本文關(guān)鍵詞：莫諾苷對(duì)缺血性腦卒中后神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化的影響及機(jī)制研究

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【摘要】：缺血性腦卒中有發(fā)病率高、致殘率高和死亡率高等三高的特點(diǎn),已成為我國(guó)居民的第二死因和成人第一位致殘?jiān)?對(duì)社會(huì)和家庭均造成了很大的負(fù)擔(dān)。缺血性腦卒中能刺激內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖短時(shí)間內(nèi)躍遷,發(fā)揮自體修復(fù)作用,為腦卒中的治療提供了新的思路,但腦損傷所誘導(dǎo)的神經(jīng)發(fā)生過(guò)程短暫,不足以修復(fù)腦缺血所造成的損傷,因此尋找內(nèi)源性的藥物或手段,進(jìn)一步增強(qiáng)腦損傷誘導(dǎo)的自體干細(xì)胞增殖與分化的過(guò)程尤為重要。本論文研究目的是基于首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院王文教授在2007年所提出的腦卒中治療“神經(jīng)血管穩(wěn)態(tài)重構(gòu)”假說(shuō)基礎(chǔ)上,深入探討莫諾苷對(duì)缺血性腦卒中后大腦神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化的影響及其機(jī)制研究。選取體重在260g-280g之間的SD雄性大鼠,線栓法制作大鼠局灶性腦缺血再灌注(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。缺血30min后再灌注,待大鼠清醒后用Zea Longa法對(duì)其進(jìn)行神經(jīng)功能行為學(xué)評(píng)分,評(píng)估造模是否成功。將造模成功者隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、模型組(model)、莫諾苷小劑量組(morroniside+30mg/kg)、莫諾苷中劑量組(morroniside+90mg/kg)和莫諾苷大劑量組(morroniside+270mg/kg)。給藥7天、14天、28天后分別用灌注取腦和新鮮取腦的方式取材。運(yùn)用免疫熒光法以及免疫印跡法檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化相關(guān)指標(biāo),并觀察ephrin-B2/EphB4信號(hào)通路蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果顯示:(1)MCAO造模7、14天后,SVZ區(qū)B型神經(jīng)干細(xì)胞、C型神經(jīng)元前體細(xì)胞及A型神經(jīng)母細(xì)胞數(shù)目均明顯增多,14天時(shí)模型組B型神經(jīng)干細(xì)胞、C型神經(jīng)元前體細(xì)胞逐漸降低,A型神經(jīng)母細(xì)胞逐漸升高,28天時(shí)B、C、A型細(xì)胞均恢復(fù)至假手術(shù)水平;缺血再灌注7、14天后,缺血側(cè)皮層B型神經(jīng)干細(xì)胞、C型神經(jīng)元前體細(xì)胞數(shù)目及a型神經(jīng)母細(xì)胞數(shù)目顯著增多,14天時(shí)模型組b型神經(jīng)干細(xì)胞、c型神經(jīng)元前體細(xì)胞、a型神經(jīng)母細(xì)胞逐漸升高,28天與假手術(shù)組相比無(wú)明顯差別。表明局灶性腦缺血后,內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖7天時(shí)達(dá)高峰,之后開(kāi)始往缺血側(cè)皮層遷移或分化為神經(jīng)母細(xì)胞遷移至患側(cè)皮層,而28天時(shí)也未發(fā)現(xiàn)有新生神經(jīng)元,可能由于損傷的皮層不能提供神經(jīng)細(xì)胞分化所需的微環(huán)境。給予莫諾苷后,7天、14天svz區(qū)和皮層b型神經(jīng)干細(xì)胞、c型神經(jīng)元前體細(xì)胞數(shù)目均進(jìn)一步增加,28天時(shí)a型神經(jīng)母細(xì)胞及新生神經(jīng)元增多,莫諾苷可以促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化且維持到28天時(shí)不降低,并可促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化為神經(jīng)元。(2)ephb4、ephrin-b2在缺血側(cè)皮層b型神經(jīng)干細(xì)胞、c型神經(jīng)元前體細(xì)胞、a型神經(jīng)母細(xì)胞及成熟神經(jīng)元均有表達(dá)。ephrin-b2/ephb4信號(hào)通路可能參與莫諾苷促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化的過(guò)程。(3)mcao造模7天后,免疫熒光顯示,皮層梗死周邊ephrin-b2、ephb4細(xì)胞數(shù)目顯著增加,表明腦缺血后ephrin-b2/ephb4信號(hào)通路被激活,而給予莫諾苷能有效的調(diào)節(jié)該信號(hào)通路蛋白的表達(dá),促進(jìn)ephrin-b2及其受體ephb4的合成,并對(duì)下游關(guān)鍵蛋白abl的激活有促進(jìn)作用。同時(shí)腦缺血刺激引起ephrin-b2/ephb4信號(hào)通路下游周期蛋白cyclind1、cdk4、cdk6,及ephb4+/nestin+、ephb4+/brdu+雙陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)升高,表明腦缺血后的神經(jīng)干細(xì)胞增殖與ephrin-b2/ephb4信號(hào)通路有關(guān),莫諾苷可進(jìn)一步調(diào)節(jié)ephrin-b2/ephb4信號(hào)通路促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞細(xì)胞增殖。(4)mcao造模7天后,ephb4+/sox2+、ephb4+/dcx+雙陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目顯著增加,莫諾苷可以促進(jìn)ephb4+sox2+、ephb4+dcx+雙陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)一步增加,到28天時(shí),莫諾苷組ephb4+/neun+陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目顯著增加。說(shuō)明莫諾苷可通過(guò)ephrin-b2/ephb4信號(hào)通路促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化及定向分化為神經(jīng)元。綜上得出結(jié)論:莫諾苷可以促進(jìn)缺血性腦卒中后svz區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化并遷移至缺血側(cè)皮層,促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元,對(duì)神經(jīng)功能的恢復(fù)起至關(guān)重要的作用,并且ephrin-b2/ephb4信號(hào)通路參與莫諾苷促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化的過(guò)程,該通路很可能是莫諾苷促神經(jīng)血管穩(wěn)態(tài)重構(gòu)的具體靶點(diǎn),對(duì)腦卒中等疾病的臨床治療具有重要的指導(dǎo)意義。
【關(guān)鍵詞】：莫諾苷 缺血性腦卒中 神經(jīng)干細(xì)胞 增殖與分化 ephrin-B2/EphB4信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮寫(xiě)12-13
• 前言13-15
• 材料與方法15-23
• 結(jié)果23-28
• 附圖28-43
• 附表43-50
• 討論50-53
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 結(jié)論58-59
• 綜述 大腦神經(jīng)發(fā)生相關(guān)信號(hào)通路的研究進(jìn)展59-72
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 致謝72-73
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 李亞健;李焰生;;室管膜下區(qū)神經(jīng)發(fā)生的研究進(jìn)展[J];神經(jīng)病學(xué)與神經(jīng)康復(fù)學(xué)雜志;2009年01期

2 劉罡;吳毅;;局灶性腦缺血對(duì)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞激活及遷移的影響[J];中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2009年02期

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本文編號(hào)：521839