本文關鍵詞：高壓氧預處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用

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【摘要】：腦缺血再灌注損傷是缺血性腦卒中及繼發(fā)腦缺血性損害共有的損傷機制；缺血腦組織血液供應恢復后,腦功能沒有恢復,反而損傷加重。它的病理生理機制非常復雜,涉及眾多機制的共同參與。炎癥反應作為腦缺血再灌注損傷其中一個病理機制,其有著至關重要的作用。腦缺血后在炎癥刺激下,白細胞、小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞等炎癥細胞向缺血區(qū)域腦組織聚集,并釋放出包括細胞因子、炎癥相關酶類等炎癥介質(zhì),然后在黏附分子的引導下向內(nèi)皮細胞浸潤,促進腦缺血性損傷。缺血預處理是提前給予機體一個低于損傷閾值的缺血,機體可以對其后長時間的致死性缺血產(chǎn)生耐受性。目前,誘導腦缺血耐受的預處理方法有多種,多項研究表明,高壓氧預處理作為其中一種方法能夠誘導腦部對缺血的耐受,減輕了缺血缺氧性損傷,表現(xiàn)出良好的神經(jīng)保護作用。但是高壓氧預處理具體的神經(jīng)保護作用機制至今尚未完全清楚。高壓氧預處理對腦缺血再灌注損傷炎癥反應的影響這方面的研究亦較少,而且各種炎癥介質(zhì)在高壓氧預處理誘導腦缺血耐受效應的作用機制也有待進一步研究。本實驗利用大鼠MCAO模型,觀察高壓氧預處理對MCAO大鼠神經(jīng)行為缺損評分、腦梗死的面積和病理學表現(xiàn),以及大鼠缺血腦組織炎癥介質(zhì)NF-kB、iNOS、COX-2、IL-1β、TNF-α等的影響,從炎癥反應方面初步探討高壓氧預處理的神經(jīng)保護機制。第一部分 高壓氧預處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的作用目的：研究高壓氧預處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷是否具有保護作用。方法：36只SD大鼠按隨機原則分為假手術組、模型組及高壓氧預處理組,每組12只。模型組和高壓氧預處理組均行大腦中動脈栓塞術(MCAO)。高壓氧預處理組大鼠提前給予連續(xù)5天(2ATA,1h,每天一次)高壓氧預處理,最后一次預處理后3h再行MCAO。大鼠腦缺血再灌注24h后進行神經(jīng)功能缺損評分,并處死取腦組織用TTC染色檢測大鼠腦缺血梗死面積及行病理切片觀察。結(jié)果：高壓氧預處理組大鼠神經(jīng)功能缺損評分較模型組明顯改善(2.700000±0.632456vs.3.425000±0.636396；P0.05),腦梗死面積較模型組明顯縮小(0.335±0.062 vs.0.434±0.049；P0.05),腦組織病理學損傷程度明顯減輕。結(jié)論：大鼠MCAO局灶性缺血再灌注損傷模型能夠很好地模擬人類腦缺血疾病；高壓氧預處理對大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷具有保護作用。第二部分高壓氧預處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷炎癥反應的影響目的：研究高壓氧預處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷炎癥反應的影響。方法：按照第一部分的方法對大鼠進行高壓氧預處理和動物造模。大鼠腦缺血再灌注24h后取缺血腦組織,制作組織勻漿,用Real time PCR法檢測NF-kB(P65)、iNOS和COX-2 mRNA的表達,Western-blotting法檢測NF-kB (P65)、iNOS和COX-2蛋白的表達,酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定IL-1β和TNF-α的水平。結(jié)果：高壓氧預處理組大鼠缺血腦組織NF-kB、iNOS、COX-2 mRNA相對表達量和蛋白表達量明顯低于模型組(P0.05),高壓氧預處理組大鼠缺血腦組織IL-1β、TNF-α的含量明顯低于模型組(P0.05)。結(jié)論：高壓氧預處理可能通過抑制NF-kB的活化使下游炎癥介質(zhì)靶基因表達下降進而抑制大鼠腦缺血后炎癥反應,發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
【關鍵詞】：高壓氧預處理 腦缺血再灌注損傷 炎癥反應 神經(jīng)保護作用
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-12
• 第一部分 HBO預處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的作用12-19
• 1.1 材料和方法12-14
• 1.1.1 儀器和試劑12-13
• 1.1.2 實驗動物和分組13
• 1.1.3 HBO-PC方案13
• 1.1.4 大鼠MCAO模型的制作13
• 1.1.5 大鼠神經(jīng)功能缺損評分13
• 1.1.6 TTC染色檢測大鼠腦梗死面積13-14
• 1.1.7 切片制作14
• 1.1.8 HE染色14
• 1.1.9 統(tǒng)計學處理14
• 1.2 結(jié)果14-16
• 1.2.1 大鼠神經(jīng)功能缺損評分14-15
• 1.2.2 各組大鼠腦梗死面積15-16
• 1.2.3 Model組和HBO組大鼠腦組織病理學結(jié)果16
• 1.3 討論16-19
• 1.3.1 CIR損傷模型16-17
• 1.3.2 高壓氧預處理17-19
• 第二部分 高壓氧預處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷炎癥反應的影響19-35
• 2.1 材料和方法19-27
• 2.1.1 儀器和試劑19-21
• 2.1.2 實驗動物和分組21
• 2.1.3 HBO-PC方案21
• 2.1.4 動物模型制備21
• 2.1.5 Real time PGR 法檢測 NF-kB (P65) mRNA、iNOS mRNA 和 COX-2 mRNA21-23
• 2.1.6 Western-blotting 法檢測 NF-kB (P65)蛋白、iNOS 蛋白和 C0X-2 蛋白23-26
• 2.1.7 酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定IL-1β、TNF-a水平26-27
• 2.1.8 統(tǒng)計學處理27
• 2.2 結(jié)果27-31
• 2.2.1 各組大鼠腦組織NF-kB(P65)、iNOS和COX-2 mRNA相對表達量27-28
• 2.2.2 各組大鼠腦組織NF-kB(P65)、iNOS和COX-2蛋白表達量28-30
• 2.2.3 各組大鼠腦組織IL-1β、TNF-α的含量30-31
• 2.3 討論31-35
• 2.3.1 CIR損傷炎癥反應31-32
• 2.3.2 腦缺血后炎癥介質(zhì)的表達32-33
• 2.3.3 HBO-PC對大鼠腦缺血炎癥介質(zhì)的影響33-35
• 結(jié)語35-36
• 文獻綜述36-52
• 參考文獻43-52
• 附錄52-53
• 在校期間論文發(fā)表情況53-54
• 致謝54

【參考文獻】

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本文編號：538355