本文關(guān)鍵詞：IL-1RA-PEP融合蛋白功能及對缺血性再灌注腦損傷的治療作用研究

  更多相關(guān)文章： IL-1RA-PEP融合蛋白 腦缺血再灌注損傷 血腦屏障 炎癥反應(yīng) NF-ΚB

【摘要】：缺血性腦卒中(cerebral ischemic stroke)是由于腦部血液循環(huán)障礙而引起的腦組織損傷疾病。缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury)是卒中治療過程中存在的主要損傷形式,危害極大且預(yù)后不良。目前尚無療效好,安全性高的藥物。炎癥反應(yīng)伴隨缺血性腦損傷的發(fā)生和發(fā)展過程,IL-1是其中的一種重要炎癥因子,其在缺血再灌注后的繼發(fā)性炎癥反應(yīng)中也發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。IL-1RA是天然抗炎因子,能拮抗IL-1信號傳遞,阻斷其下游炎癥介質(zhì)的合成和發(fā)揮作用。研究表明,IL-1RA對于腦缺血性損傷,創(chuàng)傷性腦損傷和蛛網(wǎng)膜出血等腦血管疾病,均具有一定的治療作用,但療效不顯著,其主要原因是血腦屏障(BBB)限制了IL-1RA有效地進入到腦組織炎癥損傷部位。近年來,基于細胞滲透肽(CPPs)技術(shù)發(fā)展了一種非入侵輸送大分子穿透細胞膜的方法,它可以攜帶大分子滲透一些生物膜結(jié)構(gòu),包括皮膚和血腦屏障等,發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。PEP-1,兩性多肽,是細胞滲透肽的一種,目前已被廣泛應(yīng)用與輸送大分子到不同的組織器官。因此PEP-1的應(yīng)用可能為IL-1RA提供了一種新的臨床機遇,特別是為其更有效地拮抗腦缺血再灌注損傷中的炎癥反應(yīng)提供了可能性。本研究將IL-1RA和PEP-1的功能進行了融合,首次構(gòu)建了IL-1RA-PEP融合基因,在原核表達系統(tǒng)中實現(xiàn)了高效表達,表達IL-1RA-PEP融合蛋白占全菌總蛋白的30%以上。采用陰、陽離子交換層析和分子篩層析對融合蛋白進行了純化,獲得了純度為95%的IL-1RA-PEP融合蛋白。EL4細胞學(xué)活性研究表明IL-1RA-PEP具有拮抗IL-1α的生物學(xué)活性,且其拮抗能力要優(yōu)于IL-1RA;同時,熒光定位顯示IL-1RA-PEP具有穿透上皮細胞Ha Ca T細胞膜的能力,且主要聚集在細胞質(zhì)和細胞核內(nèi)。應(yīng)用線栓法大鼠大腦中動脈阻斷模型(MCAo),靜脈注射IL-1RA-PEP融合蛋白,24小時后分析其滲透大鼠腦組織的效率,以及其抑制腦組織炎癥反應(yīng)的能力。結(jié)果顯示,IL-1RA-PEP有效地滲透了缺血再灌注后大鼠腦組織,降低了大鼠腦組織梗死體積,減輕了腦水腫,改善了大鼠神經(jīng)缺陷評分,大鼠血清和腦組織中炎癥性因子含量下降,腦組織中巨噬細胞侵潤減輕,中性粒細胞活化的數(shù)量減少。初步分析IL-1RA-PEP融合蛋白對腦缺血再灌注損傷的治療機制。研究發(fā)現(xiàn),IL-1RA-PEP能夠顯著調(diào)節(jié)NF-ΚB信號通路,通過下調(diào)NF-ΚB通路,抑制了炎癥性因子的表達,及炎性細胞的侵潤和活化,對缺血再灌注繼發(fā)性炎癥反應(yīng)具有顯著的抑制作用。綜上所述,1)構(gòu)建了IL-1RA-PEP融合基因,經(jīng)過誘導(dǎo)表達,純化制備了IL-1RA-PEP融合蛋白,且其具有拮抗IL-1的生物學(xué)活性和滲透上皮細胞膜的能力;2)證明了IL-1RA-PEP對腦缺血再灌注具有較好的保護性作用,其能有效的減少腦梗死,減輕腦水腫,降低神經(jīng)缺陷,抑制腦組織繼發(fā)性炎癥反應(yīng);3)探究了IL-1RA-PEP主要是通過調(diào)控NF-ΚB信號通路,從而對腦缺血再灌注損傷起到一定的治療作用�？傊�,本研究構(gòu)建具有透膜和抗炎雙功能的融合分子IL-1RA-PEP,為研發(fā)新型治療缺血再灌注腦損傷的藥物奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：IL-1RA-PEP融合蛋白 腦缺血再灌注損傷 血腦屏障 炎癥反應(yīng) NF-ΚB
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 引言10-13
• 第一部分 IL-1RA-PEP融合基因的構(gòu)建，及融合蛋白的表達純化和功能研究13-30
• 1 材料與方法13-21
• 2 結(jié)果與分析21-29
• 3 討論29-30
• 第二部分IL-1RA-PEP融合蛋白對腦缺血再灌注損傷的治療作用研究及機制探討30-44
• 1 材料與方法30-35
• 2 結(jié)果與分析35-42
• 3 討論42-44
• 結(jié)論44-45
• 全文創(chuàng)新點45-46
• 參考文獻46-48
• 附錄48-49
• 致謝49-50
• 文獻綜述50-60
• 參考文獻55-60

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張志祥,姚其正;融合蛋白—— 一種新的生物工程技術(shù)[J];藥物生物技術(shù);2001年01期

2 李大鵬,王莉,衛(wèi)紅飛,張培因,吳秀麗,萬敏,王燕媚,王愛麗,楊世杰,王麗穎;熱休克蛋白65-MUC1融合蛋白對小鼠干擾素γ產(chǎn)生細胞的誘生作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2004年03期

3 曲梅花;于繼云;胡美茹;王守訓(xùn);黎燕;;人CD28-Fc融合蛋白在真核細胞中的表達與純化[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2005年05期

4 張榮媛;王靜;李茜;王航雁;;融合蛋白技術(shù)及臨床應(yīng)用進展[J];國際生物制品學(xué)雜志;2006年02期

5 何火聰;劉樹滔;潘劍茹;陳躬瑞;饒平凡;;GST-TAT-GFP融合蛋白的表達、純化及鑒定[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年04期

6 嚴世榮;閆瑩;孫軍;宗義強;王小波;屈伸;;TAT-EGFP融合蛋白對小鼠生物膜穿透性的研究[J];藥物生物技術(shù);2007年05期

7 馬大龍,郭淑君,鄭蕾,陳慰峰;在大腸桿菌高效表達人白細胞介素4融合蛋白[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1990年04期

8 楊和平，黃宗之;融合蛋白的生產(chǎn)技術(shù)[J];中國動脈硬化雜志;1994年04期

9 廉德君,許根俊;一種改進的融合蛋白親和層析純化方法[J];生物化學(xué)與生物物理進展;1998年03期

10 李文平,許靜,隋建華,宋增璇;抗人纖維蛋白單鏈抗體-鏈親和素融合蛋白的穩(wěn)定性及對動物纖維蛋白的識別[J];中國免疫學(xué)雜志;1999年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 祝強;黃智華;黃予良;覃揚;;rhEPO-L-Fc融合蛋白的克隆、表達、生物活性分析及初步藥代動力學(xué)研究[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2008年

2 高基民;呂建新;;白細胞介素15/鏈親和素融合蛋白的制備及活性測定[A];中國遺傳學(xué)會第八次代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

3 孫益;葛霽光;;人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子和可溶性人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子受體的融合蛋白的表達[A];中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第六次會員代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

4 楊振泉;劉巧泉;于恒秀;潘志明;焦新安;;新城疫病毒融合蛋白在轉(zhuǎn)基因水稻葉片中的表達及其免疫原性[A];中國生物工程學(xué)會第四次會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2005年

5 陳麗華;王強;侯萬國;;不同鏈接劑修飾的融合谷胱甘肽活性的研究[A];中國化學(xué)會第十二屆膠體與界面化學(xué)會議論文摘要集[C];2009年

6 王榮智;汪世華;林文雄;;抗體與酶融合技術(shù)研究[A];第十屆全國殺蟲微生物學(xué)術(shù)研討會暨全國生物農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)研究與產(chǎn)業(yè)化會議論文摘要集[C];2006年

7 劉忠華;丁元生;胡忠義;;結(jié)核分枝桿菌38kD-16kD融合蛋白在大腸桿菌中的高效表達[A];2007年中國防癆協(xié)會全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

8 祖東;徐春曉;黃國錦;姚立紅;陳愛君;朱宏建;劉沐榮;張智清;;TNFRI∶IgGFc融合蛋白基因的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的高效表達[A];首屆長三角科技論壇——長三角生物醫(yī)藥發(fā)展論壇論文集[C];2004年

9 劉先俊;劉方欣;黎波;周輝云;王琴琴;;胸腺素α1與復(fù)合α干擾素融合蛋白的表達及其生物學(xué)活性[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2008年

10 楊燕凌;;酶(蛋白)融合技術(shù)研究[A];華東地區(qū)農(nóng)學(xué)會學(xué)術(shù)年會暨福建省科協(xié)第七屆學(xué)術(shù)年會農(nóng)業(yè)分會場論文集[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 朱敏麗　通訊員 潘越;中國醫(yī)藥城首批融合蛋白試劑出口[N];泰州日報;2010年

2 吳紅梅;我省首批融合蛋白試劑出口美國[N];新華日報;2010年

3 金陵;融合蛋白試劑首次出口美國[N];中國醫(yī)藥報;2010年

4 記者 毛黎;美開發(fā)出癌癥治療新技術(shù)[N];科技日報;2009年

5 常麗君;線粒體融合蛋白2決定細胞生死[N];科技日報;2013年

6 通訊員 沈季 記者 張兆軍;抗腫瘤融合蛋白進入臨床試驗[N];科技日報;2005年

7 記者 張曄　通訊員 劉寧春;一種有效治療冠心病的融合蛋白發(fā)現(xiàn)[N];科技日報;2009年

8 ;吉大抗腫瘤生物工程新藥進入臨床試驗[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2005年

9 毛磊;新型抗流感藥物有望面世[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

10 曹麗君;英研制出新型抗流感藥物[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉星;赭曲霉毒素A納米抗體的免疫學(xué)檢測性能及分子作用機理研究[D];南昌大學(xué);2015年

2 吳芩;Npu DnaE intein的結(jié)構(gòu)與機理研究和蛋白質(zhì)雙模式成像探針的制備及應(yīng)用[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

3 錢凱;胰高血糖素樣肽-1與人血清白蛋白融合蛋白的設(shè)計與改造[D];江南大學(xué);2015年

4 司成業(yè);基于融合蛋白構(gòu)建智能超分子組裝體[D];吉林大學(xué);2016年

5 范季瀛;候選藥物重組融合蛋白VAS-TRAIL的研究[D];華東理工大學(xué);2016年

6 楊晶;三組治療艾滋病的靶向融合蛋白的基因工程研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

7 侯s，

本文編號：529416