本文關(guān)鍵詞：DNMT1基因表達減少對人腦膠質(zhì)瘤細胞增殖，克隆和周期影響的實驗研究

  更多相關(guān)文章： DNMT1基因 膠質(zhì)瘤 細胞增殖 細胞克隆 細胞周期分布

【摘要】：目的應用靶向DNMT1基因的小干擾RNA(small interfering RNA,si RNA)轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤細胞,觀察其對膠質(zhì)瘤細胞增殖,克隆和周期的影響,為臨床在基因水平上治療膠質(zhì)瘤提供方法和依據(jù)。方法利用免疫組化(immunohistochemistry,IHC)技術(shù)對62例不同級別人腦膠質(zhì)瘤組織中DNMT1基因的表達及與病理分級相關(guān)性進行檢測并分析。用以靶向DNMT1的si RNA轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的兩種人腦膠質(zhì)瘤細胞株(A172和U87),敲減膠質(zhì)瘤細胞株內(nèi)DNMT1基因,將其設為轉(zhuǎn)染組(實驗組),并將其實驗結(jié)果和僅予以轉(zhuǎn)染si RNA陰性對照序列的膠質(zhì)瘤細胞株(對照組)的實驗結(jié)果做比較并進行相關(guān)分析。應用定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(quantificational real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)分析DNMT1基因在膠質(zhì)瘤細胞中表達的變化;蛋白質(zhì)印跡法(Western blot,wb)分析DNMT1,PCNA和Cyclin D1蛋白表達變化;采用噻唑藍(MTT)比色法和克隆形成實驗檢測細胞增殖和克隆形成能力情況;應用流式細胞分析法(Flow cytometry,Fc)檢測細胞周期分布情況。觀察DNMT1基因表達減少后對A172和U87膠質(zhì)瘤細胞增殖、克隆形成和周期分布的影響。結(jié)果免疫組化結(jié)果顯示,不同級別人腦膠質(zhì)瘤組織中DNMT1基因表達均異常上調(diào),且與膠質(zhì)瘤臨床病理分級呈正相關(guān)(P0.05)。在A172和U87的膠質(zhì)瘤細胞實驗中,與對照組比較,定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應表明實驗組中DNMT1m RNA表達明顯減少(P0.01);蛋白質(zhì)印跡法表明實驗組DNMT1,PCNA和Cyclin D1蛋白表達水平明顯降低(P0.01);MTT法檢測表明實驗組中活的膠質(zhì)瘤細胞數(shù)明顯低于對照組(P0.05);細胞克隆形成實驗表明,實驗組中膠質(zhì)瘤細胞克隆形成能力和對照組相比較明顯受到抑制(P0.01);流式細胞分析法顯示,實驗組中的膠質(zhì)瘤細胞周期中G0/G1明顯延長P0.01㖞。上述的實驗結(jié)果差異均具有統(tǒng)計學意義。結(jié)論靶向DNMT1基因的si RNA重組質(zhì)�？梢詼p少人腦膠質(zhì)瘤細胞內(nèi)DNMT1基因的表達,從而抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖及克隆形成能力,并使膠質(zhì)瘤細胞周期中G0/G1明顯延長。
【關(guān)鍵詞】：DNMT1基因 膠質(zhì)瘤 細胞增殖 細胞克隆 細胞周期分布
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1. 前言11-12
• 2. 材料和方法12-35
• 3. 結(jié)果35-42
• 4. 討論42-44
• 5. 結(jié)論44-45
• 6. 參考文獻45-48
• 附錄48-50
• 致謝50-51
• 綜述51-68
• 參考文獻59-68

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本文編號：524063