及PDCD-5和Caspase-3的表達(dá)的影響,探討依達(dá)拉奉是否能通過抑制PDCD-5的表達(dá)而抑制細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮腦保護(hù)作用。方法:選擇10-12周齡,體重約250g-300g的清潔級(jí)雄性健康SD大鼠80只,隨機(jī)分為:空白對(duì)照組(n=8),假手術(shù)組(n=24),腦缺血再灌注(cerebral ischemia/reperfusion,I/R)組(n=24)及藥物干預(yù)組(n=24)四個(gè)組。又將腦缺血再灌注組和依達(dá)拉奉藥物干預(yù)組隨機(jī)分為4個(gè)亞組,分別是:6h組、1d組、3d組、7d組,每個(gè)亞組6只大鼠。選擇Longa法結(jié)合后人的改良方案,建立SD大鼠大腦中動(dòng)脈缺血2小時(shí)后再灌注模型,造模后選擇動(dòng)物行為學(xué)評(píng)分法來評(píng)價(jià)SD大鼠的神經(jīng)功能缺損情況,運(yùn)用HE染色觀察海馬病理形態(tài),運(yùn)用TTC染色觀察腦梗死的面積百分比,運(yùn)用TUNEL法檢測(cè)不同時(shí)期細(xì)胞凋亡的變化,采用Western blot方法檢測(cè)不同時(shí)期海馬組織中PDCD-5和Caspase-3蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:1.神經(jīng)功能缺損評(píng)分:空白對(duì)照組和假手術(shù)組的神經(jīng)功能缺損評(píng)分均為0分,腦缺血再灌注組(I/R組)和藥物干預(yù)組0-4分的神經(jīng)功能缺損評(píng)分均有,0分及4分的大鼠已被剔除,從同批次的大鼠中隨機(jī)補(bǔ)充,藥物干預(yù)組的的神經(jīng)功能缺損評(píng)分(實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí))與腦缺血再灌注組比較明顯減少,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.HE染色結(jié)果:在空白對(duì)照組和假手術(shù)組,可見SD大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整,邊界清晰,未見間質(zhì)水腫,沒有明顯梗塞灶。而在腦缺血再灌注組,可見海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生壞死,有明顯的數(shù)量減少,藥物干預(yù)組與腦缺血再灌注組比較,可見相對(duì)較多的神經(jīng)元,結(jié)構(gòu)稍清晰,腦組織損傷程度明顯減輕。3.TTC染色:空白對(duì)照組與假手術(shù)組未見梗死灶,腦缺血再灌注組與藥物干預(yù)組均可見明顯的梗死灶,而且藥物干預(yù)組腦梗死的面積百分比與腦缺血再灌注組比較明顯減少,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡:空白對(duì)照組及假手術(shù)組有少量的細(xì)胞凋亡,在腦缺血再灌注組中,凋亡細(xì)胞陽性數(shù)在6h時(shí)開始升高,3d時(shí)達(dá)到峰值,之后逐漸下降,但所有亞組仍比假手術(shù)組和空白對(duì)照組高,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P0.05)。在藥物干預(yù)組中,凋亡細(xì)胞陽性數(shù)的變化趨勢(shì)與I/R組一致,同樣在6h時(shí)開始升高,3d時(shí)達(dá)到峰值,之后逐漸下降,所有亞組與腦缺血再灌注組對(duì)應(yīng)的亞組比較凋亡細(xì)胞陽性數(shù)均減少,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.Western blot檢測(cè)結(jié)果:在空白對(duì)照組和假手術(shù)組中大鼠的海馬CA1區(qū),可檢測(cè)到PDCD-5和Caspase-3蛋白的表達(dá),在腦缺血再灌注組中PDCD-5蛋白及Caspase-3蛋白在6h時(shí)開始升高,3d時(shí)達(dá)到峰值,之后逐漸下降,但所有亞組仍比假手術(shù)組和空白對(duì)照組高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P0.05)。在藥物干預(yù)組中PDCD-5及Caspase-3的表達(dá)趨勢(shì)與I/R組相差無幾,同樣在6h時(shí)開始升高,3d時(shí)達(dá)到峰值,之后逐漸下降,所有亞組與腦缺血再灌注組對(duì)應(yīng)的亞組比較PDCD-5及Caspase-3的表達(dá)明顯減少,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.SD大鼠腦缺血再灌注損傷后海馬組織中PDCD-5表達(dá)升高,其與Caspase-3呈正相關(guān)。2.依達(dá)拉奉可以抑制SD大鼠腦缺血再灌注后海馬組織中PDCD-5的表達(dá),并可以抑制細(xì)胞凋亡,對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷起腦保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血再灌注 PDCD-5 細(xì)胞凋亡 依達(dá)拉奉
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-13
• 第一章 引言13-16
• 第二章 材料和方法16-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 2.2 主要藥品和試劑16-17
• 2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器17
• 2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制備17-19
• 2.5 灌注和取材及組織石蠟切片制備19
• 2.6 HE染色19-20
• 2.7 TTC染色20
• 2.8 TUNEL顯色20
• 2.9 Western blot法檢測(cè)大鼠海馬區(qū)PDCD-5 和caspase-3 的表達(dá)20-22
• 2.9.1 收集蛋白樣品20-21
• 2.9.2 電泳21
• 2.9.3 轉(zhuǎn)膜21
• 2.9.4 封閉21-22
• 2.9.5 一抗孵育22
• 2.9.6 二抗孵育22
• 2.9.7 蛋白檢測(cè)22
• 2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理22-23
• 第三章 結(jié)果23-35
• 3.1 模型制備結(jié)果及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般情況23-24
• 3.2 TTC染色24
• 3.3 HE染色24-25
• 3.4 TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡25-26
• 3.5 West-Blot檢測(cè)結(jié)果26-29
• 3.6 附圖29-35
• 第四章 討論35-40
• 第五章 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 綜述48-61
• 參考文獻(xiàn)54-61
• 主要縮寫詞表61-62
• 在讀期間發(fā)表的主要學(xué)術(shù)論文及獲獎(jiǎng)情況62-63
• 致謝63

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本文編號(hào)：551195