本文關鍵詞：組蛋白乙�；窴AT8在膠質母細胞瘤細胞增殖中的作用及其機制研究

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【摘要】：膠質瘤是最常見也是最致命的惡性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤。其最大特點是具備強侵略性,能較輕易的侵入到周圍正常的腦組織。臨床治療的外科手術無法完全切除腫瘤組織,同時外科手術后殘留的腫瘤細胞可能會受到刺激形成脫離瘤體,進一步增加膠質母細胞瘤在正常腦組織中的侵襲程度。雖然目前神經(jīng)外科手術技術有很大提高以及化療、放療和綜合治療以及生物治療手段得以應用,但是膠質母細胞瘤患者的存活期仍然為得到明顯增加。對于現(xiàn)階段膠質母細胞瘤的治療效果不佳的情況,我們將主要探究膠質母細胞瘤細胞在體外和小鼠模型中的增殖的機制,期望能抑制膠質母細胞的增殖,促使腫瘤組織只存在一定范圍;從而為外科手術治療徹底去除瘤體并規(guī)避正常腦組織,從而為進一步的放療和化療提供幫助。KAT8是HAT中的一種屬于MYST家族的一個重要成員。其結構除了包含HAT結構域外還具有染色質區(qū)域和高度保守的MYST結構域,該結構域由輔酶CoA結合位點、染色質結合位點和C2HC型鋅指結構域組成。KAT8最初被命名為Mof,被確定在果蠅體內(nèi)作為劑量補償?shù)囊徊糠�。KAT8除了可以使組蛋白H4K16位點乙酰化從而使基因超表達外,還可使P53的K120位點乙�；５侥壳盀橹苟喾N實驗結果顯示KAT8在胚胎形成和發(fā)育中扮演重要角色。本文初步研究了KAT8在膠質母瘤細胞增殖中的作用以及可能的機制。實驗結果表明KAT8基因在膠質母細胞瘤細胞系U87、A172、LN229中均有較顯著的表達。利用慢病介導的shRNA干涉系統(tǒng)對KAT8基因表達下調(diào),并通過qRT-PCR與Western blot技術檢測基因下調(diào)情況。在干涉KAT8的U87、A172和LN229細胞系中利用MTT、BrdU標記技術檢測細胞增殖情況,結果顯示細胞的增殖受到明顯的抑制,同時使用流式細胞儀檢測到細胞周期阻滯在G2期,并伴隨相應周期蛋白的表達下調(diào)。通過建立荷瘤小鼠模型檢測KAT8在個體水平中對膠質母細胞瘤細胞的增殖和成瘤能力的影響。同時對小鼠腫瘤進行HE、IHC、Western等檢測,發(fā)現(xiàn)在干涉的細胞形成的腫瘤的明顯的下降,同時相對應的KAT8以及Ki67兩個基因的表達也收到抑制。在shRNA的干涉體系實驗中發(fā)現(xiàn)EGFR信號通路受到抑制,在Western檢測發(fā)現(xiàn)EGFR/AKT/ERK信號通路呈關聯(lián)性。進一步通過對KAT8在膠質母細胞瘤細胞中進行過表達,檢測發(fā)現(xiàn)膠質母細胞瘤細胞的增殖與成瘤能力有明顯的提高。同時EGFR/AKT/ERK信號通路中的三種磷酸化水平有明顯的提高。為了確認KAT8是通過調(diào)控EGFR/AKT/ERK信號通路來調(diào)控膠質母細胞瘤的增殖、成瘤以及侵襲。在細胞培養(yǎng)時使用EGFR抑制劑Erlotinid,并通過Western檢測相關基因的表達發(fā)現(xiàn)KAT8基因是通過對EGRF/AKT/ERK通路進行調(diào)控膠質母細胞瘤細胞增殖與侵襲。從而初步確定了KAT8是通過介導表皮生長因子EGFR信號通路的激活調(diào)節(jié)來對膠質母細胞瘤細胞進行調(diào)控。
【關鍵詞】：膠質母細胞瘤 組蛋白乙酰化酶KAT8 細胞增殖 表皮生長因子EGFR 腫瘤發(fā)生
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 第一章 文獻綜述12-21
• 1.1 蛋白質乙�；�12
• 1.2 組蛋白乙�；c染色質調(diào)控12-13
• 1.3 組蛋白乙�；�13-15
• 1.3.1 HAT B14
• 1.3.2 HAT A14-15
• 1.4 KATs與癌癥15-21
• 1.4.1 Gcn516
• 1.4.2 PCAF16-17
• 1.4.3 CBP/p30017-19
• 1.4.4 Tip6019-21
• 第二章 引言21-25
• 2.1 研究背景及意義21-22
• 2.2 實驗內(nèi)容和技術路線22-25
• 2.2.1 實驗內(nèi)容22-23
• 2.2.2 技術路線23-25
• 第三章 KAT8在惡性膠質瘤細胞中的表達25-37
• 3.1 材料與儀器試劑25-26
• 3.1.1 實驗材料25
• 3.1.2 實驗儀器25-26
• 3.1.3 實驗試劑26
• 3.2 實驗方法26-34
• 3.2.1 細胞培養(yǎng)26-30
• 3.2.2 實時熒光定量PCR30-32
• 3.2.3 Western Blot32-34
• 3.3 實驗結果與分析34-35
• 3.3.1 惡性膠質瘤細胞中KAT8的蛋白和mRNA表達34-35
• 3.4 討論與小結35-37
• 第四章 KAT8對惡性膠質瘤細胞增殖及腫瘤形成能力的影響37-55
• 4.1 材料與儀器試劑37-38
• 4.1.1 實驗材料37
• 4.1.2 實驗儀器37-38
• 4.1.3 實驗試劑38
• 4.2 實驗方法38-48
• 4.2.1 干涉載體的構建38-40
• 4.2.2 慢病毒轉染40-42
• 4.2.3 Western-blot42-44
• 4.2.4 MTT法測生長曲線44
• 4.2.5 Brd U標記熒光染色44-45
• 4.2.6 軟瓊脂單克隆形成檢測45-46
• 4.2.7 小鼠體內(nèi)成瘤實驗的檢測46-47
• 4.2.8 免疫組織化學47-48
• 4.3 實驗結果與分析48-53
• 4.3.1 KAT8對惡性膠質瘤細胞增殖能力48-50
• 4.3.2 KAT8對惡性膠質瘤單克隆形成能力的影響50-51
• 4.3.3 KAT8對惡性膠質瘤體內(nèi)成瘤能力的影響51-53
• 4.4 結果與討論53-55
• 第五章 KAT8對惡性膠質瘤細胞細胞周期的調(diào)控55-65
• 5.1 材料與儀器試劑55-56
• 5.1.1 實驗材料55
• 5.1.2 實驗儀器55
• 5.1.3 實驗試劑55-56
• 5.2 實驗方法56-59
• 5.2.1 細胞周期檢測56-57
• 5.2.2 Western-blot57-59
• 5.3 實驗結果與分析59-62
• 5.3.1 降低KAT8表達會使細胞周期阻滯在G2期59-61
• 5.3.2 KAT8對EGFR信號通路的影響61
• 5.3.3 在腫瘤中KAT8也對EGFR信號通路影響61-62
• 5.4 結果討論62-65
• 第六章 KAT8調(diào)控惡性膠質瘤細胞增殖的機制研究65-75
• 6.1 材料與儀器試劑65-66
• 6.1.1 實驗材料65
• 6.1.2 實驗儀器65
• 6.1.3 實驗試劑65-66
• 6.2 試驗方法66-71
• 6.2.1 細胞培養(yǎng)66-68
• 6.2.2 Western-blot68-70
• 6.2.3 MTT法測生長曲線70
• 6.2.4 小鼠體內(nèi)成瘤實驗的檢測70-71
• 6.3 實驗結果與分析71-73
• 6.3.1 KAT8對惡性膠質瘤的調(diào)控有EGFR參與71-72
• 6.3.2 EGFR確為KAT8的下游信號通路72-73
• 6.4 結果討論73-75
• 第七章 全文總結75-79
• 7.1 組蛋白乙�；窴AT8在膠質瘤中普遍存在75
• 7.2 組蛋白乙酰化酶KAT8對惡性膠質瘤細胞增殖及腫瘤形成能力的影響75-76
• 7.3 組蛋白乙�；窴AT8對惡性膠質瘤細胞周期的調(diào)控76
• 7.4 EGFR是組蛋白乙�；窴AT8的下游效應信號通路76-77
• 7.5 討論77-79
• 參考文獻79-85
• 縮略詞表85-87
• 碩士在讀期間發(fā)表的文章及參研課題情況87-89
• 致謝89

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